微波辐射在PTAH法染心肌中的作用和应用

1、微波辐射在PTAH法染心肌中的作用和应用微波辐射能使液体中极性分子高频振动，增加液体分子间的碰撞，从而使液体内部迅速产热和某些化学反应加快。许多作者利用此原理进行了微波辐射固定组织、微波辐射结合固定液固定组织1-2等，均取得良好的效果，但还没发现用微波辐射结合固定液固定心肌或用微波辐射结合染液染心肌具体方法的报道，为了拓展微波在组织切片的应用，进一步探讨微波辐射在 PTAH 法染心肌中的作用和应用的具体方法，本文具体介绍微波辐射分别结合固定液和染液在 PTAH 法染心肌细胞的过程中对材料进行固定和染色的方法。1 材料与方法1.1 材料取鸡心 （ 大小为 1 cm×0.5 cm&ti

2、mes;0.5 cm） 作为实验材料，硝酸酒精固定液3,苏木精染液，海尔牌 H-R7751MS 型家用微波炉（750W,分 6 档）为微波辐射仪器。1.2 方法1.2.1 取材与固定 将材料分为 6 个对照组，6 个实验组。对照 1组固定 24 h,对照 2 组固定 30 min,对照 3 组固定 24 h,对照 4组固定 24 h,对照 5 组固定 24 h,对照 6 组固定 24 h ;实验 1 组固定 30 min →微波 3 min,实验 2 组固定 1 h →微波 3 min,实验3 组固定 24 h,实验 4 组，固定 24 h,实验 5 组固定 24 h,实验

3、 6组固定 24 h.1.2.2 漂洗 70% 酒精 4 h → 50% 酒精 4 h →水洗 4 h 以上。1.2.3 染色 对照1组浸染10 d,对照2组浸染10 d,对照3组浸染5 h,对照 4 组浸染 1 d,对照 5 组浸染 2 d,对照 6 组浸染 3 d ;实验 1组浸染10 d,实验2组浸染10 d,实验3组浸染5 h→微波达5 mi（n低于 45），实验 4 组浸染 1 d →微波达 5 min（低于 45），实验 5组浸染 2d →微波达 5 min（低于 45），实验 6 组浸染 3d →微波达 5 min（低于

4、 45）。微波辐射的档次是根据微波辐射时间和最高温度设计并预先测试后而选定的。微波辐射方法同固定。对照3、4、5、6 组分别染色 5 h、1 d、2 d、3 d,实验 3、4、5、6 组分别染色 5 h、1 d、2 d、3 d 后加低档微波 5 min（温度低于 45）。1.2.4 水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋 流水冲洗 24 h,各级酒精脱水。常规透明与浸蜡，石蜡包埋。1.2.5 切片、贴片、烤片、脱蜡、封片 切片的厚度为 6 ?m,浮漂法贴片，二甲苯中脱蜡，中性树胶封片。2 结果2.1 对照组结果对照 1 组组织染色深，细胞结构完好，闰盘和环纹不清楚。对照 2 组组织染色深，细胞有收缩严重

5、。对照 3 组组织染色浅且不均匀。细胞的各部分结构模糊不清。对照 4、5、6 组组织染色浅但较为均匀，在目镜为10倍物镜为40时可以清楚的看到细胞核、核仁，无闰盘，环纹不清楚。2.2 实验组结果实验 1、2 组细胞结构完整无损伤和收缩，闰盘清楚，环纹不清楚，实验 2 组结果比实验 1 组更理想。实验 3、4、5、6 组组织染色较深且比较均匀，细胞结构完整，无损伤和收缩，细胞核与细胞质的分化十分明显，在目镜为 10 倍物镜为 40时可以清楚的看到细胞核、核仁等结构，但实验 3、4 组看不到闰盘，实验 5、6 组可以清楚的看见闰盘，以实验 5 组效果最佳。3 讨论本实验结果显示染色不足的对照组无闰

6、盘 , 环纹不清楚，而用相同时间进行染色然后用一定强度的微波进行处理的实验组不仅环纹清楚，有的闰盘也比较清楚，这说明微波对组织的染色具有促进作用，即在 PTAH 法染心肌细胞中利用微波结合硝酸酒精固定液固定心肌细胞效果良好 , 节省时间；在 PTAH法染心肌细胞中利用微波结合苏木精染液染心肌细胞效果良好，节省时间。参考文献：1 Loqin GR,Leonard JB,Dvorak AM. Calibration andstandardization of microwave ovens for fixation of brain and peripheralnerve tissueJ. Methods,1998,15（2） :107-117.2