植物食品通过分散SPE进行乙腈提纯隔离与移除之后使用GC-MS与或LC-MSMS 测定杀虫剂残留物QuEChERS方法

1、植物食品通过分散SPE进行乙腈提纯/隔离和移除之后使用GC-MS和/或LC-MS/MS测定杀虫剂残留物QuEChERS方法1 范围 本欧洲标准描述了植物性食物中的农药残留分析方法，如水果（包括干果制品），蔬菜，谷物及其加工品。该方法是在大量的物品/农药组合的基础上研究的。2原理 用乙腈提取质地均匀的样品。在初始提取之前，含水量低的样品（80%）需要另外加约10g水。添加硫酸镁、氯化钠和柠檬酸盐缓冲物，强烈振荡将混合物并用离心机进行相分离。等分试样的有机相是经采用批量吸附剂的分散固相（d-spe）提取掉，以及硫酸镁去除残余的水。随着加入少量的甲酸酸化，清理氨基吸附剂提取物（如二级阿明吸附，PSA

2、），提高碱敏感性农药的储存稳定性。最后的提取物可直接用于GC和LC的定性分析。定量通常是使用内标，即乙腈初次加入后添加到提取物中。这个方法的简单概述是附件C所示的流程图。3 试剂3.1 一般和安全方面 除非另有规定，使用认可的分析纯试剂。采取一切预防措施，以避免可能被水，溶剂，吸附剂，无机盐等污染。 免责声明本标准涉及几个市售的产品和适合该方法流程的仪器。此信息是为了方便本欧洲标准的使用者，和被产品命名的欧洲标准委员会不被构成背书。如果他们可以导致相同的结果，等效的产品可能被使用。3.2 水，HPLC级3.3 乙腈，HPLC级3.4 甲醇，HPLC级3.5 甲酸铵3.6 无水硫酸镁，砂砾，例如

3、Fluka63135号 在马弗炉中加热到550，邻苯二甲酸盐可以被去除（如过夜）。3.7 无水硫酸镁，细粉 在马弗炉中加热到550，邻苯二甲酸盐可以被去除（如过夜）。3.8 氯化钠3.9 柠檬酸二钠盐1.5水合物3.10柠檬酸钠3.11氢氧化钠溶液，物质的量浓度C= 5moll溶解2g氢氧化钠于5ml水中，并稀释至10ml。3.12缓冲盐混合溶液第二次提取和分配： 称取4 g 0.2无水硫酸镁（3.6），1 g0.05g氯化钠，1g0.05 g柠檬酸钠和0,5g0.03g柠檬酸二钠盐1.5水合物于烧杯中（4.11）。这些量是约10毫升的水样品中的。 高酸性样品（pH3），在添加缓冲盐后pH值通

4、常是低于5。为了更好地保护酸不稳定化合物，可以通过添加5 mol/l 氢氧化钠溶液(3.11)升高pH值：对于柠檬、酸橙和醋栗，可直接向盐混合物添加600l氢氧化钠溶液，对于木莓则是200l。注意 最好是提前准备足够数量的缓冲盐混合物，以便提取可以迅速地进行而不中断。盐混合物的制备可以极大地便利分样器的使用（4.12）。上述的盐的量是用于约含10g水的样品部分。3.13乙腈-甲酸混合溶液，体积比例=5ml甲酸100ml用乙腈将0.5ml甲酸（质量分数W95%）稀释至10毫升（3.3）。3.14二级阿明吸附剂 例如，Bondesil-PSA40 m Varian No. 122130231) 其

5、他氨基酸吸附剂可以使用，但需证是等效的，特别是关于被分析物的损失和最终提取物的pH值。3.15石墨化炭黑吸附剂（GCB），例如Supelco Supelclean Envi-Carb1) SPE Bulk Packing, No. 57210U 其他石墨化碳吸附剂可以使用，但需证是等效的，特别是关于分析物的损失。3.16吸附混合物1：GCB（3.15）/硫酸镁无水细粉（3.7）混合，1 + 59质量比 这两种成分混合成均匀的混合物。3.17吸附混合物2：GCB（3.15）/硫酸镁无水细粉（3.7）混合，1 + 19质量比 这两种成分混合成均匀的混合物。注意 强烈建议提前准备吸附混合物1(3.1

6、6)和2(3.17)，并将它们存储在可密封的容器内。为净化提取物，根据5.4.3将预混吸附混合物1或2加入到离心管(4.4)。3.18 碳十八吸附剂（十八烷基甲硅烷改性硅胶），50m散装材料。3.19乙腈内部标准和质量控制标准溶液，= 10 gml至50 gml表1列出可能用于这种方法的内部标准（istds）和质量控制（QC）的标准。列出的建议浓度值 ()是指 ISTD溶液应在第一提取步骤（5.2）中加入。这溶液（）适当稀释应准备用于标准溶液的制备。更多详情见3.22。3.20 农药原液 制备个别浓度分析标准储备溶液，足以制备用于标准溶液制备的复合农药工作溶液（3.21）。 通常，原液要储存在

7、低于18 的环境下。定期检查原液的稳定性 2。在某些情况下，酸或碱的加入可以提高稳定性和延长贮存期。在撤退之前，任何部分从该溶液再溶解，会有沉淀发生。3.21农药的工作溶液 由于这种方法的广泛适用性和由于部分农药不同的pH稳定性，不止一个工作溶液中含有一种或多种农药可以覆盖整个感兴趣的杀虫谱。这些都是按规定所需农药原液的体积（3.20）混合在一起的和用适当的乙腈稀释的。这些混合农药浓度应足以允许制备所需基质匹配的标准（见3.22.2），用适当的空白样品提取液稀释（例如小于20%）。 通常，工作农药溶液要储存在低于18 的环境下。定期检查这些混合农药的稳定性。某些情况下，酸或碱的加入可以提高稳定

8、性和延长贮存期。3.22标准溶液（校准混合物）3.22.1溶剂型标准 溶剂型标准的制备是将已知体积的农药工作溶液（见3.21）和ISTD溶液（见3.19)混合，用乙腈定容。 需用内标溶液的体积（）将取决于将制备的标准溶液的体积（），以确保内标浓度以类似于样品测试溶液。例： 如果制备1ml溶剂型标准，加入ISTD溶液的体积应包含ISTD质量(=)，是在5.2.3用10ml乙腈提取的检测部分中加入ISTD质量的10倍。因此，表明要适当稀释内标溶液浓度（这里=0.1。然后同样的吸管量ISTDS加入到穗试验样品和作为标准溶液的制备。表2示出了应添加到测试部分（5.2.3）和标准溶液（3.22）中的内标

9、质量的比率。 多标准的溶液的制备包含广泛的浓度范围，可制备校准曲线（见6.2）。注意 浓度为1 g / mL的农药相当于一个10g样品的1mg/kg的残留量（如样品的水含量30%）或5 g样品的2mg/kg残留量（如谷类）。3.22.2基质匹配标准制备基质匹配标准与制备溶剂型标准一样，然而，而不是使用纯乙腈提取空白样品(准备如5.1至5.4所述,但是没有加入ISTD)。以尽量减少在色谱过程中因基质效应引起的误差，最好选择类似农产品（如苹果样品，胡萝卜样品等）。当加入农药工作溶液超过20%时，应稀释空白样品提取液，体积调整可能必要的，以避免因在样品提取物和基质匹配标准之间的基质诱导的增强效果的差

10、异的误差。 基质匹配标准农药的稳定性会低于纯乙腈标准，必须检查得更彻底。 表2 应添加到测试部分（5.2.3）和标准溶液（3.22）中的内标质量的比率（校准混合物）3.23冷水（4C）3.24 干冰3.25流动相A1：甲酸铵水溶液，C=5 mmolL3.26流动相B1：甲醇-甲酸铵溶液，C=5 mmolL3.27流动相A2：醋酸水溶液，= 0,1ml冰醋酸L3.28流动相乙腈B2：乙腈-乙酸溶液，= 0,1mL冰醋酸L3.29流动相A3：甲醇/水A32+8（VV）与5mmol/L甲酸铵3.30流动相B3：甲醇/水B39 +1（VV）与5mmol/L甲酸铵4设备实验室常用仪器，特别是以下：4.1

11、试样加工设备，如Stephan UM 5 universal4.2高速分散装置分散元件的直径应适合所用的离心管（4.4）的开口。4.3自动移液枪，适用于处理10 L至100L，200 L 至1 000L和1mL至10mL。注意 10毫升的玻璃移液管可以替代（1ml至10ml)使用。4.4带螺旋盖离心管，50ml例 a) 50ml离心管由聚四氟乙烯制成，或是 b)一次性带螺旋帽50ml聚丙烯离心管4.5 单用带螺旋帽聚丙烯离心管，10ml或12ml4.6 10ml的乙腈溶剂分配器，用于5.2.34.7 离心机，适用于离心管用于步骤（4.4和4.5）和可实现达到3 000克。4.8 粉末漏斗，要适

12、合离心管的开口4.9 注射瓶，1.5ml，适用于气相色谱和液相色谱自动进样器，如果必要时用微量注射4.10螺旋盖玻璃瓶，如20ml，如必要，用于过量的最终提取存储4.11塑料杯（堆叠），25毫升，用于存储缓冲盐混合物部分（3.12）。4.12分样器，自动分盐和吸附剂例如从Retsch/Haan, PT 100 or Fritsch/Idar-Oberstein, Laborette 27 or Brkle/Lrrach, Repro high-precision sample divider2）。它们的使用是可选的但强烈建议处理大量样品。注意 前两个是分配缓冲盐混合物较好的（3.12），而 B

13、rkle Repro 是为少量固体设计的和更加适合分离PSA (3.14)/硫酸镁（3.6）的混合物需要分离SPE（5.4.2）。从加拿大进口的10毫升聚丙烯管，17mm84mm，货号T550-10AT2）（4.5）完全符合Brkle Repro。4.13振动装置，例如涡旋（用于回收试验）4.14 LC-MS/MS系统 配有电喷雾电离（ESI）接口（见附件一）4.15气相色谱-质谱联用系统，配备适当的探测器，如MS，MS / MS，TOF和PTV喷射器溶剂的发射方式（见附录A给出的气相色谱-质谱联用设备）5 步骤5.1样本的制备和存储5.1.1一般 在测试样品（有时也被称为“样品”）中，样品处

14、理和存储程序对残留量无显著影响。处理也应使试样均匀，足以使子采样的变化是可以接受的。如果一个单一的分析部分不能代表测试样本，应分析较大的或重复的部分，提供一个更好的估计真实值。粉碎的程度应支持定量排渣。5.1.2实验室样品 完全或大部分损坏或退化的实验室样品是不应被分析夫人。如果可能的话，在发生任何重大的物理或化学变化前，在任何情况下，样品到达后应立即准备实验室样品。如果一个实验室样品不能及时做好准备，应该是储存在适宜的条件下，以保持新鲜和避免变质。一般来说，在准备前，实验室样品不应超过3天。干的或类似加工样品应在其保质期内分析。5.1.3半成测试样品 半成测试样品的准备，用部分的实验室样品测

15、试最大残留限量。其余部分可能被清除。 选出的实验室样品部分应该具有代表性（如通过细分为四份、选择对角部分）。对于小单位的样品（如小水果如草莓，豆类，谷物），在称量部分半成测试样品前，样品必须充分混合。当样品是由较大的单位组成，从每个单元选取楔形部分（例如瓜）或截面（如黄瓜），包括皮肤（外表面） 2 。5.1.4试验样品 从每一半成测试样品，任何会导致均化困难的部分都应被剔除。在含石头的水果中，石头应该被剔除。被剔除的部分应该要记录保存。应采取预防措施，以避免任何的果汁或果肉损失。这是测试样品。残留量的计算应根据原试样的质量（包括石头）。 在测试样品的均匀性是不充分的或可能由于明显大粒径而影响残

16、留物的提取，应使用适当的手段进行密集的粉碎。在室温条件下，如果肉和汁分离或农药降解不显着。在冷冻状态下粉碎的样品，不稳定的化学农药的损失明显减少，通常会导致更小的颗粒尺寸和更加均匀。粉碎前，用刀粗切割样品（如3厘米3厘米）和放进冰箱（如-18 过夜）以便于加工。处理也可以辅助，通过保持在温度0 以下进行低温研磨改进（使用干冰或液氮）。特别是水果和蔬菜，相比于室温研磨，低温研磨使表皮坚韧的样品均质化（如番茄或葡萄）更有效。鉴于表皮经常有非系统性农药，低温研磨大大降低了子采样的变异。当在较低的温度下处理试验样品，应避免高湿度造成结露。残余的二氧化碳应该允许充分消散，二氧化碳的贡重量可以忽略不计。5

17、.1.5试验部分 单项测试部分，每个充分的分析都是从综合测试中提取出来。这些测试的部分应该立即进行分析。如果测试部分不能直接进行分析，这测试样品或测试部分应冻结到直至需要为止。如果测试部分是从冷冻保存后的试验样品中取出，测试样品应在取出测试部分前混合，以确保均匀性已经重新建立。5.1.6干果和类似物品的均质化（含水量30%） 加入850g冷水（3.23）到500克冻干果制品，并使混合物均匀（可以加入干冰）。5.2第一提取步骤5.2.1称重 将一个具代表性的粉碎均匀的样品测试部分（ma）转移到50ml的离心管中（4.4）。在水果和蔬菜重10g0,1 g的情况下（ma）加入到离心管。干果匀浆如5.

18、1.6描述，称重13.5 g对应5 g样品（ma）。干燥的样品材料像谷物制品、蜂蜜等，称重均质部分5g0.05 g（ma）。发酵产品和提取物丰富的香料称2g0.03g（ma）。5.2.2水的添加 水含量低于80%的样品应加入足够的冷水（3.23），使总水含量约10克。见表3特定的水含量和相应的测试部分水的添加量。注意 来自5.1.6匀浆不需要添加水。5.2.3溶剂和内标的添加加入10ml乙腈和一定量的小体积的ISTD溶液(,如100 l），这溶液是表1中给出的含有一个或几个化合物的示例性浓度（）。5.2.4提取 盖好管子和摇晃震荡1分钟。如果样品的粉碎程度不够或残留不容易从基质中提取，提取的时

19、间可延长（例如使用机械振动筛振荡20分钟）或使用高速分散器（例如ULTRA-TURRAX）。分散原件浸入样品-乙腈混合物，进行约2至5分钟高速粉碎。在任何情况下都要确保目标农药无明显降解发生。当添加ISTD溶液后，没有必要冲洗分散元素。然而，它依然要在下一个样品使用前彻底清洗，以避免交叉污染。 要确保采用的分散原件可以通过离心管口（4.4）。 样品应冷冻或在解冻过程时（除水含量20%的干样品）提取。如果样品是采用常温提取，应确保无明显的目标农药降解发生。5.3第二萃取步骤和分液 将配好的缓冲盐混合物（3.12）加入到5.2的悬浮液中。封闭试管，立即用力振荡摇1分钟，在 3 000克离心5 mi

20、n 注意 当处理酸性高的样品，如柠檬，酸橙，红醋栗和覆盆子，使用如3.12说明添加了氢氧化钠的缓冲盐混合物。在水的存在下，硫酸镁往往形成结块，迅速硬化。这可以避免，在加入盐混合物后，立即振荡离心管几秒钟。在盐添加到所有样品后，一整批可以同时进行1分钟提取。具有酸性基团的农药（例如苯氧乙酸）与氨基吸附剂相互作用，如PSA(N-丙基乙二胺)。因此，如果这种农药在分析范围内，那它们的定性分析（最好通过LC-MS/MS ESI NEG）应在离心分离后，直接从原料提取进行，而不是前处理（5.4）。对于这一点，将等分试样原料提取物装入小瓶并用于LC-MS/ MS分析。酸性农药特定的LC-MS/MS条件见附

21、录A。5.4处理5.4.1去除共萃取的脂肪，蜡，糖类（如谷类，柑橘类水果）转移8毫升乙腈相（5.3）等分试样于离心管（4.5）中，在冰箱储藏一夜（对于面粉，2小时已经足够），就是脂肪和蜡凝固和沉淀的主要部分。在短暂离心（如有必要），根据5.4.2，还是冷的6毫升提取物被用于分散固相萃取柱。注意 由于在乙腈的溶解度的缘故，冻结有助于清除一些额外的样品提取物，如糖。共同提取的脂肪和蜡，这可能会对气相色谱分析的耐用性产生负面影响，使用硅胶反相吸附剂（ODS，C18型）可有效地除去。为此，25mg十八烷基硅烷键合硅胶填料、25mgN-丙基乙二胺和150mg硫酸镁每毫升提取物被用于分散固相萃取步骤。农药

22、和所提出的内部质量标准（见表1）不受这些处理的影响。5.4.2用氨基吸附剂清理（用PSA分散SPE）从5.3或5.4.1的6毫升乙腈相被转移到聚丙烯单次使用的离心管（4.5），已经含有150mg的PSA（3.14）和900mg的硫酸镁（3.6）。盖好管子，用力振摇30秒，离心（5分钟，3000克）。立即隔离，并如5.4.4描述酸化提取物。1毫升的提取物，150毫克和25毫克硫酸镁PSA是必要的。注意 在开始提取一批样品的步骤前，用分散固相萃取吸附剂有助于负荷离心管。分样器（4.12）的使用大大利于这个步骤。5.4.3用氨基酸混合吸附剂+ GCB清理（用PSA + GCB分散SPE） 对于类胡萝

23、卜素含量高（如红甜椒，胡萝卜）和叶绿素含量高（例如菠菜，生菜，芝麻菜，羽衣甘蓝，藤叶，除卷心莴苣莴和莴苣心）的样品，用PSA和GCB结合分散固相萃取SPE。 从5.3转移等分6ml乙腈相到离心管（4.5），其中一部分已经包含有150mgPSA（3.14）和胡萝卜、生菜提取物900毫克的吸附混合物1（3.16），和红甜椒，菠菜，生菜或芝麻提取物900mg的吸附混合物2（3.17）。封闭管，用力振荡2分钟，离心（例如在5分钟 3 000克）。立即隔离，并如5.4.4描述酸化提取物。 1ml提取物25mgPSA，取决于样品，150mg吸附混合物1或2是必要的。注意 在开始提取一批样品的步骤前，用分散

24、固相萃取吸附剂有助于负荷离心管。分样器（4.12）的使用大大利于这个步骤。5.4.4提取稳定性从5.5.2或5.4.3转移等分5毫升的清理提取物到一个螺丝杯储存瓶（4.10），小心以避免在吸附剂颗粒被转移，并稍微加入50l5%甲酸-乙腈溶液酸化（3.13）。将调节pH提取物加到到自动取样器小瓶，用于气体和液体色谱分析。必要时，可使用存储在冰箱里的剩余提取物。对于1毫升提取物，10L的甲酸溶液（3.13）是必要的。5.5测定注入5.4.4（在酸性农药的情况下，利用原提取物5.3）的样品提取物与标准溶液（3.22）进入GC或LC仪器。这可能涉及校准溶液包围样品提取物。测量可以采用各种仪器，仪器参数

25、和柱进行。一些仪器参数和柱在附录A中列出。这些条件已经提供满意的结果。LC-MS/MS的合适的实验测量条件，见 CEN/TR 15641 5。适合的气相色谱-质谱联用测定的实验条件，指的是 3 。合适的GC-MS实验测定的条件，请参见3。尽管如此，在测量仪器上进行单独调试的化合物，通常提供更好的灵敏度。5.6试验的干扰和回收 在不同的合适的水平下，制备试剂空白和进行加标回收试验。在分析物的保留时间，试剂空白的色谱图不应显示任何明显的干扰峰。6 结果评价6.1识别和量化 许多参数可以用来确定不同分析物在样品提取物中的身份。这包括：1）问题中分析物的保留时间（RT）或，甚至更好，保留时间比对IST

26、D（RT（A）/ RT（ISTD）从相同的运行得到的峰2）分析物的峰的形状；和3）在MS或MS / MS检测的情况下，记录相对丰度（一般2SRM转换需要MS / MS和3 MS应用离子）。 在样品提取液中确定的分析物参数与校准溶液中的农药（S）得到的参数进行比较。应该需要更高程度确认被分析物的身份，额外的措施可能是必要的，如使用不同的色谱分离条件或额外评估m / z或SRM转换。更多关于所需确认标准的信息，是指在欧盟的质量控制指南SANCO/2007/3131文件 1 。表1列出了可以采用的ISTDs。更多的使用ISTD将提供一些备份信息。使用标准溶液（3.22.1或3.22.2）检查线性和确

27、定每个校准功能，如6.2中描述的活性物质。基质匹配标准的使用是优选的，然而，对于先估计食品中农药残留限量或显示他们缺少，可以使用纯溶剂的标准溶液（3.22.1）。如果初步实验表明，任何抑制或增强效果的经历不显着影响结果，可用于定量分析。作为一旦相关的残留浓度的检测（如涉嫌侵犯，MRL）更精确使用基质匹配标准测定（3.22.2）或标准加入法（6.3）应使用。影响样品提取物相比，响应的目标分析物的响应注1 影响样品提取物的目标分析物响应与在纯溶剂标准溶液的响应的目标分析物的响应矩阵的影响的对比注2 校准范围应适当对应量化的残留浓度。因此，因此，有必要从校准的测量结果，构建多个标定图。 本标准规定使

28、用内部标准进行量化和识别。然而，没有ISTD,它还是可以量化。没有ISTD，乙腈相的体积（5.3）假设是体积相同的乙腈加入到5.2.3的样品中（10毫升）。当使用内部标准，重要的是要知道，在峰信号的任何变化将直接影响分析物浓度的计算。理想情况下，由于体积的不同，内标信号应该只有变化，因此提高测量精度。然而，也有其他非理想因素，也可能影响ISTD的信号，从而引入分析物定量分析的误差。在分区或清理时，ISTD的损失将导致被分析物浓度的高估。这样的损失因此应该是最小的。实验表明，ISTD物质的回收率很高，由于ISTD物质损失仍然是微不足道的，分析物结果产生误差是由其他来源错误。一个特定的ISTD物质

29、的抑制信号，由于共洗脱基质成分，可能发生在LC-MS应用，也会导致分析物被高估，而相对增强的ISTD物质信号，由于矩阵的共同提取物存在，在气相色谱中，将导致低估分析物浓度。因此，应用于气相色谱的istds应该是化合物，几乎没有基质诱导增强现象的影响。在LC-MS应用矩阵的影响，将取决于提取物是否包含特定的化合物，将和ISTD物质共同洗脱而影响其电离过程。在任何情况下，它始终是引进的质量控制措施，以确保由ISTD引入的任何误差仍然微不足道。质量控制措施可能包括备份istds和可以在分析过程中的其他阶段加入（例如，最后的提取物）的质量控制标准，和可能帮助识别任何非体积有关的ISTD信号变化。序列中

30、的每个样品中峰的信号强度观测对质量控制是很有帮助的。一个重要的信号转变的发生，数量应不使用使用备份进行物质或物质。在后者的情况下，精确的液体输送和的标准溶液体积的平衡和样品提取物是强制性的。6.2计算不加标残留浓度使用的变量：ISTD溶液的内标准浓度校准混合物的农药浓度校准混合物中内标浓度最后提取物中的农药浓度最后提取物的内标浓度测试部分的质量加到测试部分的ISTD体积校准混合物中农药峰面积校准混合物中ISTD峰面积最终的提取的农药峰面积最终的提取物的ISTD的峰面积校准混合物获得的峰值比最终提取物的峰值比校准曲线斜率校准图偏差样品中的农药质量分数此外在文本：内标的质量（S）被用于标准溶液的制

31、备导致大量农药添加到每个小瓶（标准加入）标准溶液的体积（或基于矩阵的溶剂相匹配的标准）内标溶液的体积，可用于标准溶液的配制农药工作溶液的量用于制备校准混合物农药原液的适当稀释添加量（标准加入）通过绘制内部溶液每个校准水平对无量纲浓度比(/)的峰值图PRcal mix，确定各活性物质的校准功能。从下面公式描述的相应的校准曲线图：每一个预期的浓度比(/)可按照以下公式计算：在最后提取中的浓度比(/)取决于测试部分ma中农药的质量分数wR、内部标准浓度CIST和测试部分中添加的量。当从最后提取中得到的峰值比PRsample = /跟从校准混合物得到的峰值比 PRcal mix ，浓度比/和 /相同并

32、且质量分数wR(在测试样品中残留浓度)可以计算如下：注解 一条简单和面向实践用于计算结果的公式，其中不包含ISTD浓度但需要一定前提条件得到满足，可在附录D中找到。6.3 用标准加入法的残留浓度的计算 在遇到涉嫌违规残留物、或已知的通过基质诱导的增强或抑制现象强烈影响的化合物时，标准添加的程序被建议提供响应和在固定浓度范围内的浓度之间的关系函数是线性的。在这种情况下几个等分的最终样本提取物被适当稀释的按表4通过溶剂调整的农药原液（3.20）的增加量强化。 这个程序需要近似于通过初步分析得到的残留水平wR的知识。假设一个估计残留水平WR=0,8 mg/kg的样品（用样品量10克），表4的取样方案

33、可能合适。样品中分析物的量是用如图表1的图解表示法通过线性回归计算的。注释 在其他残留水平WR，调整浓度的分析物标准溶液和/或适量的分析物溶液和溶剂是必须的。Y 分析物峰面积的比值除以ISTD的峰面积X 添加的分析物的绝对质量以g为单位|X| 在标准加入前样品提取分析物的绝对质量以g为单位图1内部校准应用标准加入法，按照图示计算是通过公式（6）和图1所示的回归曲线图演算的。C是分析物的校准曲线图的Y轴截距b是校准曲线的斜率V是在5.2.3中乙腈加入的量Val是用标准添加法等分的量ma是原始样品重量6.4 方法的依赖几个回收实验（添加水平为0,01 mg/kg 0,25 mg/kg）已在协调多实

34、验室验证研究的框架，通过利用代表性商品方法进行。获得的回收率通常在70%至110%之间并且对于复制分析的标准偏差低于10%。这些验证研究结果如附录B中的表1所示。附录B中的表2显示了通过分别在不同实验室验证的框架和持续质量控制得到的回收研究结果的汇遍。通过此方法得到的测定和检测界限很大程度上取决于许多因素包括农药的类型、样本问题、灵敏度和仪器在使用环境的选择性。使用国家最先进的仪器，水平在大约0,01 mg/kg（通常最低的MRL）的农药的确定分析在大多情况下很容易实现。7 验证性实验量的确认涉及第二部分样品的分析而且当第一部分的分析显示出涉嫌违规的残留物其就会执行。关于特性确认的更多信息请参

35、阅SANCO / 2007 / 3131文献 1 中描述的欧盟质量控制指南。8精确度取自多实验室实验的涵义可能不适用与附录B以外的农药的浓度范围和矩阵根据ISO 5725-1和 ISO 5725-2方法的精确度的多实验室实验细节在附录B中有总结9试验报告试验报告应至少包含以下内容：所有信息对样品的识别必要的；参考本欧洲标准；结果和的结果，已表示单位；日期和取样步骤（如果可能的话）；在实验室收到的样本日期；试验日期；任何特定值的测试过程；任何操作中没有规定的方法或作为可选这可能会影响结果。通过绘制内部溶液每个校准水平对无量纲浓度比(/)的峰值图PRcal mix，确定各活性物质的校准功能。从下面公式描述的相应的校准曲线图：每一个预期的浓度比(/)可按照以下公式计算：在最后提取中的浓度比(/)取决于测试部分ma中农药的质量分数wR、内部标准浓度CIST和测试部分中添加的量。当从最后提取中得到的峰值比PRsample = /跟从