2019届高考高三生物总复习第37讲微生物的利用学案含答案可编辑

1、第37讲微生物的利用考纲要求1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择作用考点一微生物的实验室培养I!知识梳理夯宴基础强化耍点培养基 概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH特殊营养物质以及氧气的要求。种类 按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。 按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基。 按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等归纳提升选择培养基与鉴别培养基的比较种类原理选择培养基依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计

2、鉴别培养基依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反 应，产生明显的特征变化 而设计用途举例从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别不同种类的微生物伊红美监培养基可以鉴别大肠杆菌2. 无菌技术含义：在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。(2) 常用方法別;能科杀死化学州刑消牡法卜 紫外线消毎fir卩灼烧疋菌归纳提升消毒和灭菌的辨析项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内 部的部分微生物(不 包括芽孢和孢子)煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐咼温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源火菌强烈的理化因素杀

3、死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和 孢子灼烧火菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具咼压蒸汽火菌法培养基及容器的火菌3. 大肠杆菌的纯化培养(1) 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算称量溶化调pH火菌倒平板(2) 纯化大肠杆菌的方法 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。(3) 菌种的保存方法 对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。 对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。r常考基础诊断判断关于微生物培养技术的叙

4、述(1) 培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质( V )(2) 倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上(X )(3) 消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害(V )(4) 为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(X )(5) 用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落(V )教材梢点拓展如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析:A(1) 获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么?提示获得效果A的接种方法为稀释涂布平板法，获得效果B的接种方法为平板划线法

5、某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应 当怎样操作才可避免此种现象？提示最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措 施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。（3）接种操作为什么一定要在火焰附近进行？提示 火焰附近存在着无菌区域。命题探究陨测考向蝕结方法 命题点一微生物的培养和无菌技术分析1 下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是（）成分蛋白胨葡萄糖K2HPO伊红美蓝蒸馏水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mLA. 从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基

6、B. 该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C. 该培养基缺少提供生长因子的物质D. 该培养基调节合适的pH后就可以接种使用答案 B解析 分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，A项错误；该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，B项正确；该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子，C项错误；培养基调节完pH还要进行灭菌等操作后才能使用，D项错误。2. （2018 柳州模拟）微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。现代生物学实验中的许多

7、方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。请分析下列操作中错误的是（） 煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽抱 接种操作要在酒精灯火焰附近进行 无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒 家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 培养基要进行高压蒸汽灭菌 加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌A. B C. D 答案 D解析 无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽抱，属于消毒；为防止空气中杂菌污染，接种操作要在酒精灯火焰附近进行；家庭制 作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的

8、酵母菌，故不能灭菌；培养基常进行高压蒸汽灭菌。 故操作错误。3高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选岀了能高效生产高温 淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示。请据图回答下列问题：略热菌样品7a11卷2：I号培捽泵 II号培养棊酶活性鉴定cpg:!.:i(1) I号培养基从物理状态来看，属于固体培养基，配制时要加入作为凝固剂，从用途来看属于选择培养基，应以 作为唯一碳源。配制固体培养基的基本步骤是()A. 计算、称量、倒平板、溶化、火菌B. 计算、称量、溶化、倒平板、火菌C. 计算、称量、溶化、火菌、倒平板D. 计算、称量、火菌、溶化、倒平板(3)溶化时，烧杯中加入琼脂后

9、要不停地 ，防止琼脂糊底引起烧杯破裂。对培养基灭菌的方法一般为 。(4) 过程是 ，过程所使用的接种方法是 法。(5) 部分嗜热菌在I号培养基上生长时可释放 分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈，挑选相应的菌落，接种到H号培养基进一步分离纯化后，再对菌种进行答案琼脂淀粉 (2)C(3)搅拌高压蒸汽灭菌 (4)稀释涂布平板(5)淀粉酶扩大解析 (1)固体培养基通常加入琼脂作为凝固剂。本实验的目的是获得产生高温淀粉酶的嗜热 菌，故其选择培养基中应以淀粉作为唯一碳源。(2)配制固体培养基的基本步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。(3)配制培养基加热溶化时，要注意加入琼脂后要不断搅拌，防止琼脂糊

10、 底。对培养基的灭菌一般采用高压蒸汽灭菌法。(4)仔细观察题图可知过程，是菌液稀释过程，是采用涂布平板法接种。(5)能产生淀粉酶的部分细菌能分解利用淀粉，其菌落周围会岀现透明圈，取这样的菌落再分离纯化可获得相应菌种，以后可以对菌种进行扩大培养用于生 产。归纳整合1 培养基的配制原则 目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2) 营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3) pH要适宜：细菌为 6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需 的pH不同。2 微生物对主要营养物质的需求特点(1) 自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐

11、，碳源可来自大气中的CO，氮源可由含氮无机盐提供。(2) 异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。命题点二大肠杆菌的纯化方法及过程分析4 下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。下列叙述中错误的是()A. 甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液B. 对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不一定是由单一的细胞或抱子繁殖而成C. 乙培养皿中所得的菌落都符合要求D. 乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端答案 C解析 灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌

12、体杀死，A项正确；稀释倍数过低会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，B项正确；平板划线法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或抱子繁殖而成，这种菌落才符合要求，C项错误；连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是使得菌体的密度越来越小，保 证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或抱子繁殖而成的，D项正确。5牛奶是微生物培养的良好培养基，牛奶在饮用前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物，为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图1所示操作。用无菌吸管从锥形瓶中吸取1 mL生牛奶稀释液至盛有9 mL无菌水的试管中，混合均匀，如此再重复2次。请回答下列有关问题:

13、怕ml尢菌术+ 9 mL 9mL QmL 皿时.生牛奶 无菌水无菌氷无菌成图】（1）巴氏消毒的方法是，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是（2）取最终的牛奶稀释液0.1 mL滴在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是图2中的ABCD图2（3）图1中所示方法为稀释涂布平板法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测生牛奶中每毫升含细菌数为 个，运用这种方法统计的结果往往较实际值 （填“偏大”或“偏小”），原因是 。（4）消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤

14、上应做什么改动？ 。（5）从生牛奶取样培养得到的菌落中混有各种杂菌，从中检测岀大肠杆菌的方法是在培养基中加入，菌落具有 特征的可以认定为大肠杆菌。答案 在7075 C煮30 min（或在80 C煮15 min） 牛奶的营养成分不被破坏 （2）B （3）3.4 X 10 6偏小 个别菌落可能是由 2个或多个细菌形成的 （4）减少稀释次数 （5）伊红美 蓝（金属光泽的紫）黑色解析 （1）巴氏消毒的方法是在7075 C煮30 min或在80 C煮15 min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养成分不被破坏。（2）涂布使用的工具是涂布器，图B正确。（3）菌落的平均数是34个，生牛奶中每毫升含细菌

15、数二菌落平均数/涂布量X稀释倍数二 34个/0.1mL X 10 4=3.4 X 10 6个/mL。在统计菌落时，当两个或多个菌落连在一起时，平板上观察到的只是单个菌 落，所以运用这种方法统计的结果往往比实际值偏小。（4）由于消毒后牛奶中绝大部分细菌被杀死，所以可减少稀释次数。（5）大肠杆菌的代谢产物会使伊红美蓝鉴别培养基岀现金属光泽的紫黑色。考点二微生物的筛选和计数知识梳理1 .土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分 解成无机物的过程中起到催化作用。（2）统计菌落数目一般用稀释涂布平板法。19mJInLlLL 统

16、计菌落数目时，培养基表面生长的1个菌落，来源于样品稀释液中丄个活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。（平均菌落数+涂布的稀释液体 从平板上的菌落数推测岀每克样品中的菌落数的计算方法是 积）X稀释倍数。 利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度。（3）实验流程：土壤取样-样品的稀释-微生物的培养与观察-细菌的计数。 知识拓展用显微镜直接计数法计数：血细胞计数板法0. mmAt*t.J 严F -b1XB-K-2SAHlI 2 -IB血厠胞计敷板构垃（一） 九正面图；B,縄切面图 L血佃胞计数板；丸蛊琥片； 入计數宣-16x25血细胞计牡扳枸造（二） 址大后

17、的方网格，中间丸方 格沟计数宣 结构：常用的是 1 mnX 1 mnX 0.1 m m方格的计数板（如图）。每个计数板上有两个计数室，每个计数室上刻有 9个大方格，其中只有中间的大方格为计数室，大方格的长和宽各为1 mm,深度为0.1 mm，其容积为0.1 mm3;大方格内分为 25个中方格，每一中方格又分为16个小方格，即大方格是由400个小方格组成的。 操作：在清洁干燥的血细胞计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的菌 液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，充满计数室。 计数：在显微镜下计数45个中方格内的菌体数，求岀每个小方格所含有的细菌的平均数,按照以下公式计算：每毫升

18、原液含有的菌数二每小方格平均细菌数X400X 104 X原液被稀释倍数。2 分解纤维素的微生物的分离(1) 纤维素酶组成：纤维素酶是一种复合酶，一殳认为它至少包括三种组分，即G酶、CX酶和葡萄糖苷作用C1酶葡萄糖苷酶纤维素酶纤维二糖 葡萄糖(2) 纤维素分解菌的筛选原理纤维素分解菌刚果红-I红色复合物 纤维素酶 红色消失，出现透明圈。 纤维素筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。 实验流程土壤取样:富含纤维素的环境选择培养:用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度梯度稀释:制备系列稀释液(X )涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维

19、素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落常考基础诊断(1) 选择培养基可以鉴定某种微生物的种类(X )(2) 对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源(4) 分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低(5) 刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌教材梢点拓展研究人员在刚果红培养基平板上，筛选到了几株有透明降解圈的菌落如图1所示，将筛选到的纤维素酶高产菌株 Ji和J4在不同的温度和 pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果如图2,请分析：I 2.图1降耕團纤

20、维鄒聊番性(U g-1 protein)揃纤维紊薩话恂U1 pnilci n)5 J5 25 35 4S 55 (5 752 3 + 5 6 7 K M 10温度比)卩円(1) 透明圈是如何形成的？提示刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。细菌分泌的纤维素酶能将培养基中的纤维素降解成纤维二糖和葡萄糖，形成透明 圈。图中透明圈大小代表什么？降解纤维素能力最强的菌株是哪种？提示透明圈大小与纤维素酶的量和活性有关，降解纤维素能力最强的是菌株。(3) 结合图2推测哪种菌株更适合用于人工瘤胃发酵？提示 J4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高，更适合用于

21、人工瘤胃发酵。命题探究陨测考向总结方法0命题点一选择培养基成分及配制方法的分析1 选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的 培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和 硝化细菌，应选用的培养基分别为()A. 伊红美蓝培养基、含青霉素的培养基B. 含青霉素的培养基、含氨的无机培养基C. 含氨的无机培养基、含青霉素的培养基D. 含青霉素的培养基、伊红美蓝培养基答案 B解析酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生 长，但不能抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸

22、过程所释放的能量，把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行硝化细 菌的选择培养。2 苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废 水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细 菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。请据图回答下列问题：昌Ry(1) 中培养目的菌株的选择培养基中应加入 作为碳源，中不同浓度碳源的培养基(填“影响”或“不影响”)细菌的数量，如果要测定中活细菌数量，常采用 法。为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于 ;使用 法可以在上获得单菌落。采用固体平板培

23、养细菌时进行倒置培养的原因是 。(3) 实验过程中如何防止其他微生物的污染？答案 (1)苯酚 影响 稀释涂布平板(2)的培养基中没有加入苯酚作为碳源，的培养基中加入了苯酚作为碳源稀释涂布平板法或平板划线防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程进行无菌操作解析 (1)选择降解利用苯酚的细菌的培养基是以苯酚为唯一碳源的培养基；苯酚是唯一的碳源，当苯酚消耗尽时，菌株因缺少碳源而不能继续繁殖，所以中不同浓度的碳源会影响细菌 数量；一般采用稀释涂布平板法来测定中活菌数目。(2) 与培养基的主要区别在于的培养基中没有加入苯酚作为碳源，的培养基中加入了苯酚作为碳源

24、；使用稀释涂布平板法或平板划线法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。(3) 从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作：无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵：a.实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；b.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；c.为避免周围环境中微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；d.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。一规律方法选择培养基的制作方法(1) 在培养基全部营养成分具备的前提下，加

25、入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，在培 养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物生长，如培养基中 加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分 离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉 菌。 通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮 微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无 法生存，而自养微生物可利用空气中的CQ制造有机物生存。（3）利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能

26、利用石油 的微生物生长，使能够利用石油的微生物生长，从而分离岀能消除石油污染的微生物。（4）通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水 而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而 无法生存。命题点二微生物的分离与计数3. （2014 新课标I, 39）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将 分解成。在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成 色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时

27、，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR溶液水培养基甲+一+培养基乙+一+注：+ ” 表示有，一”表示无。据表判断，培养基甲 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ;培养基乙 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴 别纤维素分解菌，原因是 答案（1）纤维二糖葡萄糖 （2）红 透明圈 （3）不能 液体培养基不能用于分离单菌落不能 培养基中没有纤维素，不会形成CR纤维素红色复合物，即使岀现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌解析 （1）纤维素酶是一种复合酶，

28、一般认为它至少包括三种组分，即C酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶能使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶能将纤维二糖分解成葡萄糖。（2）刚果红是一种染料，可以与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合 物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透 明圈来筛选纤维素分解菌。(3)纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基，而用于分离和鉴别纤维素分解菌的培养基为固体培养基，并且培养基中需含有纤维素，才能与CR形成红色复合物，有纤维素分解菌时才能形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。4为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并

29、进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1) 该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌的含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是 ;(2) 该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环需通过灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是(3) 示意图A和B中，表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。B(4) 该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中 的含量，同时可使菌体与培养液充分接

30、触，提高的利用率。答案 (1)检测培养基平板灭菌是否合格(2)灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质解析(1)在涂布接种前，随机选取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，目的是检测培养基平板灭菌是否合格。(2)用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环需通过灼烧灭菌，在第二次及以后的划线时，应从上一次划线末端开始划线，目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)稀释涂布平板法接种培养后得到的结果应为图Bo (4)振荡可以使细菌分散，更有利于细菌利用培养液中的营养物质，并且可以使培养液中的溶解氧增多。归纳总结两种纯化细菌方法的辨析比较项目平板划线法稀释涂布

31、平板法关键操作接种环在固体平板培养基表面连续划线一系列的梯度稀释涂布平板法操作注意事项每次划线前后均需灼烧接种环稀释度要足够咼，为确保实验成功可以增加稀释度的范围菌体获取在具有显著菌落特征的区域的菌洛中挑取菌体从适宜稀释度的平板上的菌洛中挑取菌体优点可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落既可以获得单细胞菌落，又能对 微生物进行计数缺点不能对微生物计数操作复杂，需要涂布多个平板矫正易错 强记长句易错警示突破选择题1 灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。2 划线时最后一区不要与第一区相连。3 划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。4用稀释涂布平板法统计的菌落数往

32、往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。5尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯一的 氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。长句应答突破简答题下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题:1 图甲是利用平板划线法进行微生物接种，图乙是利用稀释涂布平板法进行微生物接种。对这 两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是灼烧灭菌和酒精消毒。2 接种操作要在火焰附近进行的原因是火焰附近存在着无菌区域3 接种后，在固体培养基上培养细菌时进行倒置培养的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培 养基上污染培重温咼考演练模

33、拟1. (2017 全国I, 37)某些土壤细菌可将尿素分解成CO和NH,供植物吸收和利用。回答下列问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO作为碳源，原因是 ，但可用 葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是( 答出两点即可 ) 。(2) 为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择 ( 填“尿素”“ NHNO ”或“尿素+ NHNO”)作为氮源，不选择其他两组的原因是(3) 用 来 筛 选 分 解 尿 素 细 菌 的 培 养 基 含 有 KH2PO4 和 Na2HPO4 ， 其 作 用 有 ( 答出两点即可 )。答

34、案 (1) 脲酶 分解尿素的细菌是异养型生物，不能利用CO2 来合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料(2)尿素 其他两组都含有 NHNG,能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NHNO,不能起到筛选作用 (3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定解析 (1) 细菌分解尿素是由于细菌体内能合成脲酶，尿素是有机物，分解尿素的细菌是分解者，属于异养型生物，因此不能利用CQ作为碳源合成有机物。葡萄糖通常既作为碳源，也作为能源。 筛选分解尿素的细菌，通常只能用尿素作为唯一氮源，“NHNQ”或“尿素+ NHNQ”均含有无机氮源 NHNQ,能分解尿素

35、的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NHNQ，不能起到筛选作用。KH2PQ和NazHPQ可为微生物提供 P元素和无机盐离子如钾离子和钠离子，还可作为缓冲 剂保持细胞生长过程中 pH 稳定。2. (2016 全国I, 39)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下： 配制培养基 ( 成分：牛肉膏、蛋白胨、 NaCl、X、H2Q)； 制作无菌平板； 设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作； 将各组平板置于 37 C恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：(1) 该培养

36、基中微生物所需的氮来源于 。若要完成步骤，该培养基中的成分 X 通常是 。(2) 步骤中，实验组的操作是 (3) 若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36 个/ 平板，而空白对照组的一个平板上出现了 6 个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了 现象。若将 30( 即 366)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法 ( 填“正确”或“不正确” )。答案 (1) 牛肉膏、蛋白胨 琼脂 (2) 将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间（3）污染不正确解析（1）牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白质的水解产物，都可以作为氮源；平板为固体培养基，故需要加入凝固剂琼脂。（2）实验探究的是

37、教室内“不同高度空气”中微生物的分布，其中变量为不同高度，故需在不同高度下放置开盖平板。同时，为了保证单一变量，需要保证开盖放置时间一致。为了保证实验可靠性，需要设置多个平行组。（3）在完全正确的操作情况下，空白对照组中不应出现菌落。若出现菌落，表明操作过程中存在杂菌污染，属于实验失误，所有实验数据均不应采用。3. （2016 四川，10）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列梵St10 gI:壊样品-CUGAGUGAGAAAUl UGGU271 （花示从起始密码开始算起的饋星用号、乙作指示剂，产（1）图中选择培养基应以 为唯一氮源；鉴别培养基还需添加脲酶细菌

38、在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1 mL，培养一段时间后,平板上长岀的细菌菌落数分别为13、156、462、178 和 191该过程采取的接种方法是，每克土壤样品中的细菌数量为 X 10 8个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较 （3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了 70个核苷酸，使图乙序列中岀现终止密码（终止密码有 UAG UGA和UAA）。突变基因转录的mRNA中，终止密码为 ，突变基因表达的蛋白质含 个氨基酸。答案 （1）尿素 酚

39、红 红（2）稀释涂布平板法1.75 少 UGA 115解析（1）脲酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素作为唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，使酚红指示剂变成红色。（2）用于计数细菌菌落数的接种方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数，每克土壤样品中的细菌数为（156 + 178 + 191） - 3-0.1 X 10 5 =1.75 X 108个。由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，故用此方法测得的细菌数偏少。（3）密码子由三个相邻的碱基组成，271个碱基和后面2个碱

40、基一起共构成 91个密码子，箭头处插入的 70个核苷酸和后面 2个碱基一起共构成 24个密码子，紧随其后是 UGA为 终止密码子，因此表达的蛋白质含 115 个氨基酸。课时作业1 高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是（）A. 将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B. 将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C. 将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D. 将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上答案 C解析 在酿制葡萄酒的过程中，如果灭菌不彻底会影响葡萄酒的品质，但影响不大；在制作腐乳的过程中，发酵过程有多种微生物的参与，所以该过程不进行严格的无菌操作对结果影响不 大；在植物组

41、织培养过程中，如果灭菌不彻底，杂菌产生的物质会影响外植体的生长，甚至杀 死外植体，导致培养失败，对结果影响最大；土壤浸出液本身就含有大量的杂菌，另外在选择 培养基上只能生存我们所要筛选的细菌，所以无菌操作不严格，对结果影响也不会太大。2. （2017 张家口检测）下列有关微生物培养与应用的说法，正确的是（）A. 天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基B. 接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理C. 大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段D. 分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源答案 C解析 天然培养基是指用天然物质制成

42、的培养基，但也需要加工，A项错误；实验操作者的双手应消毒，不是灭菌，B项错误；分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有机物（如葡萄糖）作为碳源，D项错误。3下面是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是（）A. 在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌B. 划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上C. 接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的D. 第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数答案 C解析 在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，但不能对培养基进行灭菌；进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开

43、一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第1区和第5 区的划线不能相连。4. （2018 吉林模拟）下面关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述中，正确的是A. 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B. 筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质C. 统计样品中的活菌数目一般用平板划线法D. 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素 的细菌 答案 A解析 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A项正确；筛选分解尿素的细菌的实验中，采用的是以尿素为唯一氮

44、源的培养基，B项错误；统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法，C项错误；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂变红，这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素，D项错误。5某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是（）A. 培养基分装到培养皿后进行灭菌B. 转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C. 接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D. 培养过程中每隔一周观察一次答案 B解析 培养基灭菌后再分装到培养皿中，A项错误；转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从上次划线的末端开始进行划线，B项正确；接种后的培养皿必须放在恒温箱中进行培养，C项

45、错误；培养过程中一般每隔12 h或24 h观察一次，D项错误。6.在农业生产研究上，常需要进行微生物的分离和计数。（1）下表为两种微生物的培养基配方：A组KH2PQNa2HPOMgSO 7H2O葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.0 gB组纤维素粉NaNONazHPQ 7HzOKHPQMgSO7H2OKCl酵母膏水解酪素5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0.5 g0.5 g0.5 g注：上述两种培养基中的物质溶解后，均用蒸馏水定容至1 000 mL 从功能上来看，上述两种培养基均属于 培养基。 如果要对土壤中分解尿素的细菌进行分离，则需要选择（填“A

46、”或“ B”）培养基，该培养基中的碳源是 。 在分离尿素分解菌所用的培养基中可加入 指示剂，根据指示剂的颜色可鉴定某种细菌能否分解尿素，若有分解尿素的细菌，培养基将会呈现。下图是某同学采用的接种微生物的方法，请回答下列问题:本实验采用的接种微生物的方法是法，把聚集的菌种逐步分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上应注意：（ 至少答2项）。三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中细菌数量，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下统计结果:甲同学涂布了两个平板，统计的菌落数是 乙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是 丙同学涂布了三个平板，统计的菌落数是236和260，取平均值 248 ；210

47、、240和250，取平均值 233 ；21、212和256，取平均值 163 ；在三位同学的统计中， 同学的统计是正确的答案 （1）选择 A葡萄糖 酚红红色（2）平板划线稀释每次划线前要灼烧接种环；冷却后从上一次划线的末端开始划线乙解析（1）据题表中的培养基的配方分析可知,A组中的氮源为尿素，是筛选尿素分解菌的选A组培养基，该培择培养基。B组中的碳源是纤维素，是筛选纤维素分解菌的选择培养基。对土壤中分解尿素 的细菌进行分离时，需要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，故应当选择 养基中的碳源是葡萄糖。尿素分解菌可以用酚红指示剂进行鉴定。尿素分解菌产生的脲酶能够将尿素分解为氨而使pH升高，使酚红指示

48、剂呈红色。（2）据图分析可知，图示表示平板划线法接种，是把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面，操作上应注意每次划线前要灼烧接种环；冷却后从上一次划线的末端开始划线。在进行平板菌落计数时，应选择菌落数在30300之间的平板，同时为减小误差应选择至少3个或3个以上的平板进行计数并取平均值，在三位同学的统计中，乙同学的统计是正确的。7大肠杆菌是与我们日常生活联系非常密切的细菌，请回答有关检测饮用水中大肠杆菌的问题：（1）检测饮用水中大肠杆菌的含量时，通常将样品进行一系列的梯度稀释，将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，然后记录菌落数，这种方法称为判断下面所示的4个菌落分布图

49、中，不可能是用该方法得到的是（2）用上述方法统计样本中菌落数时是否需要设置对照组？（填“需要”或“不需要”），其原因是需要判断培养基 ，对于固体培养基应采用的检测方法是将 的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行 （填“消毒”或“灭菌”）处理；操作者的双手需要进行清洗和 ;静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使其内蛋白质变性，还 能损伤它的结构。（4）检测大肠杆菌实验结束后，使用过的培养基及其培养物必须经过处理才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案 （1）稀释涂布平板法D （2）需要 是否被杂菌污染

50、（灭菌是否合格）未接种 （3）灭菌消毒 DNA （4）灭菌解析 D中菌落分布情况为平板划线法所得。为判断培养基是否被杂菌污染（灭菌是否合格），本实验需要设置对照组。可将未接种的培养基在适宜的温度条件下放置一段时间，观察培养基 上是否有菌落产生，若发现有菌落说明培养基已被污染。消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽抱和抱子）。灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽抱和抱子。对培养基和培养器皿进行灭菌处理，对操作者的 双手需要进行清洗和用酒精消毒。8 某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物 A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题：河水池屮污泥样品:初选候选菌據荡培养护F犬后.测定餐瓶屮化合物A的含轼、 JT选样|按种固it诰养堆并甘 养:基。 培养基中加入