(完整版)植物中总磷氮测定方法

1、1植株全氮、磷、钾测定方法、植物全氮测定（一） HSQ-H2Q 消煮法适用范围本方法不包括硝态氮的植物全氮测定 , 适合于含硝态氮低的植物样品的测方法提要植物中的氮、磷大多数以有机态存在，钾以离子态存在。样品经浓 H2SQ 和氧 化剂 fQ 消煮,有机物被氧化分解,有机氮和磷转化成铵盐和磷酸盐,钾也全部释 出。消煮液经定容后，可用于氮、磷、钾的定量。采用 Q 为加速消煮的氧化剂，不仅操作手续简单快速 ,对氮、磷、钾的定量没有干扰 ,而且具有能满足一般生产 和科研工作所要求的准确度。但要注意遵照操作规程的要求操作 , 防止有机氮被 氧化成N2气或氮的氧化物而损失。3、试剂（1）硫酸（化学纯, 比

2、重 1.84）;（2）30% H2Q2（ 分析纯） 。4、主要仪器设备。消煮炉，定氮蒸馏器。5、操作步骤称取植物样品（0.5mm）0.30.5g（称准至 0.0002g）装入 100ml 开氏瓶或消煮管的底部，加浓 HSQ5ml,摇匀（最好放置过夜）,在电炉或消煮炉上先小火加热,待H2SQ 发白烟后再升高温度，当溶液呈均匀的棕黑色时取下。稍冷后加班10 滴02（3）,再加热至微沸,消煮约 710min,稍冷后重复加 H2Q,再消煮。如此重复数 次,每次添加的 HQ 应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮后，再加热 10min,除 去剩余的HO2。取下冷却后，用水将消煮液无损地转移入 100ml 容

3、量瓶中，冷却至 室温后定容（V1） 。用无磷钾的干滤纸过滤 ,或放置澄清后吸取清液测定氮、磷、 钾。每批消煮的同时 ,进行空白试验 ,以校正试剂和方法的误差。6、注释（1）所用的 HQ 应不含氮和磷。H2Q 在保存中可能自动分解，加热和光照能 促1、定2、2使其分解，故应保存于阴凉处。在 H2Q中加入少量 H2SQ 酸化,可防止 H2Q分解。（2） 称样量决定于 NPK含量，健状茎叶称 0.5g,种子 0.3g,老熟茎叶可称 1g, 若新鲜茎叶样，可按干样的 5 倍称样。称样量大时，可适当增加浓 H2SQ 用量。（3） 加 HQ 时应直接滴入瓶底液中，如滴在瓶劲内壁上，将不起氧化作用，若遗留下

4、来还会影响磷的显色。（二）水杨酸 - 锌粉还原 - H2SO4- 加速剂消煮法1、 适用范围包括销态氮的植物全氮测定 , 适合于硝态氮含量较高的植物样品的测定。2、 方法原理样品中的硝态氮在室温下与硫酸介质中的水杨酸作用 , 生成硝基水杨酸 , 再 用硫代硫酸钠及锌粉使硝基水杨酸还原为氨基水杨酸 . 然后按 H2SO4- 加速剂消煮 法进行消煮法进行消煮样品 , 使样品中全部氮转化为铵盐。3、 试剂（ 1 ）固体 Na2S2O3;（ 2）还原锌粉 （AR）;（3） 水杨酸-硫酸:30g 水杨酸溶于 1L 浓硫酸中。 也可以该用含苯酚的浓硫 酸:40g苯酚溶于 1L 浓硫酸中。4、 仪器设备。同

5、上。5、 操作步骤称取磨细烘干样品（过 0.25mm 筛）0.10000.2000g 或新鲜茎叶样品 1.0002.000g,置于 100ml 开氏瓶或消煮管中,先用水湿润内样品（烘干样）,然后加水杨 酸-硫酸10ml,摇匀后室温放置30min,加入NQSO约1.5g,锌粉0.4g和水10ml, 放置 10 min,待还原反应完成后 , 加入混合加速剂 2g, 按土壤全氮测定方法进行消 煮，消煮完毕，取下冷却后，用水将消煮液无损地转移入 100ml 容量瓶中，冷却至 室温后定容（VJ。用于滤纸过滤，或放置澄清后吸取清液测定氮。每批消煮的同 时,进行空白试验,以校正试剂和方法的误差。（三）消煮液

6、中铵的定量 （凯氏法）1、 适用范围。适合于各种植物样品消煮液中氮的定量。2、 方法原理植物样品经开氏消煮、定容后 , 吸取部分消煮液碱化 , 使铵盐转变成氨 , 经蒸 馏,3用 HBQ 吸收，硼酸中吸收的氨可直接用标准酸滴定,以甲基红-溴甲酚绿混合 指示剂指标终点。3、试剂（1） 400g/L NaOH 溶液。（2） 20g/L H3BQ 指示剂溶液。（3） 酸标准溶液 c（HCL 或 1/2H2SO4）=0.01mol/L 。4、 仪器设备。蒸馏装置或半自动蒸馏仪。5、 蒸馏检查蒸馏装置是否漏气和管道是否洁净后，吸取定容后的消煮液 5.0010.00mL（V2,含 NH-N 约 1mg）

7、,注入半微量蒸馏器的内室。 另取 150ml 三角瓶，内 加5 ml 2% H3BO 指示剂溶液（若为包括硝态氮的待测液,应加约 6 mL 的 400g/L NaOH溶液）,通过蒸气蒸馏（注意开放冷凝水,勿使馏出液温度超过 40C）。待馏出 液体积约达 5060ml 时,停止蒸馏,用少量已调节至 pH4.5 的水冲洗冷凝管末端。用酸标准溶液滴定馏出液至由蓝绿色突变为紫红色（终点的颜色应和空白测定的 滴定终点相同 ） 。与此同时进行空白测定的蒸馏、 滴定、以校正试剂和滴定误差。6、 结果计算3（N）, %= c（V-Vo）X0.014XDX100/m;式中：3（N）-植物全氮的质量分数，;c酸标

8、准溶液的浓度,mol/L;V- 滴定试样所用的酸标准液体积，ml;V0滴定空白所用的酸标准液，ml;0.014 N 的摩尔质量，kg/mol;D分取倍数（即消煮液定容体积 V/吸取测定的体积 V2）。二、植物全磷的测定（一）钒钼黄吸光光度法1、 适用范围。适合于含磷量较高的植物样品的测定 （如籽粒样品 ）。2、 方法原理4植物样品经浓SQ 消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。待测液中的正磷酸 与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸 , 其吸光度与磷浓度成正比 , 可在波长400490nm 处用吸光光度法测定。磷浓度较高时选用较长的波长,较低时选用较 短波长。此法的优点是操作简便,可在室温下显色,黄色

9、稳定,在 HNO HCIQ 和 HSQ 等介质中都适用 ,对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格 ,干扰物少,在可见光 范围内灵敏度较低,适测范围广(约为 120mg/L P),故广泛应用于含磷较高而 且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。3、试剂(1) 钒钼酸铵溶液：25.0g 钼酸铵(NH4)6MoQ 4H2Q,分析纯溶于 400mL 水中,必要时可适当加热,但温度不得超过 60C。另将 1.25g 偏钒酸铵(NH4VQ,分析 纯)溶于 300mL 沸水中，冷却后加入 250mL 浓 HNQ 分析纯)。将钼酸铵溶液缓缓注 入钒酸铵(溶液中,不断搅匀,最后加水稀释至 1L,贮于棕色瓶中。(2)

10、 NaOH液(c=6mol/L):24gNaOH 溶于水，稀释至 100ml。(3)二硝基酚指示剂(p=2g/L):0.2g2,6- 二硝基酚或 2,4-二硝基酚溶于100ml 水中。(4) 磷标准溶液p(P)=50mg/L:0.2195g(干燥的 KHPO(分析纯)溶于水,加入5ml 浓 HNO 于 1L 容器瓶中定容。4、 主要仪器设备。分光光度计。5、 分析步骤准确吸取定容,过滤或澄清后的消煮液 520ml(t,含 P0.050.75mg)放入 50ml容量瓶中，加 2 滴二硝基酚指示剂，滴加 6mol/LNaOH 中和至刚呈黄色，加入 10.00ml钒钼酸铵试剂,用水定容(V3)。15

11、min 后,用 1cm 光径的比色槽在波长 440nm 处进行测定，以空白溶液(空白溶液消煮液按上述步骤显色),调节仪器零 点。校准曲线或直线回归方程：准确吸取 50mg/L P 标准液 0, 1,2.5, 7.5, 10, 15ml 分别放入 50mL 容量瓶中，按上述步骤显色，即得 0, 1.0, 2.5 , 5.0, 7.5, 10, 15 ml P 的标准系列溶液 ,与待测液一起进行测定 ,读取吸光度,然后绘制校准曲 线或求直线回归方程。6、 结果计算p(P)xV3x(V1/V2)x10-453 (P)= 式中：3 (P) 植物磷的质量分数，；P(P)从校准曲线或回归方程求得的显色液中

12、磷的质量浓度，mg/L;Vi消煮液定容体积，ml;V2吸取测定的消煮液体积,ml;V3显色液体积，ml;m- 称样量,g;10-4将 mg/L 浓度单位换算为百分含量的换算因数。7、注释(1) 显色液中p(P)=15 mg/L 时,测定波长 420nm;520mg/L 用 490nm 待 测液中 Fe3+浓度高应选用 450nm,以清除 Fe3+干扰。校准曲线也应用同样波长测定 绘制。(2) 一般室温下，温度对显色影响不大，但室温太低(如15C)时,需显色30min。稳定时间可达 24h。(3)如试液为 HCl,HClO4介质,显色剂应用 HCI配制;试液为HSQ介质，显 色剂也用HSQ配制。

13、 显色液酸的适宜浓度范围为 0.21.6 mol/L,最好是 0.5 1.0 mol/L 。酸度高显色慢且不完全 , 甚至不显色 ; 低于 0.2 mol/L 易产生沉淀物 , 干扰测定。钼酸盐在显色液中的终浓度适宜范围为 1.6x10-310-2mol/L,钒酸 盐为 8x10-52.2x10-3mol/L 。4、此法干扰离子少。主要干扰离子是铁，当显色液中 Fe3+浓度超过 0.1%时，它的黄色有干扰 , 可用扣除空白消除。(二)钼锑抗吸光光度法1、 适用范围适合于含磷量较低的植物样品的测定 (如茎秆样品等 )。2、 方法提要植物样品经浓SQ 消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。在一定酸度下，

14、待测 液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸 , 后者在室温下能迅速 被抗坏血酸还原为蓝色络合物 , 可用吸光光度法测定。3、 试剂1 ) 6mol/L NaQH 溶液(2)0.2%二硝基酚指示剂(3) 2mol/L(1/2 H2SQ 硫酸溶液:5.6mL 浓 H2SQ 加水至 100mL6(4) 钼锑贮存液：浓 H2SQ(分析纯)126 ml 缓慢地注入约 400 ml 水中,搅拌,冷却。10.0g 钼酸铵(分析纯)溶解于约 60C的 300ml 水中，冷却。然后将 H2SQ 溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中,再加入 100 ml0.5%酒石酸锑钾(KSbOCCh I/2H2Q, 分析纯

15、)溶液，最后用水稀释至 1L,避光贮存。此贮存液含钼酸铵为 1%酸浓度为 c(1/2 H2SQ4)=4.5 mol/L(5) 钼锑抗显色剂:1.50g 抗坏血酸(CeHQ,左旋,旋光度+21+22,分析纯)溶于100ml 钼锑贮存液中，此液须随配随用,有效期一天,冰箱中存放,可用 35 天。(6) 磷标准工作液p(P)=5 mg/L:吸取 100mg/L P 标准贮存液稀释 20 倍,即为 5mg/L P 标准工作溶液 , 此溶液不宜久存。4、 主要仪器设备。同上5、 分析步骤吸取定容过滤或澄清后的消煮液 2.005.00ml(V2,含 P530ug)于 50ml 容 量瓶中,用水稀释至约 3

16、0ml, 加 12 滴二硝基酚指示剂，滴加 6mol/L NaQH 溶液 中和至刚呈黄色,再加入 1 滴 2mol/L(1/2 SQ)溶液，使溶液的黄色刚刚褪去，然 后加入钼锑抗显色剂 5.00ml,摇匀,用水定容(V3)。在室温高于 15C的条件下放 置 30min 后，用 1cm 光径比色槽在波长 700nm 处测定吸光度，以空白溶液为参比调 节仪器零点。校准曲线或直线回归方程：准确吸取P(P)= 5mg/L标准工作溶液0, 1, 2, 4, 6, 8 ml,分别放入 50mL 容量瓶中，加水至 30ml,同上步骤显色并定容，即得 0, 按 0.1, 0.2, 0.4,0.6, 0.8 m

17、g/L P 标准系列溶液 , 与待测液同时测定 ,读取吸 光度, 然后绘制校准曲线或直线回归方程。6、 结果计算 : 同 1。7、 注释根据分光光度计性能，可选用 650890nm 波长处测定,880890nm 处灵敏 度高三、植物全钾的测定火焰光度法(一)适用范围。适合于植物样品消煮液中钾含量的测定。(二)方法提要植物样品经消煮或浸提，并经稀释后，待测液中的 K 可用火焰光度法测定。(三)试剂K 标准溶液p(K)= 100mg/L :0.1907gKCI(分析纯),在 105110C干燥 2h) 溶于7水,于 1L 容量瓶中定容，存于塑料瓶中。(四)主要仪器设备。火焰光度计。(五)分析步骤吸取定容后的消煮液 5.0010.00ml( V2)放入 50mL 容量瓶中，用水定容(Vi), 直接在火焰光度计上测定 , 读取检流计读数。校准曲线或直线回归方程 准确吸取 100mg/L K 标准溶液 0, 1, 2.5, 10, 20 ml,分别放入 50mL 容量瓶中，加水定容的空白消煮液 5 或 10ml(使标准溶液中的 离子成分和待测液相近 ), 加水定容。即得 0, 2, 5, 10, 2