LCTechGPC操作规程

1、LCTECH GPCULTRA（全在线预浓缩-净化-定量浓缩联用）操作说明一、 原理GPC（Gel Permeation Chromatography）凝胶净化色谱是根据溶质分子大小进行分离的色谱技术，选择性仅与分子大小的差异有关。要改进分离度只能靠凝胶的孔径大小和孔径分布的最佳化来实现。试样的分离并不依赖于溶剂与试样间的相互作用力（与一般色谱的不同）。输液泵将流动相与样品带入净化柱，试样中各组分按照分子大小顺序洗脱，大分子油脂、色素、生物碱、聚合物先淋洗出来农药等较小分子后淋洗出来，检测器检测出信号，组分收集器收集含有目标组分的洗脱液。二、 操作注意事项1、 硬件部分主机电源只用开一个，开关

2、机间隔1 min以上；冷凝水开关三个，确保冷凝水箱是满的；真空瓶需用防爆瓶，收集瓶尽量也用防爆瓶；定期倒掉废液，检查废液瓶容积；不要触摸进样针，只有在仪器处于关闭状态时，才可用手移动机械臂；定量环5 mL，一次准确上样5 mL，二联机实际吸取样品大于5 mL（满环上样）。2、 凝胶净化柱农残标准柱：Bio-Breads S-X3 200-400目，柱长400 mm，内径25 mm，流速一般5 mL/min。一根柱子一般可用2-3年，可分析5000个样品。3、 样品去除样品中可见杂质；样品脱水；上柱时样品必须是环己烷/乙酸乙酯体系，丙酮极性大进柱子会使填料膨胀；含油量高的样品，上样1 g，因为油

3、含量太高容易堵塞柱子上下过滤膜。4、 仪器维护避免柱干，仪器不用时一个星期冲一次，对于沸点高的体系2-3个星期冲一次也行。冲洗方法为：直接开主机电源，按泵上start按钮，以5 mL/min速度冲15 min（约75 mL溶剂）。5、 故障清除泵压：液相泵压力显示范围为0.2-11.2 Bar。低压报警：低于0.2 Bar时，说明管路中有气泡，在stop（不工作）模式下，松开半圈黄色阀门，两只手同时按住键排气泡，直到气泡排除干净松开两只手，拧紧阀门即可。高压报警：柱子堵了，柱子流向是下进上出，一般进口端（下端）易堵，此时可将柱子反接，冲洗一段时间排除故障。反压阀（阻尼器）堵了，将其拆下不接入管

4、路，开泵冲洗管路，如果压力到1 Bar，说明阻尼器堵，此时将阻尼器用丙酮超声15 min后重新接入管路中。阀未切回来也可导致压力过高，重新开机自检一般可排除故障，如果不行，说明阀出问题。在仪器运行样品处理程序时，如要停止运行，需要关闭电源开关，如要继续执行处理程序，在关闭电源开关一分钟后，再重新开机。处理程序被取消后，一旦仪器再次开机并且自检完毕后，需要通过样品表执行清洗程序（按F1键选择）。三、 软件介绍UltraSoft_1.17：更稳定，不能保存紫外谱图UltraSoft_2.08：可以保存紫外谱图GPC_Ultra_Concentrator：浓缩模式GPC_Ultra_Online_G

5、PC：在线模式GPC总共有三种模式： 单浓缩：一次可分析26个样，定容到2 mL/5 mL 二联机：净化+定量浓缩，满环上样，上样会有损失，一般预先将样品定容到10 mL，只上样5 mL。 三联机：预浓缩+净化+定量浓缩（+），全部上样，没有损失。三个样品盘： 多用盘：单浓缩+三联机，样品瓶（100 mL）/收集瓶（16 mL） 二联机：样品瓶（16 mL）/收集瓶（2 mL2）/收集瓶（4 mL1） 三联机：样品瓶（60 mL）/收集瓶（2 mL2）/收集瓶（4 mL1）更换样品盘时，凹槽对准中心轴在离线状态下更换最佳，如果是在线更换，需重新selftest自检。四、 GPC_Ultra_C

6、oncentrator（单浓缩模式）点击桌面GPC_Ultra_Concentrator进入单浓缩界面，菜单栏中system图标亮成绿色，表示连机正确。输入密码admin，点击屏幕中绿色的按钮logon进行登录，登录成功时工具栏被激活，否则工具栏是灰色的。1、 自检点击（status）进入系统状态窗口，每当仪器重新开机或改换样品盘后，都需要进行系统自检。自检操作过程：点击“selftest”-选择正确的样品盘-再点击“selftest”仪器将进行自检程序。2、 方法编辑点击图标可创建新方法或对以已建立好的方法进行参数修改。每个方法可输入方法名称、方法 ID 号和详细说明，进行方法的诠释，这些方

7、法的内容可打印在试验样品记录中。在编辑样品序列时，可选择相应的方法 ID 号来指定样品运行的方法。总共可编辑存储 97 个方法（#1#97），如果只做单浓缩，在1-19,41-98中编辑，因为20-40是三联机预留方法。如果做三联机，则需要在单浓缩和二联机模式下都编辑好相应方法参数，且方法序数（20-40号）要一致，最后在单浓缩模式下编辑序列运行。二联机模式的话随便哪个方法序号都可以。首先在open/save中选择方法序数，Name中输入方法名称，Procedure中选择运行程序。方法参数编辑好后，必须在“PC”和“system”中都进行保存。 单浓缩程序说明：Procedure 1 Syst

8、em rinsing program 系统内部清洗程序(只清洗不上样)，默认设定，不需要修改。Procedure 2 Standard Evaporation 标准浓缩模式 先大体积（高位激光5 mL）小体积（低位激光2 mL）定容到5 mL，需注意的是，5 mL样品不是能够完全被转移出来的，管子有一定的内径。Procedure 3 Concentrate for SPE 用于 SPE 的快速浓缩模式，不定容，体积不准，样品直接转移到原样品瓶。Procedure 4 Solvent Exchange Complex不蒸干溶剂转换，只能是低沸点溶剂变成高沸点溶剂转换，一般2-3次可转换完全，定容

9、体积5 mL。Procedure 6 Precess to Dryness蒸干溶剂转换，可用于高沸点溶剂转换成低沸点溶剂，适用于相对干净的样品，不会在浓缩腔壁上产生沉淀，定容体积5 mL。Procedure 7 & Internal Standard加入内标标准浓缩，不需要通过激光的准确判断，直接浓缩到低位激光，过程更快，定容体积2 mL。 参数编辑 单浓缩部分主要是温度和真空度影响实验结果，真空度为主，温度为辅。以溶剂沸点60-70为分界点，低沸点溶剂油浴温度为33-35，真空度360-400 mbar；高沸点溶剂油浴温度为40，真空度180-200 mbar。Parameters in P

10、rocess to Upper Laser 第一次浓缩（高位浓缩，5 mL）Heat Bath Temperature（油浴温度）：30-70 乙酸乙酯/环己烷作为流动相，浓缩腔最佳温度为40。如使用不同的溶剂，浓缩腔温度设定必须要与相应溶剂的沸点相对应。Nominal vacuum（真空度）：浓缩腔设定真空度大约要低于1040mbar相对应溶剂的蒸汽压。Shut Down vacuum（结束真空度）：设置与Nominal vacuum相同即可。Automatic Mode（自动模式）：不打勾，自动模式适用于复杂体系的浓缩。自动模式下前面设置的温度和真空度都没用。Frequency Limit

11、 of the Vacuum Pump：默认值30 HZParameters in Process to Lower Laser 第二次浓缩（低位浓缩，2 mL）Heat Bath Temperature（油浴温度）：一般与第一次浓缩一致。Nominal vacuum（真空度）：真空度要比浓缩过程1的真空度低，为了在一个缓和的条件下浓缩。此阶段真空度可以设定为所用溶剂的蒸汽压。真空浓缩压力程序2设定压力范围10500mbar。其它同第一次浓缩。Sample Transfer to Vacuum Chamber 将样品吸入浓缩腔参数的设定vacuum for Sample Suction（抽样真

12、空度）：一般设定700-800 mbar。沸点越低设定数值越高。乙酸乙酯/环己烷体系777 mbar。Batch Interval（进样间隔）：当样品体积大于100 mL时，先抽100 mL样品进入浓缩腔，先浓缩一段时间，再将剩余的样品抽入浓缩腔继续浓缩。一般设成600 s。Rinsing Cycles of Sample bottle（清洗次数）：一般清洗1次。Solvent (red/grey/viol/oran)（清洗溶剂）：可以选择不同颜色接口瓶中的溶剂。Rinsing volume for Sample Vial（清洗体积）：一般3000 L。sediment of Sample（含

13、沉淀物样品）： NO =低位置取样，样品瓶底部（无沉淀），YES =高位置取样，进样针在距瓶底大约10mm的位置（样品有沉淀物）。Parameters for the ProcessSolvent Exchange SE 溶剂转换参数设定只有在Procedure 4 Solvent Exchange Complex时才有用。Heat Bath Temperature（油浴温度）：设置成转换后高沸点溶剂相对应的温度。Nominal vacuum（真空度）：设置成转换后高沸点溶剂相对应的真空度。Shut Down vacuum（结束真空度）：设置与Nominal vacuum相同即可。Automa

14、tic Mode（自动模式）：不打勾，自动模式适用于复杂体系的浓缩。自动模式下前面设置的温度和真空度都没用。Frequency Limit of the Vacuum Pump：默认值30 HZ。Solvent used for solvent exchange（转换溶剂）：可以选择不同颜色接口瓶中的溶剂。Volume of Solvent used for SE（转换溶剂体积）：指一次转换的体积，一般3000 L。Number of SE-Cycles（转换次数）：一般4次。Rinsing after Process downto upper Laser Level 浓缩到高位激光位的清洗当

15、样品浓缩到高位激光位后，将抽1-2 mL溶剂进行浓缩腔的清洗，一般清洗两次就满足清洗效果。清洗溶剂种类可通过1-4键进行选择。Rinsing volume：2000 LRinsing Cycles：2 timesSolvent for (red/grey/viol/oran):Rinsing after Process downto Lower Laser Level 浓缩到低位激光位的清洗浓缩到低位激光位时（已经有2 mL了），浓缩腔清洗参数设定时，要注意溶剂用量不能过多（1st+ 2nd3 mL），不然溶剂量超过高位激光位，仪器不进行定容。如溶剂用量过少，清洗效果不够，会影响回收率。Sol

16、vent Volume for 1st Rinsing：1500 LSolvent Volume for 2nd Rinsing：1500 LSolvent Type used for Rinsing（清洗溶剂）：可以选择不同颜色接口瓶中的溶剂。Filling Volume of concentrate（浓缩后转移出来的体积）：全部转移5000 L（实际小于5000 L，因为管路有残留）。如果设置成2 mL，说明另外3 mL排废。特别注意：如果用Procedure 7 & Internal Standard内标浓缩程序时，因为最终定容体积是2.0 mL，所以1st Rinsing（250 L）

17、，2nd Rinsing（250 L）Dilution of Concentrate 样品稀释为下一步过柱子做准备，一般不用。Volume for Dilution Concentrate（稀释体积）：0 LRinsing of Chamber 系统清洗Solvent for Pre-Rinsing of Chamber（预清洗）：一般用4.grey丙酮清洗Solvent for Main-Rinsing of Chamber（主清洗）：一般用7.orange乙酸乙酯和环己烷清洗Solvent Volume for Rinsing the Chamber（主清洗体积）：指每次所以体积，3000

18、 LNumber of rinsing cycles（清洗次数）：一般3次。 Cooler：一般6。方法参数编辑好后，必须在“PC”和“system”中都进行保存。3、 样品序列编辑点击图标（sample）进入样品序列编辑窗口，首先通过“Rack”下拉菜单选择合适的样品盘，选择要使用的方法，点“”图标，将该方法输入在序列菜单中。序列是从1开始按顺序运行，如果中间的某个样品不想做了，但又不想影响后面的样品，可以将该位置设置为方法 99（skip）。在序列最后一个样品的后面一位，要设置为方法 0（Stop），显示为桔黄色。这意味着整个样品序列的结束。样品序列编辑好后，点击进行保存并命名。特别说明：

19、如果连接了紫外检测器，则有可能需要自动保存紫外图谱。自动保存需要在序列的样品名前加上$。否则，序列里的图谱均无法自动保存，只有最后一个样品做完后，可以手动的点击“Save”保存。4、 运行序列重新回到status状态窗口，点击（open）图标，调出编辑好的样品序列，点击“start process”按钮，仪器运行样品方法。开始运行后，根据样品盘上的不同的颜色来表示样品处于的不同状态。运行结束后，也会在信息栏里告知，而且所有运行完的样品显示为绿色。5、 紫外检测器的操作点击图标进入紫外检测器数据监测窗口，在可以实时观察紫外光谱图或打开已保存紫外光谱图。特别说明：紫外光谱图察看和处理必须是在二联机

20、或 GPC Vario 中进行。如需将样品运行时监测紫外光谱图进行保存，需在编辑样品序列时，在样品名前加前缀“$”。在紫外监测窗口点击图标，可以打开以保存的紫外光谱图。此窗口可以同时显示 6 条紫外光谱曲线，通过勾选曲线“t”和“plot”方框，可以显示紫外光谱图的时间和光谱吸收峰。6、 查看和打印试验记录点击图标进入试验记录窗口，窗口中将显示样品、方法和序列的描述和样品处理程序的参数等信息。通过点击图标可以直接打印此窗口页面。五、 GPC_Ultra_Online_GPC（二联机模式）点击桌面GPC_Ultra_Online_GPC进入二联机界面，菜单栏中system图标亮成绿色，表示连机正

21、确。输入密码admin，点击屏幕中绿色的按钮logon进行登录，登录成功时工具栏被激活，否则工具栏是灰色的。1、 自检同单浓缩模式2、 方法编辑点击图标可创建新方法或对以已建立好的方法进行参数修改。每个方法可输入方法名称、方法 ID 号和详细说明，进行方法的诠释，这些方法的内容可打印在试验样品记录中。在编辑样品序列时，可选择相应的方法 ID 号来指定样品运行的方法。总共可编辑存储 97 个方法（#1#97），二联机模式的话随便哪个方法序号都可以。首先在open/save中选择方法序数，Name中输入方法名称，Procedure中选择运行程序。方法参数编辑好后，必须在“PC”和“system”中

22、都进行保存。 二联机程序说明：Procedure 1 System rinsing program 系统清洗程序(只清洗不上样)，默认设定，编辑方法时不需要修改。Procedure 3 GPC with int. StandardGPC 净化后浓缩定容到2 mL，可使用内标（2 mL体积怕不准）.Procedure 4 GPC+ ALiqGPC 净化后浓缩定容到 5 mL，可实现分样收集功能。程序 4 要求将浓缩后的样品准确的分样收集在*2，*3，*4 的 3 个位置中的瓶子内。当分析的样品要求上不同检测器检测 S、N、P 时，收集的样品可以分别上检测器分析。Procedure 5 GPC +

23、 SE + Aliq GPC不蒸干溶剂转换。净化浓缩后实现溶剂转换后定容到 5 mL，并可实现分样功能，转换的溶剂默认选用 Voilet （紫色瓶）的溶剂，注意正确选用转换溶剂。Procedure 7 GPC Elluet to Dryness蒸干溶剂转换。定容到 5 mL。Procedure 13 Flask rinsing program 浓缩腔清洗程序，全自动，不需要设定参数。只有浓缩腔和 VK 阀会被清洗。这是让用户专门的单独清洗浓缩腔的程序。其中，只需要设置油浴温度，清洗阀和浓缩腔的次数。 参数编辑根据标准方法上规定的馏分收集时间来设定，需要注意的是我们的GPC柱长400 mm，内径

24、25 mm，如果标准方法与之不同，需对应修改，也可参照经验值设定。Parameters for Process column Clean Up GPC上样过程参数设置GPC Flow rate（GPC流速）：默认5 mL/minColumn Pre-Clean Timer（预冲洗时间）：10-30 sGPC Forerun（丢弃时间）：GPC-Main Fraction（收集时间）：GPC-Tailing（冲洗时间）：300 s够了Column Selection：默认值Sedimentation of sample：不打勾Solvent Exchange（溶剂转换次数）：只针对Procedu

25、re 5 有用，转换的溶剂默认选用 Voilet （紫色瓶）的溶剂，一般3-4次足够。Parameters for Process Clean Up the System 系统清洗为保证系统连续工作，在处理样品期间要进行冲洗，包括进样环和注射口。根据标准，清洗3次便可以达到满意的清洁效果，无须过分追求清洗的次数。Rinsing：3 timesRinsing Needle：3 timesParameters for Vacuum process 浓缩过程设置Heating Bath Temperature（油浴温度）：30-70 乙酸乙酯/环己烷作为流动相，浓缩腔最佳温度为40。如使用不同的溶剂，浓缩腔温度设定必须要与相应溶剂的沸点相对应。Pressure Phase 1（第一步浓缩）：浓缩腔设定真空度大约要低于1040mbar相对应溶剂的蒸汽压。乙酸乙酯/环己烷体系180-200 mbar。Pressure Phase 2（第二步浓缩）：真空度要比浓缩过程1的真空度低。乙酸乙酯/环己烷体系200-220 mbar。Pressure