.遗传与优生学）4.产前筛查

1、 近年来，为降低缺陷胎儿的出生率，很多医院产近年来，为降低缺陷胎儿的出生率，很多医院产前诊断中心开前诊断中心开 展孕妇唐氏综合征筛查，把唐氏综展孕妇唐氏综合征筛查，把唐氏综合征作为常规的产检工程之一。合征作为常规的产检工程之一。 孕妇血清学标志物产前筛查方法目前已被证实可孕妇血清学标志物产前筛查方法目前已被证实可在孕中期有效地检出在孕中期有效地检出DS高危患儿，为她们进一步高危患儿，为她们进一步作羊膜腔穿刺的羊水染色体检查提供依据。作羊膜腔穿刺的羊水染色体检查提供依据。唐氏筛查的原因唐氏筛查的原因 一直以来，人们习惯以孕妇年龄一直以来，人们习惯以孕妇年龄35岁为唐氏综合岁为唐氏综合征高风险的筛

2、查指标。即建议征高风险的筛查指标。即建议35岁孕妇应进行胎岁孕妇应进行胎儿染色体检查，现在发现实际上儿染色体检查，现在发现实际上69%85%的唐氏的唐氏综合征患儿综合征患儿 由由35岁以下的孕妇所出生。岁以下的孕妇所出生。 因此建议因此建议唐氏综合征血清学筛查所有的孕妇都应唐氏综合征血清学筛查所有的孕妇都应实行。实行。唐氏筛查的时期和指标 唐氏筛查有早期和中期之分，其中以中期筛查为多，产前筛查平安无创伤，孕妇容易接受。 早期筛查主要采用游离绒毛膜促性腺激素(Free -HCG)和血浆妊娠相关蛋白(PAPPA)二联标志物方案。中期筛查有采用游离-人绒毛膜促性腺激素(Free -HCG)、甲胎蛋白

3、(AFP)二联标志物筛查方案和 Free -HCG、AFP、游离雌三醇(E3)三联标志物筛查方案。现在普遍使用三联方案。 对于中期两种筛查方案的差异有不同的看法。有报道显示患有唐氏综合征的孕妇，血清AFP水平下降， Free -HCG 水平升高，Free -HCG和AFP二联检测可筛查出65%的唐氏综合征患儿。 参加E3的三联方案有争议，研究说明参加E3 的三联方案能提高唐氏综合征的检出率和减少假 阳性率。也有研究 认为 E3是引起唐氏综合征产前筛查产生假阳性的主要原因。 因此唐氏筛查结果不能只看风险分析的风险数，还应结合单个血清学指标的中位数倍数值，单项指标异常也应考虑唐氏综合征高风险，应建

4、议孕妇做产前诊断，以免假阴性造成唐氏儿出生。 孕中期唐 氏筛查的孕周为1420+6周，因电脑分析软件的限制，超过此期 限那么不能做唐氏血清学筛查，假设疑心有唐氏儿的风险那么应直接做羊水或脐血产前诊断。 羊水穿刺最正确时期为孕1820周，因此，唐氏中期血清学筛查选择以孕1618周为好，过早筛查如系高风险那么会使孕妇出现较长的焦虑期，过晚那么不利于提早诊断，不利于孕妇的身心健康。 胎儿颈项透明带厚度(nuchal translucency，NT) 是指胎儿颈背侧软组织和皮肤之间的厚度，被认为是筛查唐氏综合征和其他染色体异常的最常见最有效最敏感最特异的遗传学超声指标。 正常胚胎发育过程中，颈部淋巴管

5、与颈静脉窦在1014周左右相通，在颈部淋巴管与颈静脉窦相通之前，少量淋巴液积聚在颈部，出现短暂回流障碍，形成暂时性的颈部透明带，所以1014周的正常胎儿颈部可出现正常宽度的透明带，到14周后应消退。 。 NT增厚的本质是胎儿颈部皮下水肿。 自20世纪90年代以来，胎儿颈项透明带厚度(nuchalskinfold thickness，NT)与各种胎儿先天性异常的关系已受到关注，相关研究显示，NT增厚可能与胎儿染色体异常、心血管系异常、骨骼系统发育不良、代谢及血液系统异常等有关。 其中，在胎儿染色体异常中，21-三体综合征与NT增厚的相关性更加受到临床的重视，并开展孕期对胎儿颈部皮肤厚度的测定，以

6、筛查染色体异常的胎儿。 NT增厚除了与21-三体相关外，与其他染色体异常如18-三体综合征、三倍体也有一定关系。 孕龄(Gestational Age，GA)对产前筛查风险计算结果有重要影响，GA估计不准往往会造成风险估算错误，引起假阳性和假阴性，选择正确的GA估计方法对提高产前筛查效能具有重要意义。 通常，当孕妇月经周期不规那么，或遗忘末次月经日期时，那么需根据超声检查胎儿发育推断GA。 超声估计GA的方法很多，现对其常用的指标作一综述： 1 孕囊(Gestational Sac，GS) 由于GS 个体变异较大，形态受膀胱、直肠的充盈度影响，根据GS估计GA的准确性较差，可作为估计GA的辅助

7、指标。 2 头臀径(Crown-rump Length，CRL) CRL被认为是孕早期估计GA最准确的指标。 3 双顶径(Biparietal Diameter, BPD) 4 头围(Head Circumference，HC) 对于异常头型，BPD估计GA会产生较大误差，此时应测量HC估计GA。测量方法是利用超声直接获得HC数值，记为HC(measured)，或通过测量颅骨的前后径和最大横径，应用简便的公式计算，记为HC(drived)。 5 腹围(Abdominal Circumference，AC) 在孕15周以后可以直接测量AC，并记为AC (measured)，也可由公式计算获得。

8、6 股骨长(Femur length，FL) 当胎位不正，胎头入盆等原因影响BPD测量时，可辅以长骨测量估计GA，在长骨测量中多采用FL测量。 在采用超声指标估计GA时，在早孕期，特别在1013孕周采用头臀径估计GA最为理想。 而中孕期(1420孕周)，优先采用双顶径估计GA，国内外公式估计的GA差异根本在1d左右。 当胎儿的双顶径不宜测量时，可采用HC、AC和FL长估计GA，且选择基于中国人群或类中国人群 建立起来的超声指标与GA回归公式估计GA。 目前常见的与DS有关的血清学标志物 已明确的和DS有密切关系的血清标志物有近十种。其中有代表性的有： 甲胎蛋白(AFP)， 游离雌三醇(E3)

9、， 游离-绒毛膜促性腺激素(Free -HCG)， 妊娠相关血浆蛋 白-A(PAPP-A)， 抑制素A等。 AFP是胎儿血清中最常见的球蛋白，孕早期由卵黄囊产生，孕晚期由胎肝大量产生。 DS孕妇血清AFP浓度一般低于正常值，其在 DS筛查中的意义是其它指标无法替代的。 E3是胎儿肝、胎盘和肾上腺相互作用合成的一种甾体类激素。以游离形式由胎盘分泌入母体循环，反映了胎盘和胎儿功能状态，随孕周而升高。 DS那么低于正常，提示胎儿肾上腺皮质发育不良，导致E3合成减少。 绒毛膜促性腺激素(hCG) 是胎盘滋养层分泌的一种糖蛋白，hCG对染色体异常，尤其是唐氏综合征胎儿较为敏感。其中Free -HCG是敏

10、感性最高的标志物前者，后者。 因为Free -HCG和PAPP-A这两个指标在孕早期唐氏妊娠孕妇和同期正常孕妇之间有较明显的差异，可以用来识别高危人群。 如果准许筛查假阳性率为5%的话，上述两项血清指标和孕妇年龄综合考虑可以检测出62%的唐氏妊娠； 如果准许筛查假阳性率为9.5 %的话，那么可以检测出72%的唐氏妊娠。 值得注意的是，PAPP-A在孕13周以后就不再是一个很好的指标了。 抑制素A主要由黄体和胎 盘分泌，在受精和维持妊娠中起重要作用。DS中抑制素A水平是正常孕妇的2倍。其首个临床应用就是作为孕中期DS筛查的血清学指标。 2 血清学标志物筛查组合 临床常见的多采用孕中期二联和三联联

11、合筛查。 二联， 即 AFP和-HCG联合检测，结合孕妇年龄，计算风险率。适合孕中期1420w筛查，DS阳性率为 65%，国内多采用这种组合。 三联试验即AFP，E3，-HCG，该组合对1421 w孕妇进行筛查，利用风险评估软件计算风险率，检出率可达 6580%，假阳性率仅为5%，高龄孕妇更易被检出，被国际上广泛应用。 近年来，四联产前筛查的良好效率已被临床研究证实，有研究显示，抑制素 A加盟DS筛查后，使检出率提高10%，而假阳性率不增加，从而提高了筛查效率 。 目前用于DS等染色体异常的产前筛查方案有： 孕中期(1420周) ，二联AFP+游离-hCG(f-hCG)、三联AFP+f-hCG

12、+游离雌三醇(E3)和四联AFP+f-hCGf+E3+抑制素A(inh A) 筛查； 孕早期(911周) f-hCG+妊娠相关血浆蛋白(PAPP-A)+NT筛查，NT为在孕早期B超测量的胎儿颈后透明带厚度(NT) 。 目前兴旺国家已广泛开展孕早期筛查。英国血清、尿液和超声筛查研究(SURUSS和美国早期和中期妊娠风险评估FASTER两大前瞻性研究结果显示，孕早期联合筛查优于孕中期筛查。美国妇产科医师协会产前筛查指南指出，在同样的假阳性率(FPR)下，采用超声测定胎儿NT厚度的孕早期联合筛查优于孕中期筛查。 研究指出，目前最好的孕中期筛查是四联筛查。 美国早期和中期妊娠风险评估(FASTER)研

13、究机构对40000例产前筛查数据作统计后得出完全的整合筛查，孕早期 11周行NT和PAPP-A检测加上孕中期四联筛查于1517周能够到达检出率96%假阳性率(FPR)5% 英国的SURUSS(The Serum Urine and Ultrasound Screening Study)研究说明整合筛查是最有效和平安的方式，血清学整合筛查次之。早孕期联合筛查方案优于中孕期联合筛查，中孕期联合筛查方案中，四联筛查是最好的，二联筛查、三联筛查以及早孕期的单一NT筛查方案在将 来的DS产前筛查方案中不再保存。 目前国内外采用的DS产前筛查方案，均为能够精确定量的血清学产前筛查技术和(或) 接受标准化培

14、训认定的超声筛查方案。大局部采用一次采样 DS筛查方案，假设孕妇同意分别在早孕期和中孕期采样筛查，那么可采取独立式、集合式和序贯式等DS筛查方案。 血清学联合筛查和血清学联合超声指标筛查，使得筛查效率与假阳性之间获得最正确平衡 PAPP-A+游离-hCG+NT联合筛查。 单独利用超声测量胎儿NT(孕11周孕13+6)、鼻骨、颌面角、三尖瓣血流、静脉导管血流频谱，在假阳性率为 5%时，平均检出率为76%。在联合PAPP-A+游离-hCG后，大大提高了检出率。当假阳性率为5%时，检出率为85%90%。 孕早期血液采集时间为10-13+6周最好在10+2-11+6周 孕中期血液采集时间为15-20+

15、6周最好在15+2-17周。 11-13+6周做NT检查加拿大产前筛查指南 需要进行NT检查的适应征是： a)预产期EDD时年龄40的孕妇； b)多胎妊娠的孕妇； c)既往生育史的小孩或胎儿中有唐氏综合征，18三体或13三体； d) 35岁的妇女并有3次或屡次流产； e)HIV阳性。 当能提供NT检查时可将NT检查范围扩大到35-39岁的孕妇。 对于超过40岁的单胎妊娠孕妇或35岁多胎妊娠时羊膜穿刺也是选择 孕妇就诊时推荐筛查选项A孕期13+6周时的选项：1. 孕妇小于35岁：血清整合产前筛查SIPS包括两次血液检查：第一次在10-13+6周最好10+2-11+6周和第二次15-20+6周最好

16、15+2-17周。在第二次血液检查后可拿到结果。如果孕妇HIV阳性，做SIPS。如果NT可做，IPS。2.孕妇35-39岁SIPS;或如果NT能做，整合产前筛查IPS：IPS包含SIPS加颈半透明度NT超声测量时间为11-13+6周最好12-13+3周3 孕妇超过40岁SIPS；或如果NT超声可做，IPS;或绒膜绒毛取样CVS或羊膜穿刺而不用前面的筛查孕妇就诊时推荐筛查选项 4孕妇个人或家族史中有增加胎儿患唐氏综合征或18三体12的风险： SIPS；或如果NT超声可做，IPS;或绒膜绒毛取样CVS或羊膜穿刺而不用前面的筛查 5孕妇个人或家族史中有增加胎儿患除外唐氏综合征或18三体外的染色体异常

17、，CVS或或羊膜穿刺而不用前面的筛查 6孕妇多胎妊娠 如果NT超声可做，单独NT; 如果NT超声不可做，SIPS;或如果年龄35岁，羊膜穿刺而不用前面的筛查孕妇就诊时推荐筛查选项 B孕期为14周和20+6周时的孕妇选项： 1.孕妇小于35岁 Quad筛查包含15-20+6周的一次血液检测最好15+2-17周 2.孕妇35-39岁Quad 3. 孕妇超过40岁: Quad; 或羊膜穿刺不用前面的筛查.孕妇就诊时推荐筛查选项 4. 孕妇个人或家族中史具有可增加胎儿唐氏综合征或18三体 Quad; 或羊膜穿刺不用前面的筛查. 5. 孕妇个人或家族中史具有可增加胎儿除唐氏综合征或18三体外的染色体异常

18、 羊膜穿刺不用前面的筛查 6. 孕妇具有多胎妊娠： Quad; 或 如果超过35岁，羊膜穿刺不用前面的筛查.孕妇就诊时推荐筛查选项 C. 孕期21周妊娠选项没有前面的筛查: 1. 孕妇小于35岁: 详细的超声肢体检查并用软标记物评估非整倍性. 如果超声异常，进行母亲和胎儿医学专科或医学遗传学咨询. 2. 孕妇为35-39岁: 详细超声和 羊膜穿刺 3. 孕妇大于40岁: 详细超声；和羊膜穿刺 4. 孕妇个人或家族中史具有可增加她们具有胎儿唐氏综合征或18三体风险 详细超声和 羊膜穿刺 5. 孕妇个人或家族中史具有可增加胎儿除唐氏综合征或18三体外的染色体异常风险 详细超声和 羊膜穿刺 6. 孕

19、妇具有多胎妊娠： 详细超声和羊膜穿刺筛查项目血清整合产前筛查(SIPS)筛查整合产前筛查(IPS)Quad筛查(Quad)独立的颈透明度(NT)超声所有孕妇在13+6周孕期第一次就诊时孕妇在13+6周孕期第一次就诊时和：35岁在个人或家族史上有增加怀唐氏综合征和18三体胎儿风险的和HIV阳性所有孕妇在14-20+6周孕期第一次就诊时多胎妊娠孕妇在13+6周孕期第一次就诊时胎儿胎儿“染色体非整倍体无创基因检测染色体非整倍体无创基因检测 深圳华大基因研究院 深圳华大临床检验中心纲 要1 1 技术概述技术概述2 2 技术原理技术原理3 3 方法建立方法建立4 4 临床试验临床试验5 5 临床验证临床

20、验证6 6 个案分析个案分析7 7 项目总结项目总结技术概述胎儿“染色体非整倍体无创基因检测： 通过采集5 ml孕妇外周血，提取其中游离DNA进行大规模并行测序，结合生物信息分析，得出胎儿患“染色体非整倍体的风险率。适用范围：适用于染色体不别离而导致的染色体非整倍体妊娠12-24周的孕妇进行检测技术历程检测方法条件摸检测方法条件摸索索羊膜穿刺羊膜穿刺/ /脐血脐血穿刺穿刺2020例例方法学确立方法学确立9090例样本，双盲例样本，双盲门诊随机样本门诊随机样本依从性差，穿刺比例低依从性差，穿刺比例低随访困难随访困难临床高危样本临床高危样本有核型结果验证有核型结果验证质控体系建立质控体系建立质控体

21、系完善质控体系完善2 2 技术原理技术原理理论根底 孕妇外周血中存在胎儿DNA胎儿胎儿DNADNA的来源和特点的来源和特点来源：1 胎儿细胞通过胎盘渗透到母血中，被母体免疫系统破坏，胎儿DNA残留下来；2 胎儿细胞凋亡；3 胎盘滋养层细胞的凋亡根本特点：1 含量有一定的变化规律。妊娠第5周开始可检出胎儿游离DNA，随着孕周增加而增加，存在个体差异。2 分娩后短时间内消失，平均半衰期为16.3min (4-30min)， 2h就无法检出。再次妊娠不影响检测结果。3 DNA片段较小，平均166bp左右。常规技术很难检测理论模型 母亲母亲Chr 21Chr 21：95952=1902=190母体外周

22、血中母体外周血中Chr 21=190+10=200Chr 21=190+10=200以21-三体为例：100 DNA单位 /毫升血浆。其中，95个单位来源于母亲， 5个单位来源于胎儿 大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数量；大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数量；通过计数与比较：通过计数与比较： 正常胎儿正常胎儿 或者或者 21- 21-三体胎儿三体胎儿 正常胎儿正常胎儿 Chr 21Chr 21：5 52=102=10 母亲母亲Chr 21Chr 21：95952=1902=190 21-21-三体胎儿三体胎儿 Chr 21 Chr 21：5 53=1

23、53=15母体外周血中母体外周血中Chr 21=Chr 21=190+190+15=20515=205血浆血浆DNADNA测序测序定位定位覆盖深度统计覆盖深度统计覆盖深度Cov-chrN =参考序列染色体N上有效测序片总数 样品染色体N上有效测序片段总数AACGT-AACGT-CGATA-CGATA-TAGGC-TAGGC-ATCGC-ATCGC-生物信生物信息比对息比对Chr6Chr6Chr18Chr18ChrXChrXChr21Chr21Chr7Chr7Chr13Chr13Chr11Chr11ChrYChrY50bp50bp统计值计算统计值计算(t-Score(t-Score值值,L,L值

24、值) )确认胎儿是否为确认胎儿是否为T21,T18,T13T21,T18,T13测试样本ChrN的关联t-Score样本的覆盖深度参考样本的修正覆盖深度参考样本的标准差L值 = 对数样品正常可能性值对数样品患病可能性值=检测流程正常正常21-21-三体三体结果判读专利：专利： NONINVASIVE DETECTION OF FETAL GENETIC ABNORMALITY NONINVASIVE DETECTION OF FETAL GENETIC ABNORMALITY PCT PCT国际申请国际申请 申请号申请号 PCT/CN2021/001070 PCT/CN2021/001070

25、Abstract The current invention is directed to methods for noninvasive Abstract The current invention is directed to methods for noninvasive detection of fetal genetic abnormalities by large-scale sequencing of detection of fetal genetic abnormalities by large-scale sequencing of nucleotides from mat

26、ernal biological sample. The current invention not nucleotides from maternal biological sample. The current invention not only makes the detection much more accurate but also represents a only makes the detection much more accurate but also represents a comprehensive method for fetal aneuploidy dete

27、ction including sex comprehensive method for fetal aneuploidy detection including sex chromosome disorders such as XO, XXX, XXY, and XYY, etc.chromosome disorders such as XO, XXX, XXY, and XYY, etc.D21,maleD21,femaleT21,maleT21,femaleT21T21检测检测总样本数：28例T21：14例特异性：100%敏感性：100%方法学建立阶段数据分析无创基因检测无创基因检测 2

28、1-21-三体三体核型分析核型分析/ /产后随访产后随访合计合计阳性阳性阴性阴性阳性阳性1 13 31 1* *1414阴性阴性0 076767676合计合计131377779090* * 1 1 例假阳性样本出现在方法学建立的过程中，是由于数据积累缺乏和质控缺例假阳性样本出现在方法学建立的过程中，是由于数据积累缺乏和质控缺乏导致的。乏导致的。结论：与核型分析结果相比，该方法检测结论：与核型分析结果相比，该方法检测21-21-三体的正确百分率为三体的正确百分率为98.9%98.9%。说明该。说明该检测流程和分析方法已初步建立，可以进行下一步研究检测流程和分析方法已初步建立，可以进行下一步研究方

29、法学建立阶段，方法学建立阶段，9090例样本测试情况例样本测试情况53质控体系建立质控体系建立质控指标1图图1 不同胎儿不同胎儿DNA浓度浓度所需数据量所需数据量测序数据量测序数据量孕妇外周血胎儿孕妇外周血胎儿DNADNA含量存在个体差异，含量存在个体差异， 5-10% 5-10%，平均，平均7.5%7.5%。目前的测序数据量可以准确的检测出胎儿目前的测序数据量可以准确的检测出胎儿DNADNA含量含量3.5%3.5%的样本。的样本。图图2 测序质量值分布测序质量值分布2 2 测序质量测序质量 要求其每个碱基位置的平均质量要求其每个碱基位置的平均质量值值3030。55质控指标质控指标2 23 3

30、 数据一致性数据一致性 用于衡量本批次数据是否与标准参照用于衡量本批次数据是否与标准参照样数据一致。一致那么可以进行下一步样数据一致。一致那么可以进行下一步分析，不一致那么说明本批次数据可能分析，不一致那么说明本批次数据可能由于某因素造成较大偏差，需要重新实由于某因素造成较大偏差，需要重新实验。验。图图3 数据量数据量的一致性分析的一致性分析4 GC4 GC碱基碱基含量含量 待测样本的待测样本的GCGC碱基碱基含量含量，必需必需分布在分布在标标准参照样数据范围之内。准参照样数据范围之内。图图4 GC碱基含量分析碱基含量分析4 4 临床试验临床试验深圳市人民医院深圳市人民医院深圳市妇幼保健院深圳

31、市妇幼保健院珠海市妇幼保健院珠海市妇幼保健院临床试验流程签署知情同意书、血样采集、编码共计签署知情同意书、血样采集、编码共计31773177例例胎儿胎儿“染色体非整倍体染色体非整倍体无创基因检测无创基因检测羊水羊水/ /脐血核型分析脐血核型分析共计共计11981198例例判断结果判断结果判定结果为假阴判定结果为假阴/ /阳性阳性判定结果为真阴判定结果为真阴/ /阳性阳性统计数据分析，编制统计数据分析，编制“临床试验研究报告临床试验研究报告一致一致不一致不一致双盲试验双盲试验临床试验阶段，3177例样本根本情况中位数或中位数或% %范围或例数范围或例数年龄年龄( (岁岁) )31.531.518

32、-4518-45孕周孕周( (周周) )17w17w+4+47w7w+6+6- 37w- 37w+4+4年龄年龄3535岁岁18.16%18.16%577/3177577/3177进行产筛进行产筛62.95%62.95%2000/31772000/3177产筛高危产筛高危11.45%11.45%229/2000229/2000胎儿细胞核型分析胎儿细胞核型分析37.71%37.71%1198/31771198/3177胎儿细胞胎儿细胞FISHFISH分析分析0.03%0.03%1/31771/3177样本概述样本概述临床试验结果临床试验结果 3177 3177例临床试验样本进行无创检测、产筛、核

33、型检查及回访情况一览表例临床试验样本进行无创检测、产筛、核型检查及回访情况一览表孕周孕周无创检无创检测例数测例数无创检测结果无创检测结果产筛结果产筛结果核型结果核型结果回访结果回访结果T21T21T18T18未检出未检出T21T21和和T18T18高危高危低危低危未做未做总例数总例数结果结果相符相符结果结果不符不符回访回访例数例数符合符合不符不符胎死胎死宫内宫内7-11w+67-11w+666661 10 065654 4515111117 77 70 0404040400 00 012-15w+612-15w+65275271 12 25245249696384384474725252525

34、0 01141141141140 00 016-20w16-20w120712079 95 51193119360607087084394394664664654651 1323232320 00 020w+120w+1-24w-24w56556513134 4548548323264644694695195195195190 0191918180 01 124w+1-24w+1-39w39w1281285 55 51181180 010101181181171171171170 0101010100 00 0小计小计24932493292916162448244819219212171217

35、1084108411341134113311331 12152152142140 01 1不详不详68468410102 267267237375545549393646464640 0424241410 01 1合计合计317731773939181831203120229229177117711177117711981198119711971 12572572552550 02 2注：注： 回访主要针对无创基因检测结果阴性的受检者；其中两例流产，其中一例为巨细胞感染，另一例原因未明。回访主要针对无创基因检测结果阴性的受检者；其中两例流产，其中一例为巨细胞感染，另一例原因未明。临床试验结果3

36、177例临床试验样本的孕周分布孕孕 周周例例 数数不详不详临床试验结果临床试验结果 3177 3177例临床试验样本进行无创检测、产筛、核型检查及回访情况一览表例临床试验样本进行无创检测、产筛、核型检查及回访情况一览表孕周孕周无创检无创检测例数测例数无创检测结果无创检测结果产筛结果产筛结果核型结果核型结果回访结果回访结果T21T21T18T18未检出未检出T21T21和和T18T18高危高危低危低危未做未做总例数总例数结果结果相符相符结果结果不符不符回访回访例数例数符合符合不符不符胎死胎死宫内宫内7-11w+67-11w+666661 10 065654 4515111117 77 70 04

37、04040400 00 012-15w+612-15w+65275271 12 252452496963843844747252525250 01141141141140 00 016-20w16-20w120712079 95 51193119360607087084394394664664654651 1323232320 00 020w+120w+1-24w-24w56556513134 4548548323264644694695195195195190 0191918180 01 124w+1-24w+1-39w39w1281285 55 51181180 0101011811811

38、71171171170 0101010100 00 0小计小计249324932929161624482448192192121712171084108411341134113311331 12152152142140 01 1不详不详68468410102 267267237375545549393646464640 0424241410 01 1合计合计317731773939181831203120229229177117711177117711981198119711971 12572572552550 02 2注：注： 回访主要针对无创基因检测结果阴性的受检者；其中两例流产，其中一例

39、为巨细胞感染，另一例原因未明。回访主要针对无创基因检测结果阴性的受检者；其中两例流产，其中一例为巨细胞感染，另一例原因未明。 * 以T21为例，唐筛结果低危样本中，无创检测为阳性的样本与核型分析结果相符3177例临床试验样本进行唐氏筛查的情况、及无创检测T21结果产筛结果低危产筛结果低危17711771例例产筛结果高危产筛结果高危229229例例产筛未做产筛未做11771177例例T21T21：4 4 例例T21T21：30 30 例例T21T21：5 5例例临床试验结果临床试验结果临床试验结果临床试验结果 3177 3177例临床试验样本进行无创检测、唐筛、核型检查及回访情况一览表例临床试验

40、样本进行无创检测、唐筛、核型检查及回访情况一览表孕周孕周无创检无创检测例数测例数无创检测结果无创检测结果唐筛结果唐筛结果核型结果核型结果回访结果回访结果T21T21T18T18未检出未检出T21T21和和T18T18高危高危低危低危未做未做总例数总例数结果结果相符相符结果结果不符不符回访回访例数例数符合符合不符不符胎死胎死宫内宫内7-11w+67-11w+666661 10 065654 4515111117 77 70 0404040400 00 012-15w+612-15w+65275271 12 252452496963843844747252525250 01141141141140

41、 00 016-20w16-20w120712079 95 51193119360607087084394394664664654651 1323232320 00 020w+120w+1-24w-24w56556513134 4548548323264644694695195195195190 0191918180 01 124w+1-24w+1-39w39w1281285 55 51181180 010101181181171171171170 0101010100 00 0小计小计249324932929161624482448192192121712171084108411341134

42、113311331 12152152142140 01 1不详不详68468410102 267267237375545549393646464640 0424241410 01 1合计合计317731773939181831203120229229177117711177117711981198119711971 12572572552550 02 2注：注： 回访主要针对无创基因检测结果阴性的受检者；其中两例流产，其中一例为巨细胞感染，另一例原因未明。回访主要针对无创基因检测结果阴性的受检者；其中两例流产，其中一例为巨细胞感染，另一例原因未明。临床试验结果随访中随访中17211721例例8

43、2%82%无创检测无创检测T21T21：阳性：阳性1 1例，例，结果无反响结果无反响有核型结果有核型结果 122 122例例5.8%5.8%无创检测无创检测T21T21：阳性：阳性 15 15 例例结果已结果已 随访随访 257 257例例12.2%12.2%无创检测无创检测T21T21：阳性：阳性1 1例，经例，经FISHFISH验证验证255255例报告婴儿正常，例报告婴儿正常，2 2例流产例流产门诊随机样本门诊随机样本2101 2101 例例) )产筛高危样本产筛高危样本1076 1076 例，均有核型结果例，均有核型结果) )核型结果阳性核型结果阳性2222例例2.0%2.0%核型结果

44、阴性核型结果阴性10541054例例98.0%98.0%胎儿胎儿“染色体非整倍体无创基因检测染色体非整倍体无创基因检测31773177例例无创基因检测无创基因检测 21-21-三体三体核型分析核型分析合计合计阳性阳性阴性阴性阳性阳性3 36 61 13 37 7阴性阴性0 01161116111611161合计合计3 36 611621162119811981198例门诊随机样本122例+临床高危样本1076例有核型分析结果的样本，胎儿“21-三体综合征无创基因检测，检出“21-三体阳性病例37例，1例为假阳性，检出阴性病例1161例。主要评价指标：检出率：100.00%；假阴性率：0.00%

45、；特异性：99.91%；假阳性率：0.08%。假阳性1例(原因分析，早期质控系统不完善，数据量未到达要求；分析方法不全面胎儿胎儿“染色体非整倍体无创基因检测结果与核型分析比较染色体非整倍体无创基因检测结果与核型分析比较 临床试验结果临床试验结果同一受检者不同孕周检测结果对照同一受检者不同孕周检测结果对照编号编号( (医院）医院）年龄年龄孕周孕周抽血日期抽血日期无创基因无创基因检测结果检测结果染色体核型染色体核型SR0082SR00822929202020091229 20091229 T21T2147,XY,+2147,XY,+2169569523232010011920100119T21T2

46、147,47,XYXY,+21,+21SR0083SR00833030232320091226 20091226 T21T2147,XY,+2147,XY,+2169169125252010011920100119T21T2147,47,XYXY,+21,+21SR0084SR00843333202020100126 20100126 T21T2147,XY,+2147,XY,+2172572524242010022320100223T21T2147,47,XYXY,+21,+21SR0085SR00853535202020100126 20100126 T21T2147,XY,+2147,X

47、Y,+2172172122222010021120100211T21T2147,47,XYXY,+21,+21SR0081SR00812828252520091208 20091208 T18T1847,47,XYXY,+18,+1863063028282010010520100105T18T1847,47,XYXY,+18,+18339339252521212009090820090908T21T2147,47,XXXX,+21,+2139039027272009101320091013T21T2147,47,XXXX,+21,+2165165145451616201001122010011

48、2T21T2147,47,XXXX,+21,+2173873822222010022620100226T21T2147,47,XXXX,+21,+21临床试验结果临床试验结果 临床试验临床试验5 5 临床验证临床验证39623962例临床样本的根本情况例临床样本的根本情况临床验证临床验证中位数或百分比中位数或百分比范围或检测例数范围或检测例数年龄年龄( (岁岁) )353520-4920-49孕周孕周( (周周) )20w20w+5+58w8w+1+1-36w-36w年龄年龄3535岁岁45.78%45.78%1814/39621814/3962进行唐筛进行唐筛55.22%55.22%2188

49、/39622188/3962唐筛异常唐筛异常82.40%82.40%1803/21881803/2188超声检测超声检测98.81%98.81%3915/39623915/3962B B超异常超异常5.13%5.13%201/3915201/3915胎儿细胞核型分析胎儿细胞核型分析2.52%2.52%100/3962100/3962胎儿细胞胎儿细胞FISHFISH分析分析1.67%1.67%66/396266/3962截至截至20212021年年9 9月月1 1日日临床验证注：注： * *检测结果为检测结果为T21T21的样本中的样本中5 5例无核型结果，其中例无核型结果，其中2 2例拒绝羊穿

50、，例拒绝羊穿，1 1例羊穿预约时间未到，例羊穿预约时间未到，2 2例等待核型结果。例等待核型结果。 回访：已对回访：已对235 235 例进行了例进行了 回访，回访，2 2例流产妊高症、宫颈内口松弛，例流产妊高症、宫颈内口松弛，1 1例引产胎儿心脏畸形例引产胎儿心脏畸形孕妇孕妇年龄年龄血清学血清学筛查筛查T21T21检测结果检测结果无创检测无创检测阳性例数阳性例数核型验证核型验证无创检测无创检测阴性例数阴性例数核型验证核型验证无创检测无创检测样本总数样本总数核型验证核型验证总数总数3535 121212121713171328281725172540403535高危高危151512121527

51、15274141154215425353低危低危1 11 12712710 02722721 1未做未做3 31 14044043 34074074 4不详不详1 11 115151 116162 2合计合计32322727* *3930 3930 73733962396210010039623962例临床验证样本，进行无创检测、唐筛、核型检查及回访情况一览表例临床验证样本，进行无创检测、唐筛、核型检查及回访情况一览表6 6 个案分析个案分析临床案例 1 21-21-三体检出三体检出样本编号：样本编号： PDP10003761 PDP10003761孕妇年龄：孕妇年龄：3131唐唐 筛：筛：1

52、/510 1/510 低风险低风险无创检测：无创检测：T21T21核型分析：核型分析：4747，XXXX，+21+21 1例T21假阳性：72临床案例临床案例 2 2 样本编号：样本编号： PDB100001881 PDB100001881 孕妇年龄：孕妇年龄：28 28 孕周：孕周：1818周周 唐唐 筛：筛： 1/5600 1/5600低风险低风险 无创检测：无创检测：T21 T21 核型分析：核型分析：4646，XXXX 原因分析原因分析 样本编号样本编号检测次数检测次数t t-score-score风险指数风险指数测序测序核酸片段数核酸片段数结果结果PDP100001881-1-7PD

53、P100001881-1-7第一次检测第一次检测3.8004243243.8004243241/01/0722654722654T21 T21 PDP100001881-1-7PDP100001881-1-7第二次检测第二次检测-0.7487393-0.74873931/1941322366671/194132236667970511970511未检出未检出T21T21PDP100001881-2-12PDP100001881-2-12重新制备样本重新制备样本后再检测后再检测0.31969310.31969311/1870702291/187070229972991972991未检出未检出T2

54、1T2172Chr 21# 测序获得的 核酸片段数量 解决方案解决方案 完善质控体系，确保一定的测序数据量完善质控体系，确保一定的测序数据量，每例样本测序量，每例样本测序量 要求到达要求到达20000002000000核酸片段数；核酸片段数； 优化分析方法，改用双假设检验优化分析方法，改用双假设检验l早期研究阶段经验缺乏早期研究阶段经验缺乏 测序数据量缺乏导致结果误判；分析方法不完善测序数据量缺乏导致结果误判；分析方法不完善l早期质量控制体系不完善早期质量控制体系不完善 关键环节没有明确质控标准关键环节没有明确质控标准18-18-三体检出三体检出样本编号：样本编号：PDP100002190PD

55、P100002190孕妇年龄：孕妇年龄：3232唐唐 筛：未做筛：未做无创基因检测：无创基因检测：T18T18核型分析：核型分析：4747，XYXY，+18+18临床案例临床案例 3 3 13- 13-三体检出三体检出样本编号：样本编号：PDP100003321PDP100003321孕妇年龄：孕妇年龄：3232唐唐 筛：未做筛：未做无创基因检测：无创基因检测：T13T13核型分析：核型分析：4747，XXXX，+13+13临床案例临床案例 4 4 1 1例早孕周的特殊案例例早孕周的特殊案例样本编号：样本编号：PDP100000063PDP100000063孕妇年龄：孕妇年龄：3131孕孕 周：周：11w11w+3+3唐唐 筛：未做筛：未做无创基因检测：无创基因检测：T21T21FISHFISH：4747，XXXX，+21+21临床案例临床案例 5 5 该孕妇已经流产