生物化学：第03章 蛋白质I：蛋白质的组成 第03节2_第1页
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文档简介

1、* 用途: 定性或定量氨基酸（四）巯基的反应1 巯基不稳定，易被氧化成二硫键 2半胱氨酸胱氨酸 2 -SH-S-S-2 与重金属反应 AASH Ag+AA-SAg3 二硫键的打开氧化：Cys-S-S-Cys + HCOOOH2AA-SO3- （磺基丙氨酸）还原：Cys-S-S-Cys-巯基乙醇2Cys-SH4 巯基的保护 巯基的烷基化试剂：碘乙酸、碘乙酰胺 SHICH2COOHSCH2COOHHI四、氨基酸的光学活性和光谱性质1 旋光性 除Gly外，都含C*，对映体，光学异构体 几乎所有天然存在的蛋白质氨基酸都为L型氨基酸的构型指-碳的构型2 光吸收Tyr, Phe, Trp 因苯环上含共轭双

2、键， 在近紫外区吸收光，其吸收高峰在280nm左右。 A=CL紫外法测定蛋白质浓度的原理。第三节 氨基酸的分析分离 层析系统:固定相（stationary phase） 流动相（mobile phase） 分配系数 Kd有效分配系数 Keff一、分配柱层析（Partition Chromatography） 二、纸层析（Filter-paper Chromatography）Rf值：从原点到氨基酸停留点的距离 / 原点到溶剂前沿的距离三、薄层层析（Thin-layer Chromatography） 四、离子交换柱层析（Ion-exchange Column Chromatography） 离

3、子交换树脂带酸性基团、能解离出质子，与溶液中阳离子发生交换的叫阳离子交换树脂。-SO3H(强酸型)、COOH(弱酸型)带正电荷的AA与阳离子交换树脂结合力强。带碱性基团、能解离出OH-、可与溶液中阴离子发生交换的叫阴离子交换树脂。N(CH3)OH(强碱型)、-NH3OH(弱碱型)带负电荷的AA与阴离子交换树脂结合力强。五、气相层析 （gas-liquid chromatography） 流动相为高压气体（氢、氮）样品气化，基于分配原理气相层析仪（gas-chromatograph）优点：微量、快速六、高效液相层析（HPLC） high performance liquid chromatography 溶剂系统为高压 优点：快速、灵敏、高效习题为什么用紫外法能测定蛋白质含量？阳离子交换柱，pH=3时，中性AA、酸性AA、碱性AA，哪一种先被洗脱下来。为什么？名词解释：氨基酸pI 桑格反应 艾德曼反应 HPLC 阳离子交换剂 有效分配系数分配柱层析中，填充物就是固定相。（ ）分配柱层析中，固定相是指填充物吸附的一层不会流动的结合水。（ ）纸层析基于分配原理。（ ）一定条件下，某AA的Rf值为恒定的。（ ）氨基酸纸层析是基于氨基酸溶解度进行分离的一种技术。（）阳离子交换树脂上结合有酸性基团，可以解离出阳离子。（

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