第十六章 唾液及唾液斑检验

1、第十六章第十六章 唾液及唾液斑检验唾液及唾液斑检验 Nsmc xdd 2 3 打喷嚏不光打喷嚏不光 会传播疾病会传播疾病 还会还会 4 5 6 7 第一节第一节 概述概述 一、唾液（斑）的特点一、唾液（斑）的特点 J 概念：概念： 唾液（唾液（ salivasaliva ）：唾液腺的分泌物）：唾液腺的分泌物 唾液斑（唾液斑（ saliva stainstain）：唾液干燥后形成的斑痕）：唾液干燥后形成的斑痕 J 唾液来源：唾液来源： 颌下腺约颌下腺约70%，腮腺约，腮腺约25%,舌下腺约舌下腺约5%，其余小唾液腺，其余小唾液腺 9 J成分：（水分占成分：（水分占99.4%） 有机物有机物-粘粘

2、/球蛋白质、氨基酸、尿素、尿酸、球蛋白质、氨基酸、尿素、尿酸、唾液淀粉酶唾液淀粉酶、麦、麦 芽糖酶、芽糖酶、血型物质血型物质 无机物无机物-钠、钾、氯、钙、铵、磷酸盐、碳酸盐、钠、钾、氯、钙、铵、磷酸盐、碳酸盐、硫氰酸盐，硫氰酸盐，其其 余为固形物（余为固形物（口腔脱落上皮细胞口腔脱落上皮细胞、大量细菌、食物残渣）、大量细菌、食物残渣） J性状：性状： 无色、无味、接近中性（无色、无味、接近中性（ph6.6-7.1） J分泌量：分泌量： 正常成年人每日分泌唾液约正常成年人每日分泌唾液约1.01.5升，分泌量及性质受精神因升，分泌量及性质受精神因 素、刺激的强度和性质及食物种类有关系。素、刺激的

3、强度和性质及食物种类有关系。 湿润口腔，调和润湿食物，使食物溶解并引起味觉，湿润口腔，调和润湿食物，使食物溶解并引起味觉， 便于吞咽便于吞咽 淀粉酶淀粉酶可水解淀粉及糖原，起到消化作用；可水解淀粉及糖原，起到消化作用； 防止口腔干燥，清除食物残渣，洁净口腔；其中防止口腔干燥，清除食物残渣，洁净口腔；其中硫硫 氰酸盐氰酸盐及蛋白质抗体可杀灭细菌。某些动物唾液中及蛋白质抗体可杀灭细菌。某些动物唾液中 含神经生长因子和表皮生长因子可有助于创面收缩，含神经生长因子和表皮生长因子可有助于创面收缩， 伤口愈合。伤口愈合。 中和胃酸保护胃壁。中和胃酸保护胃壁。 二、唾液的功能二、唾液的功能 应用价值：主要是

4、应用价值：主要是个人识别个人识别和和亲子鉴定亲子鉴定方面。方面。 目的要求：是否唾液（斑）；个人识别目的要求：是否唾液（斑）；个人识别 三、唾液（斑）检验三、唾液（斑）检验 能否正确能否正确收集与保存收集与保存唾液（斑）是检唾液（斑）是检 材能否正确鉴定的关键所在。材能否正确鉴定的关键所在。 12 第二节第二节 唾液（斑）的提取唾液（斑）的提取 可能出现的地方：可能出现的地方： 现场的烟蒂、手帕、口罩、纸巾、瓜子皮、果核、现场的烟蒂、手帕、口罩、纸巾、瓜子皮、果核、 嚼过的口香糖、喝过水的茶杯；尸体皮肤（口唇部、嚼过的口香糖、喝过水的茶杯；尸体皮肤（口唇部、 乳房）及其他物品上的咬痕等均可遗留

5、有唾液斑。乳房）及其他物品上的咬痕等均可遗留有唾液斑。 唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，紫外线下发淡青色荧光唾液斑在白色背景下呈现淡黄色，紫外线下发淡青色荧光 13 14 一、中华人民共和国安全行业标准 中制定了血液及体液检材的提取标准， 其中也包括了唾液（斑）的相关内容。 1、新鲜唾液的提取：应要求被鉴定人先漱口，再将 纱布或棉拭子放人口中，浸湿后取出，立即置通 风干燥处晾干，分别包装，作好有关的记录。也 可将自然流出的唾液12mL ，置干净容器内置冰 冻保存 ，或者立即放水浴中煮沸10min，灭活唾 液中的血型分解酶活性，然后置4冰箱保存。 常用的唾液（斑）提取方法常用的唾液（斑）提取方法

6、2、现场发现可以痰迹或尸体皮肤及其他物体现场发现可以痰迹或尸体皮肤及其他物体 上咬痕部位的可疑唾液斑，应用上咬痕部位的可疑唾液斑，应用生理盐水生理盐水 浸润浸润的棉拭子或纱布，擦拭斑迹，再用干的棉拭子或纱布，擦拭斑迹，再用干 棉拭子或纱布擦拭相同部位，晾干，该两棉拭子或纱布擦拭相同部位，晾干，该两 份提取物应装入份提取物应装入同一同一物证袋晾干后包好，物证袋晾干后包好， 备检（两步法擦拭）。备检（两步法擦拭）。 3、烟蒂、瓜子壳、果核均应用镊子提取，按、烟蒂、瓜子壳、果核均应用镊子提取，按 不同提取部位分别装入物证袋，做好标记。不同提取部位分别装入物证袋，做好标记。 17 4.对可疑的用于堵嘴

7、的手帕或衣物等均应整对可疑的用于堵嘴的手帕或衣物等均应整 件提取，如有湿润部位，应晾干后包装送件提取，如有湿润部位，应晾干后包装送 检。检。 5.犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用犯罪分子用过的可疑口杯、茶具等均可用 两步擦拭法擦拭其边缘部位，或直接送检。两步擦拭法擦拭其边缘部位，或直接送检。 6.信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时，对信封口或邮票背面可疑遗留唾液斑时，对 该信封和邮票整件提取，装物证袋，送检。该信封和邮票整件提取，装物证袋，送检。 第三节第三节 唾液（斑）的检测唾液（斑）的检测 1、肉眼检验、肉眼检验 2、预实验、预实验 3、确证实验、确证实验 4、个人识别、个人识别 19

8、1、肉眼检验、肉眼检验 唾液斑在白色背景下呈现唾液斑在白色背景下呈现淡黄色淡黄色 唾液斑在紫外线下发出唾液斑在紫外线下发出淡青色荧光淡青色荧光 20 2、预实验、预实验 （1）淀粉淀粉-碘试验碘试验 （2）不溶性淀粉）不溶性淀粉-染料复合物试验染料复合物试验 （3）斑点法）斑点法 试验原理试验原理： 淀粉遇碘呈淀粉遇碘呈蓝色蓝色。唾液中含有大量淀粉酶，能将。唾液中含有大量淀粉酶，能将 淀粉分解为糖，糖与碘不呈蓝色反应。因此，将淀粉分解为糖，糖与碘不呈蓝色反应。因此，将 已知淀粉溶液与唾液斑作用后，再加碘，若不显已知淀粉溶液与唾液斑作用后，再加碘，若不显 蓝色，说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分

9、解。蓝色，说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分解。 然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物糖的然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物糖的 存在，便可判断检材中含有淀粉酶存在，便可判断检材中含有淀粉酶。 淀粉淀粉-碘试验碘试验 22 主要试验材料：主要试验材料： 0.01%淀粉溶液、碘液、淀粉溶液、碘液、1%氯化三苯基四氮氯化三苯基四氮 唑溶液、碱性铜试剂等唑溶液、碱性铜试剂等 试验方法：试验方法： 首先证明淀粉酶的存在，然后阳性者进一步首先证明淀粉酶的存在，然后阳性者进一步 证明糖的存在。证明糖的存在。 试验结果分析：试验结果分析： 有无有无蓝色变化蓝色变化；有无；有无红色沉淀红色沉淀 试验注意

10、事项： 本试验灵敏度较高，要注意所出现假阳性 如 烟草浸出液；假阴性结果，如陈旧检材。 24 3、确证实验 （1）口腔黏膜脱落上皮细胞检查 （2）三氯化铁试验 （3）其它（抗腮腺素血清、发射光谱法、叠 氮钠法等） 唾液中含有口腔粘膜脱落上皮细胞，将检 材用生理盐水充分浸泡，弃去载体，离心， 取沉淀物涂片，干燥后HE染色，显微镜下 检查。如发现口腔粘膜脱落上皮细胞，结 合淀粉酶试验阳性结果，可判断为唾液斑， 如同时查见食物残渣，则更支持此结论。 口腔粘膜脱落上皮细胞的检查 三氯化铁试验 试验原理： 唾液中硫氰酸根离子在酸性条件下可与高 价铁离子反应生成红色络合物。 试验材料： 40%三氯化铁溶液

11、，2.9M盐酸 27 试验方法： 将一滴可疑唾液或唾液斑浸液滴于白瓷板凹 内，先加一滴2.9M 盐酸溶液，再加一滴 40%三氯化铁溶液，摇匀，观察结果 实验结果： 呈现浅红色者为阳性反应，证明是唾液斑。 硫氰酸根离子浓度较高时，呈现棕红色或 深红色，不变色或棕绿色则为阴性反应。 28 注意事项：注意事项： 本法的特异性优于淀粉酶检出法，灵敏度虽本法的特异性优于淀粉酶检出法，灵敏度虽 然低于淀粉酶检出法，但对于腐败唾液斑然低于淀粉酶检出法，但对于腐败唾液斑 而言，该法不受影响。而言，该法不受影响。 当淀粉酶检出试验阳性，在排除被硫氰酸当淀粉酶检出试验阳性，在排除被硫氰酸 盐、溴化钾、重铬酸钾等化

12、学药品污染情盐、溴化钾、重铬酸钾等化学药品污染情 况下，强阳性结果可以确证唾液斑。况下，强阳性结果可以确证唾液斑。 29 4、个人识别、个人识别 （1）唾液（斑）红细胞）唾液（斑）红细胞血型检测血型检测 （2）唾液（斑）多态性蛋白和酶的检测）唾液（斑）多态性蛋白和酶的检测 （3）唾液（斑）的）唾液（斑）的DNA分析分析 （4）唾液）唾液(斑斑)的性别鉴定的性别鉴定 30 中和试验（中和试验（测定原理及方法与精斑类似测定原理及方法与精斑类似） 免疫学方法：灵敏度高，适用于免疫学方法：灵敏度高，适用于非分泌型非分泌型和和中中 和试验阴性和试验阴性者，斑点者，斑点ELISA、 ELISA-ABC等等

13、 其它方法：解离试验、混合凝集试验其它方法：解离试验、混合凝集试验 31 唾液（斑）多态性蛋白：唾液（斑）多态性蛋白： 唾液碱性蛋白、唾液酸性蛋白、唾液碱性蛋白、唾液酸性蛋白、唾液富含脯氨酸蛋唾液富含脯氨酸蛋 白白、唾液双带蛋白、腮腺唾液中带快蛋白等、唾液双带蛋白、腮腺唾液中带快蛋白等 唾液（斑）多态性酶：唾液（斑）多态性酶： 唾液淀粉酶唾液淀粉酶、唾液脂酶、唾液、唾液脂酶、唾液6-磷酸盐脱氢酶、唾液磷酸盐脱氢酶、唾液 酸性磷酸酶等酸性磷酸酶等 检测方法：检测方法： 酸性尿素淀粉凝胶电泳、碱性酸性尿素淀粉凝胶电泳、碱性PAGE和等电聚焦电泳和等电聚焦电泳 32 图图1聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰

14、胺凝胶电泳Pr表型模式图表型模式图 等电聚焦电泳：等电聚焦电泳： 唾液淀粉酶唾液淀粉酶6种表型种表型 PAGE： 唾液脂酶唾液脂酶3种种 唾液过氧化物酶唾液过氧化物酶3种唾液种唾液 富含脯氨酸蛋白富含脯氨酸蛋白3种（图种（图1） 唾液糖蛋白唾液糖蛋白11种种 口腔粘膜脱落上皮细胞：口腔粘膜脱落上皮细胞： J 据报道，每据报道，每15ml唾液及漱口水、每唾液及漱口水、每5cm2的唾液拭子的唾液拭子 与唾液斑与唾液斑DNA平均含量分别为平均含量分别为12g、22g、1.3g及及 0.8g。测定。测定10个烟头，每个烟头个烟头，每个烟头DNA的平均含量是的平均含量是 12120ng。 J基因组和线粒

15、体基因组和线粒体DNA分析分析 JDNA提取方法：提取方法：Chelex-100法法、有机溶剂法及其它、有机溶剂法及其它 准确、有效地从唾液（斑）中提取准确、有效地从唾液（斑）中提取DNA，是进，是进 行行DNA分析的关键。分析的关键。 分析血痕、精斑分析血痕、精斑DNA多态性的方法，均能多态性的方法，均能 应用于唾液。好的唾液斑检材，只要能提应用于唾液。好的唾液斑检材，只要能提 取出大分子取出大分子DNA，可进行，可进行DNA指纹图分析；指纹图分析； 陈旧唾液斑，陈旧唾液斑，DNA部分降解，可用部分降解，可用PCR法分法分 析。所以分析析。所以分析DNA多态性是目前进行唾液多态性是目前进行唾

16、液 ( 斑斑 ) 个 人 识 别 的 有 效 手 段 。个 人 识 别 的 有 效 手 段 。 J形态学分析形态学分析 X、Y染色质染色质 JDNA分析分析 1.染色体特异性片段：染色体特异性片段：DXS454 2.X-Y同源序列：牙釉基因同源序列：牙釉基因(Amelogenin)、 ZFYZFX基因基因 3.Y-STR或或X-STR 36 某日，在某地一大桥洞中发现一具无名男某日，在某地一大桥洞中发现一具无名男 尸。经法医检验，确定为他杀。死因是棍尸。经法医检验，确定为他杀。死因是棍 棒致颅脑损伤死亡。现场勘验提取到的主棒致颅脑损伤死亡。现场勘验提取到的主 要法医物证为要法医物证为2根带血迹

17、的木棒、根带血迹的木棒、5处血迹、处血迹、 4堆瓜子壳、堆瓜子壳、8枚烟蒂案。枚烟蒂案。 物证检验结果： 现场 5处血迹、2根木棒上血迹均为死者所 留；现场 8枚烟蒂和 3堆瓜子壳上唾液斑分别 为不同于死者的另外4名男性所留，另1堆瓜 子壳上唾液斑未检出STR分型数据。 通过D N A数据库比对，直接认定案犯。 瓜子壳上唾液斑瓜子壳上唾液斑D N A提取的特点：提取的特点： 按照一般人嗑瓜子的习惯，一堆瓜子壳为同一个人留下的可能性较大，按照一般人嗑瓜子的习惯，一堆瓜子壳为同一个人留下的可能性较大， 所以在现场提取瓜子壳时应注意按照所以在现场提取瓜子壳时应注意按照不同方位分堆提取不同方位分堆提取

18、，不能全部集，不能全部集 中在一块提取。在中在一块提取。在 D N A检验时可以在同一堆内检验时可以在同一堆内选择选择 2至至 3枚枚瓜子壳瓜子壳 放入同一离心管中进行检验。由于每个人嗑瓜子的方式不同，在瓜子放入同一离心管中进行检验。由于每个人嗑瓜子的方式不同，在瓜子 壳上留下的唾液量也有较大差异，因此对送检的瓜子壳要认真挑选比壳上留下的唾液量也有较大差异，因此对送检的瓜子壳要认真挑选比 较新鲜的瓜子壳，要注意挑选较新鲜的瓜子壳，要注意挑选相对潮湿相对潮湿的含唾液成分较多的进行检验，的含唾液成分较多的进行检验， 这样检验成功的概率比较高。这样检验成功的概率比较高。 瓜子在加工时一般加入糖、盐、

19、味精等佐料，这些成分对瓜子在加工时一般加入糖、盐、味精等佐料，这些成分对 DNA扩增扩增 有一定的抑制作用，所以用有一定的抑制作用，所以用 Chelex-100法提取后要进一步法提取后要进一步纯化处理纯化处理。 2 0 0 6 年某日，在一出租房内，发现龙某年某日，在一出租房内，发现龙某(女，女，2 0岁，岁，) 下身裸露倒在床上，已死亡。现场位于一下身裸露倒在床上，已死亡。现场位于一 砖混结构的出租房内，有清理痕迹，地面倒有大砖混结构的出租房内，有清理痕迹，地面倒有大 量水痕，此现场为破坏现场，现场勘验没有提取量水痕，此现场为破坏现场，现场勘验没有提取 到有价值的痕迹物证。死者龙某颈部勒有一条撕到有价值的痕迹物证。死者龙某颈部勒有一条撕 破的短裤，死因系机械性窒息。提取死者阴道拭破的短裤，死因系机械性窒息。提取死者阴道拭 子、地上水迹等相关物证。考虑到死者有被性侵子、地上水迹等相关物证。考虑到死者有被性侵 犯的迹象，对尸体的左右乳房、口唇部斑迹进行犯的迹象，对尸体的左右乳房、口唇部斑迹进行 提取。提取。 物证检验结果：物证检验结果： 龙某阴道拭子和外阴拭子均检出精斑，均为龙某男友曾龙某阴道拭子和外阴拭子均检出精