北师大版现代生物技术单元测试2

1、现代生物技术学校:姓名： 班级： 考号： 一、综合题（每题 10分，共50分）1目前在国内外食品工业和其他诸多行业中，胡萝卜素一直处于供不应求的状态。请 根据所学知识，同答下列问题。（1）通过植物组织培养可以对胡萝卜进行快速繁殖，这项技术利用了原理，常用的_.壬由k产览曰E产览种培养基是培养基。（2）在胡萝卜素的提取过程中，首先要对新鲜的胡萝卜进行_，但要注意控制 和时间。根据胡萝卜素的特点，可以考虑使用 的方法提取。（3）将提取的胡萝卜素粗品通过 法进行鉴定，观察结果时会发现标准样品位于展开剂前沿，萃取样品往往比标准样品多出现一条层析带，其原因是。在“叶绿体中色素的提取和分离”的实验中也用到

2、了类似的方法，目的是_。【答案】植物细胞具有全能性MS干燥（粉碎和干燥）温度萃取纸层析胡萝卜素粗品中含有其他色素分离叶绿体中色素【解析】试题分析：本题以胡萝卜为载体，考查植物组织培养的原理和MS培养基，以及胡萝卜素的提取的有关知识，意在考查考生对知识的识记、理解和应用。（1）通过植物组织培养可以对胡萝卜进行快速繁殖，这项技术利用了植物细胞具有全 能性的原理。常用的一种培养基是（2）由于新鲜的胡萝卜含有大量的水分，所以在胡萝卜素的提取过程中，首先要对新 鲜的胡萝卜进行干燥（粉碎和干燥）处理，但要注意控制温度和时间，温度过高、时间 过长会导致胡萝卜素分解。胡萝卜素是橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不

3、溶于水，微 溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂，故根据胡萝卜素的特点，可以考虑使用萃取的方 法。（3）将提取的胡萝卜素粗品通过纸层析法进行鉴定，观察结果时会发现标准样品位于展开剂前沿，萃取样品往往比标准样品多出现一条层析带，其原因是胡萝卜素粗品中含有其他色素。在“叶绿体中色素的提取和分离”的实验中也用到了类似的方法，目的是分离叶绿体中色素。【点睛】植物有效成分的提取的三种方法比较提取 方法水蒸气蒸馏法压榨法有机溶剂 萃取法实验 原理利用水蒸气将挥发性 较强的植物芳香油携 带出来通过机械加压，压榨出 果皮中的芳香油使芳香油溶解在有机 溶剂中，蒸发溶剂获得 芳香油方法步骤水蒸气蒸馏石灰水浸泡、漂洗粉

4、碎、干燥分离油层压榨、过滤、静置萃取、过滤除水过滤再次过滤浓缩适用 范围适用于提取玫瑰油、薄 荷油等挥发性强的芳 香油适用于柑橘、柠檬等易 焦糊原料的提取适用范围广，要求原料 的颗粒要尽可能细小， 能充分浸泡在有机溶 剂中优点简单易行，便于分离生产成本低，易保持原料原有的结构和功能出油率高，易分离局限性水中蒸馏会导致原料 焦糊和有效成分水解 等问题分离较为困难，出油率 相对较低使用的有机溶剂处理 不当会影响芳香油的 质量2 .菊天牛是菊花的最主要的害虫，科研人员将抗虫基因转入菊花培育出抗虫菊 花，下图是获得转基因菊花的技术流程。请回答下列问题：粒的七壤农杆曲空冑休菊比_电浙些再生匹转基因筑 一

5、 叶片SisT* Slffi t tt 虫植株注:卡那酶素抗性基因（kanR）为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感（1）利用PCR技术扩增抗虫基因时，需用耐高温的 催化，PCR-般要经历三十次以上的循环，每次循环包括 三步。 常用C处理土壤农杆菌，其目的是 。重组Ti质粒整合到菊花叶肉细胞的上。（3）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及的固体培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。检验转基因菊花的抗虫性状，常用的方法是。（4）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫,实验组饲喂转基因植株，对照组应饲喂等量的正常植株。实验结果显示，实验组的害虫死

6、亡率明显高于对照组，说明 。【答案】热稳定DNA聚合酶（或Taq酶）变性、复性和延伸 提高受体细胞的转化率（或使之成为能吸收周围环境中 DNA分子的感受态细胞）染色体卡 那霉素在转基因菊花上投放菊天牛转基因菊花对菊天牛 2龄幼虫有较强的毒杀作用【解析】试题分析：分析题图：图示为获得转基因菊花的技术流程图，目的基因（抗虫 基因）和质粒构建基因表达，采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞，再采用植物 组织培养技术将受体细胞培养成转基因植株。（1） PCR技术中，因需要高温解旋，故需用耐高温的DNA聚合酶催化，每次循环包 括变性、复性和延伸三个步骤。（2） 将目的基因导入植物细胞时，常采用感受态细胞

7、法，即用Ca2+（或CaCS）处理农杆菌细胞，使其处于易于吸收周围环境中的感受态。农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。（3）由图可知，标记基因是卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培养基来筛选转基因菊花。检验转基因菊花的抗虫性状，常用方法是投放菊天牛，若菊天牛大量死亡，说明转基因成功。2龄幼虫有较强（4）实验组的害虫死亡率明显高于对照组，说明转基因菊花对菊天牛的毒杀作用。3.下图表示花药培养及单倍体育种的大致过程，据图回答下列问题:(1) 过程是把幼小的花药分离出来，在无菌条件下放在 MSW养基上进行培养，配制该培养基时，需要的物质应该有

8、。(至少答三种)(2) 过程是花药在MS培养基所提供的特定条件下脱分化，发生多次细胞分裂，形成，此过程进行细胞分裂的方式是 。(3) 过程是诱导再分化出芽和根，最后长成植株，长成的植株(不考虑核与核之间融合)是植株，其特点是植株弱小，咼度不育，生产上无推广应用的价值。若要使其结子结果，可在移栽后在幼苗茎尖滴加适宜浓度的B物质，通常用到的B物质是。【答案】水、大量元素、微量元素、蔗糖、琼脂、植物激素、有机物 愈伤组织或胚状体有丝分裂单倍体秋水仙素【解析】试题分析：本题以图文结合的形式考查学生对植物组织培养和单倍体育种过程 的识记和理解能力。解答此题的关键是熟记并理解相关的基础知识、形成清晰的知识

9、网络。在此基础上从题图中提取信息并结合题意作答。(1) MS培养基的主要成分包括：大量元素、微量元素、有机物(如甘氨酸、烟酸、肌 醇、维生素、琼脂、蔗糖等)，在配制好的MS培养基中，常常需要添加植物激素。(2) 过程是花药经脱分化形成愈伤组织或胚状体，此过程进行细胞分裂的方式是有丝分裂。(3)过程是诱导再分化出芽和根，最后长成植株，由于该植株是花药经离体 培养获得的，所以长成的植株是单倍体，高度不育。若要使其结子结果，通常用适宜浓度的秋水仙素处理单倍体幼苗，使其染色体数目加倍。【点睛】解答此题需抓住问题的实质：花药培养的原理是细胞的全能性，所用的技术手 段是植物组织培养技术，花药中含有的花粉粒

10、是雄配子。在此基础上，围绕所学知识展 开联想，从题意和图示中提取有效信息，进行“图t文”的转化，进而作答。4 (生物一选修3 现代生物科技专题)下图为科学家培育能生产人血清白蛋白乳腺生物反应器的过程，据图回答下列 问题：(1) 利用PCRi术扩增目的基因，前提是，以便据此合成一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的 DNA分子有个。(2) 得到的转基因母牛通过有性生殖产生的雌性后代不一定能产生人血清白蛋白，为了保证其遗传性状不变，科学家可通过 技术保证其优良性状，该技术的成功证明了 。该技术的最后一个环节是 ，其优势是。若想提高同卵双胎或多胎的概率，可利用 技术。【答案】要有一段已知目的基因

11、的核苷酸序列引物6个 核移植 已经分化的动物体细胞的细胞核具有全能性胚胎移植充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力胚胎分割【解析】试题分析：PCR扩增技术与自然条件下的 DNA复制相比，不同之处在于，需 要引物，需要耐高温的热稳定性DNA聚合酶。（1）PCR技术是在体外对 DNA进行复制，因此利用 PCR技术扩增目的基因，前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便据此合成与目的基因结合的引物。一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有23-2=6个。（2） 通过有性生殖产生的雌性后代会出现性状分离，后代不一定能产生人血清白蛋白， 通过细胞核移植技术，后代具有控制该人血清白蛋白，后代能保持

12、该优良性状。同时也证明了已经分化的动物体细胞的细胞核具有全能性。该技术的最后一个环节是胚胎移植，胚胎移植的优势是充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。要想提高同卵双胎或多胎的概率，可利用胚胎分割技术。5 人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值。科研人员通过生物工程技术获得转HSA基因母牛，以便通过乳腺生物反应器生产HSA,其主要技术流程如下图所示：HSA星因 &I皓养牛拾儿成纤维细胞重組隔毡化人 SRY-PCR法十生别鉴定* J 帛盟一代孕转基因去核卵毋细胞胞胚胎甘牛母牛回答下列问题：（1）如上图所示，将牛胎儿成纤维细胞核移入去核卵母细胞中，该技术称为技术；供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代

13、以内的细胞，其原因是。 胚胎移植时，为使代孕母牛能处于适合的生理状态，需要用激素对 其进行 处理。（3）SRY-PCR法性别鉴定的基本程序是：提取牛胎儿成纤维细胞的DNA经PCR反应体系进行扩增，然后对扩增产物进行检测是否含SRY基因（Y染色体上特有的性别决定基因）片段。 PCR反应体系中包括引物，弓I物应选用下图中的 （填图中标号）。11IVLLLt1111E| 計基因|注；H 11 1U 引翎，箭头是延個方冋 若扩增产物含大量 SRY基因片段，则该种牛胎儿成纤维细胞 （填“能”或“不能”）用作技术流程中转化过程的受体细胞。（4）与动物细胞相比，植物组织细胞具有更高的 ;因此，可以利用 技术

14、，在和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养成完整植株。【答案】细胞核移植（体细胞核移植）能保持正常的二倍体核型（能保持遗传物质不变）同期发情I和W 不能全能性植物组织培养 无菌【解析】【试题分析】要解答本题，需要认真阅读题干和题图， 获取有用信息，再结合题意梳理课本相关知识。1第一个题图涉及基因工程、动物细胞工程和胚胎工程的综合知识，需要根据题意，灵活运用所学知识。动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。2. )

15、SRY-PCR法性别鉴定是目前最有应用前景的方法，其基本程序是：提取牛胎儿成纤 维细胞的DNA，经PCR反应体系进行扩增，然后用SRY特异性探针对扩增产物进行检 测是否含SRY基因(Y染色体上特有的性别决定基因)片段。出现阳性反应者，胚胎 为雄性；出现阴性反应者，胚胎为雌性。据此答题。(1) 如上图所示，将牛胎儿成纤维细胞核移入去核卵母细胞中的技术称为细胞核移植(体细胞核移植)；传代10代以内的细胞，能保持正常的二倍体核型(能保持遗传物质不变)， 所以供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代 10代以内的细胞。(2) 胚胎移植时，为使代孕母牛能处于适合的生理状态，需要用激素对其进行同期发 情处理，以

16、为供体的胚胎移入受体提供相同的生理环境。(3) 根据图中引物与 DNA单链结合的位置和子链延伸的方向可推知，要经过PCR反 应体系扩增SRY基因，应选用下图中的I和W引物。本题要通过生物工程技术获得转HSA基因母牛，若扩增产物含大量SRY基因片段，说明该成纤维细胞来自公牛，则该种牛胎儿成纤维细胞不能用作技术流程中转化过程的受体细胞。(4) 与动物细胞相比，植物组织细胞具有更高的全能性；因此，可以利用植物组织培 养技术，在无菌和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养成完整植株。6 四膜虫是单细胞真核生物，营养成分不足时，进行接合生殖，过程如图1所示。科研人员用高浓度的 DDT处理不耐药

17、的野生型四膜虫，经筛选获得了纯合的耐药四膜虫。 为研究四膜虫耐药的机理，进行了相关实验。(1) 高浓度DDT处理四膜虫可获得耐药个体，原因是DDT对四膜虫具有 作用，使耐药的个体被保留。(2) 为研究耐药性的遗传，科研人员将四膜虫分为 80组进行实验，每一组两只四膜虫，一只是纯合的耐药四膜虫， 另一只是野生型四膜虫。 每一组的一对四膜虫接合生殖后得 到的四膜虫均耐药。若每一组接合后的四膜虫再次相互接合，在80组实验结果中，出现耐药四膜虫的组数约为 组，则表明耐药性受一对等位基因控制，并且耐药为性；若80组实验结果中，出现耐药四膜虫的组数约为 组，则表明耐药性受两对等位基因控制，并且这两对基因独

18、立分配。(3) 为研究基因A与四膜虫的耐药性是否有关，科研人员提取耐药个体的DNA用图2 所示的引物组合，分别扩增 A基因的A片段、A3片段。minrvIIIRIf HE.VL Ajmj治片段HIMJN基囚（巴龙榕索抗性皐因）AM因注:引物u、m上的般岁片Bt分别与n羞囲两躺鱼补配对圏2 据图分析，用引物I、H组合扩增后，得到的绝大部分 DNA片段是下图中的.Viiniilllllllllll傀1吕tlllllllllllllinIM 1111111)1111111111 将大量N基因片段与扩增得到的 A片段、A3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是 。 回收的PCR扩增

19、产物通过基因工程方法转入耐药四膜虫细胞中，并用加入的培养液筛选，获得A基因的四膜虫，这种四膜虫在高浓度 DDT处理下生长速率明显下降，表明A基因是耐药基因。（4）从进化角度分析，营养成分不足时，四膜虫进行接合生殖的优势是 。【答案】选择 60显 45 d A1-N-A3巴龙霉素 被敲除 通过基因重组,增加遗传多样性，有利于适应环境【解析】试题分析：据图分析，两个单核的四膜虫结合成一体，进行一次减数分裂形成两个一体的四核细胞，随后每个细胞中有三个核消失，经过一次有丝分裂形成两个一体的双核细胞，随后两个细胞交换一个核，每个细胞中的两个核融合成一个核，最后结合在一起的两个细胞分离。（1）高浓度DDT

20、对四膜虫的耐药性个体进行了选择，不耐药的个体被淘汰，生存下来 的是耐药性的个体。（2）每一组两只四膜虫，一只是纯合的耐药四膜虫，另一只是野生型四膜虫。每一组的一对四膜虫接合生殖后得到的四膜虫均耐药，说明耐药性是显性性状，结合后的四膜虫为杂合子；若每一组接合后的四膜虫再次相互接合，相当于杂合子自交，后代会出现 3:1性状分离比，所以 80组实验结果中，出现耐药四膜虫的组数约为60组。若耐药性受两对等位基因控制，则耐药性后代占9/16，即80组实验结果中，出现耐药四膜虫的组数约为45组。（3） 根据题图分析，用引物i、n组合扩增扩增的是A1片段，以引物n所在的单链为模板在引物I的作用下合成DNA时

21、，引物n上的X片段也被作为模板合成子链，因此得到的绝大部分 DNA片段是图3中的d。 由于引物n、川上的 x、y片段都能与N基因两条链上的碱基进行互补配对，因此将大量N基因片段与扩增得到的 A片段、A片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是 A-N-A3，A2基因被敲除。 回收的PCR扩增产物通过基因工程方法转入耐药四膜虫细胞中，并用加入巴龙霉素的培养液筛选，获得 A基因被敲除的四膜虫，这种四膜虫在高浓度 DDT处理下生长速率明 显下降，表明A基因是耐药基因。（4）四膜虫进行接合生殖的优势是通过基因重组，增加遗传多样性，有利于适应环境。【点睛】解答本题的关键是分析图形，了解耐

22、药四膜虫的形成过程，知道四膜虫的结合 生殖存在减数分裂和细胞核的两两结合，属于有性生殖过程。7. 2015年，屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法获奖。工业上青蒿素一般从青蒿植 株中提取，产量低，价格高。基因工程及细胞工程等为培育出高青蒿素含量的青蒿提供 了思路。科学家先通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产植株。通过基因测序发现该高产植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。（1）提取了高产植株的全部 DNA后,要想快速大量获得该突变基因可以采用PCR技术，该技术的原理是。扩增时先要升温使DNA解旋变性，故要用到酶。（2）如果用青蒿某个时期 mRN仮转录产生双链 cDNA片段

23、，再用该双链 cDNA进行PCR扩增，进行了 30个循环后，理论上可以产生约 个DNA分子，该双链与载体 连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的获得的cDNA与青嵩细胞中该基因碱基序列 （填“相同”或“不同”）Hriftt H （ I目的竝因I试卷第12页，总10页1、2中箭头表示（3）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表迖载体，图相关限制酶的酶切位点。请回答:用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma I切割，原因是 ，构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动 子是的识别和结合位点。（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取 技术。【答案】

24、DNA复制（DNA或双链复制）？（或热稳定聚合）230青蒿的cDNA文库（或部分基 因文库）不同 ？?会破坏质粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因RNA聚合酶抗原-抗体杂交【解析】试题分析： PCR技术扩增目的基因：原理是 DNA双链复制；过程：第一步：加 热至9095 C DNA解链；第二步：冷却到5560 C,引物结合到互补 DNA链；第三步： 加热至7075C,热稳定 DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。目的基因的检测与鉴 定：（1）分子水平上的检测：检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因-DNA分子杂交技术；检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；检测目的基因是否翻译成蛋

25、白质-抗原-抗体杂交技术。（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴 定、活性鉴定等。（1） PCR技术扩增目的基因的原理为DNA双链复制。扩增时先要升温使 DNA解旋变性， 故要用到耐高温 DNA聚合酶（Taq酶）。（2） 由于PCR技术利用的是 DNA双链复制的原理，因此用该双链cDNA进行PCRT增，进行了 30个循环后，理论上可以产生约为 230个DNA分子；又由于该基因库是由青蒿某 个时期mRNA反转录产生的双链 cDNA片段，只包含某种生物的部分基因，因此该双链与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做青蒿的cDNA文库（或部分基因文库）；通过逆转录得到的目的基因中缺少基因

26、结构中的非编码区以及编码区的内含子，因此获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列不同。（3） 分析图2可知，目的基因和抗生素抗性基因中都含有Smal限制酶的切割位点，用Smal切割会破坏质粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因，因此不能用Smal切割图中的质粒和外源 DNA构建好的重组质粒在其目的基因前要加上特殊的启动子，启动 子是RNA聚合酶识别结合位点。（4）检测目的基因是否表达出相应蛋白质，应采取抗原抗体杂交技术技术。8.【生物选修3:现代生物科技专题】利用生物工程技术，可从转基因奶山羊乳汁中分离获得凝血因子IV，用于血友 病的治疗。请回答下列冋题：(1) 根据凝血因子IV基因的碱基序列，

27、可用 技术获取并扩增基因。构建 该基因表达载体时，所用到的工具酶是 ，该基因表达载体中，除凝血因子IV和标记基因外，还应该包括。(2) 将目的基因表达载体导入奶山羊受精卵的常用方法是 。受体细胞选用受精卵的优点是细胞大易操作、营养物质含量高和 。(3) 在体外胚胎培养时，应选用囊胚的 进行DNA分析，用于选择雌性胚 胎。(4) 人凝血因子IV是一种胞外酶，该蛋白的加工是在 等细胞器上进行的。人凝血因子IV只在乳腺细胞合成的原因是 。【答案】PCR限制性核酸内切酶和DNA连接酶启动子和终止子纤维注射法 细胞全能性高滋养层细胞内质网、高尔基体基因的选择性表达【解析】试题分析：启动子是一段有特殊结构

28、的DNA片段，位于基因的首端，是 RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRN A最终获得所需的蛋白质；终止子也是一段有特殊结构的 DNA片段，位于基因的尾端；分泌蛋白的合成、加工和运输过程： 最初是在内质网上的核糖体中由氨基酸形成肽链，肽链进入内质网进行加工，形成有一定空间结构的蛋白质由囊泡包裹着到达高尔基体，高尔基体对其进行进一步加工，然后形成囊泡分泌到细胞外。(1) 可以根据基因编码序列两端的部分碱基序列设计引物，用PCR技术进行体外大量扩增获得目的基因。构建该基因表达载体时，需要限制酶内切酶切割目的基因和运载体， 再用DNA连接酶链接，形成表达载体；启动子是一段有特殊结构的DN

29、A片段，位于基因的首端，是 RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA最终获得所需的蛋白质终止子也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。(2) 受体细胞是动物细胞，常用显微注射法将目的基因导入受体细胞中，由于受精卵细胞大易操作、营养物质含量高、细胞全能性高，因此常被作为受体细胞选用。(3) 在做胚胎性别鉴定时，需要取囊胚的滋养层细胞做DNA分析，进行性别鉴定。(4) 分泌蛋白在内质网上的核糖体上合成，进入内质网进行加工、分类、包装，形成囊泡进入高尔基体，由高尔基体进行进一步加工，形成囊泡，运向细胞膜，由细胞膜分 泌到细胞外，由于基因的选择性表达，所以人凝血因子IV只在乳腺细

30、胞合成。【点睛】本题主要考查了 PCR技术、目的基因导入受体细胞的方法、胚胎培养、分泌蛋 白的合成分泌等相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联 系，形成知识的网络结构的能力。9 利用基因工程技术培育转基因抗冻番茄，该过程需要用多种限制酶，如图依 次表示EcoR I、Sma I、Nae I三种限制酶的识别序列及切割位点，GAATTCCC匚 GGG GCCGGC-CTTAAG GGGCCC-CGGCCG请回答：(1) 上述限制酶在特定位点切割DNA其实质是断开DNA分子每条链中特定部位的两个核苷酸之间的，切割后产生了末端。(2)利用EcoR I禾口 Nae I酶切得某种鱼的

31、抗冻蛋白基因，可与被 EcoR I和 Sam I 酶切后的质料连接成重组质料，原因是(3) 重组质粒导入番茄后，欲检测抗冻蛋白基因是否转录出mRN，需利用作探针。(4) 利用抗冻蛋白制备出相应的 ，然后进行抗原-抗体杂交，观察到 杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功。因此，还应将转基因番茄，以确定其耐寒能力是否提高。(5) 应用PCF扩增目的基因时，需要在基因组数据库中查询目的基因的 序列，以便合成引物。PCR过程第一轮循环的模板是【答案】磷酸二酯键 黏性末端和平末端相同的黏性末端之间可连接，且不同的平末端之间也可以连接标记的含有目的基因的 DNA片段(或“标记的抗冻蛋白基因”或

32、“标记的含有目的基因的DNA单链”) 抗体 置于寒冷环境培养(或进行个体水平检测或进行抗冻实验)核苷酸(或脱氧核苷酸或碱基)目的基因的两条脱氧核苷酸链(或目的基因)【解析】试题分析：由图可知，EcoR I酶能切出粘性末端， Sma I和Nae I酶都能切出平末端，相同的黏性末端之间才可能连接，但不同的平末端之间也可能可以连接，因此 要获得抗冻蛋白基因，可以用EcoR I和Sma I切割或EcoR I和Nae I。(1) 限制酶能够识别双链 DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定 部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，产生黏性末端和平末端。(2) EcoR I酶切出粘性末端， S

33、ma I 和 Nae I酶切出平末端，利用 EcoR I和NAE酶切得某种鱼的抗冻蛋白基因，可与被EcoR I和Sam I酶切后的质粒连接成重组质粒，原因是相同的黏性末端之间可连接，且不同的平末端之间也可以连接。(3) 欲检测目的基因是否转录出mRNA，需利用标记的含有目的基因的DNA片段作探针，进行核酸分子杂交，若出现杂交带，说明目的基因是否转录出了mRNA。(4) 利用抗冻蛋白制备出相应的抗体，然后进行抗原-抗体杂交，观察到杂交带出现，尚不足以确定转基因抗冻番茄培育是否成功。因此还应进行个体生物学水平的鉴定，将转基因番茄置于寒冷环境培养，以确定其耐寒能力是否提高。(5) 应用PCR扩增目的基因时，需要在基因组数据库中查询目的基因的核苷酸(或脱 氧核苷酸或碱基) 序列，以便合成引物.PCR过程第一轮循环的模板是目的基因的两条 脱氧核苷酸链(或目的基因)。10 . (1)乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注。利用玉米秸杆生产燃料酒精的大致流