3P5制剂的质量控制(一)

1、目录3.2. P.5制剂的质量控制 33.2. P.5.1质量标准33.2. P.5.2分析方法43.2. P.5.2.1 性状43.2. P.5.2.2 鉴另U 43.2. P.5.2.3 检查43.2. P.5.2.4 含量测定103.2. P.5.3分析方法的验证113.2. P.5.3.1分析方法学验证用样品 113.2. P.5.3.2有关物质方法学验证 113.2. P.5.3.3吡啶-3-磺酸方法学验证 213.2. P.5.3.4含量测定方法学验证 283.2. P.5.3.5溶出度测定方法学验证 333.2. P.5.3.6微生物限度检查方法学验证 463.2. P.5.4批

2、检验报告463.2. P.5.5 杂质463.2. P.5.5.1杂质情况分析463.2. P.5.5.2杂质制定依据473.2 .P .5.6质量标准制定依据 483.2. P.5.6.1 质量标准483.2. P.5.6.2质量标准制定依据及产品检测结果 523.2. P.5制剂的质量控制3.2. P.5.1质量标准检验项目方法放行标准限度货架期标准限度性状感观本品为溥膜衣片，除去包衣 后显白色或类白色本品为溥膜衣片，除去包衣 后显白色或类白色鉴别HPLC法（中国药典 2010 年版二部附录V D）供试品溶液中沃诺拉赞峰 保留时间应与对照品溶液 中沃诺拉赞峰保留时间一 致供试品溶液中沃诺拉

3、赞峰 保留时间应与对照品溶液 中沃诺拉赞峰保留时间一 致有关物质HPLC法（中国药典 2010 年版二部附录V D）杂质I :不得过0.4%、 杂质n :不得过0.4%、 杂质川：不得过0.4%、 杂质IV :不得过0.4%、 杂质V :不得过0.4%、 杂质W :不得过0.4%、 其他单杂：不得过 0.4%、 其他总杂：不得过1.5%杂质I :不得过0.5%、 杂质n :不得过0.5%、 杂质川：不得过0.5%、 杂质V :不得过0.5%、 杂质V :不得过0.5%、 杂质W :不得过0.5%、 其他单杂：不得过 0.5%、 其他总杂：不得过 2.0%吡啶-3-磺酸HPLC法（中国药典 20

4、10 年版二部附录V D）不得过0.4%不得过0.5%含量均匀度含量均匀度检查法（中国药 典2010年版二部附录X E）应符合规定应符合规定溶出度溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录X C第 二法）为0%初5%微生物限度微生物限度检查法（中国药 典2010年版二部附录幻 J）细菌数不得过1000cfu/g ; 霉菌和酵母菌数不得过 100cfu/g ;大肠埃希菌不得 检出/g细菌数不得过 1000cfu/g ; 霉菌和酵母菌数不得过 100cfu/g ;大肠埃希菌不得 检出/g含量HPLC法（中国药典 2010 年版二部附录V D）含(C17H16FN3SO2)应为标示量的 93.0%1

5、07.0%含(C17H16FN3SO2)应为标示量的 90.0%110.0%3.2.P.5.2分析方法3.2. P.5.2.1 性状检查方法：感观具体试验操作：取本品，观察其外观性状。限度：本品应为薄膜衣片，除去包衣后显白色或类白色。3.2. P.5.2.2 鉴别检查方法：高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）仪器与用具：高效液相色谱仪、十八烷基键合硅胶柱（5卩m 250m/ 4.6mm）、电子 分析天平、容量瓶、移液管、烧杯，PH计。试药与试剂：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。色谱条件：流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（三乙胺调 pH值至7.2）-甲醇（52:48）流速：

6、1.0ml/min溶剂：流动相检测器：紫外检测器波长：230nm色谱柱：十八烷基键合硅胶柱（5卩m 250mrX 4.6mm）具体试验操作：在含量测定项下记录的色谱图中，比较供试品溶液中沃诺拉赞峰与 对照品溶液中沃诺拉赞峰的保留时间。限度：供试品溶液中沃诺拉赞峰与对照品溶液中沃诺拉赞峰保留时间应一致。3.2. P.5.2.3 检查3.2. P.5.2.3.1 有关物质检查方法：高效液相色谱法（中国药典 2010年版二部附录V D）仪器与用具：高效液相色谱仪、十八烷基键合硅胶柱（5卩m 250m/ 4.6mm）、电子 分析天平、容量瓶、移液管、烧杯，PH计。试液与试药：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、

7、水。试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5卩m 250m/ 4.6mm）;紫外检测器（检测波长为230nm）;流动相：0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲液（用三乙胺调节 pH值至7.2 ）-甲醇（52： 48）为流动相A，甲醇为流动相B，按下表梯度进行洗脱；溶剂：流动相A ；流速：1.0ml/min。梯度如下表：时间（分钟）流动相A （ %）流动相B （ %）01000231000452080501000601000具体试验操作：取本品细粉适量（约相当于沃诺拉赞25mg）,精密称定，置50ml量瓶中，加流动相A适量，振摇，使充分溶解，加流动相 A稀释至刻度，摇匀，滤过， 取续滤液作为供试品溶液；精密

8、量取适量，加流动相A定量稀释制成每1ml中约含沃诺 拉赞2.5 的溶液，作为对照溶液。分别取杂质I、U、M、W、V、切工作对照品各 适量，精密称定，加流动相 A溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5 g的溶液， 作为杂质对照品溶液。取富马酸沃诺拉赞工作对照品及杂质工作对照品各适量，加流动 相A溶解并稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞0.5mg及各杂质均为2.5测的混合溶液，作 为系统适用性溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）试验，用十八烷基键合硅胶为填充剂，以 0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲液（用三乙胺调节 pH值 至7.2）-甲醇（52： 48）为流动相A，甲醇

9、为流动相B,按上表梯度进行洗脱，检测波 长为230nm。取系统适用性溶液201注入液相色谱仪，记录色谱图，杂质川、I、沃 诺拉赞、U、W、V、W依次出峰，理论板数按沃诺拉赞峰计算应不低于5000,且沃诺拉赞峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。精密量取供试品溶液、对照溶液与杂质对照 品溶液各20卩，分别注入液相色谱仪，记录色谱图计算公式：已知杂质I、U、M、已知杂质Ax汉Wx汽Px汉V汉平均片重% x x x 100 %As汉W汉Vx汉标示量（Ax为供试品溶液中已知杂质的峰面积， As为对照品溶液中已知杂质的峰面积，Wx为已知杂质工作对照品的称样量，Px为已知杂质工作对照品含量， V为已知杂质对照

10、品溶液的稀释体积，V为供试品溶液的稀释体积， W为供试品的称样量）其他单藐二厶 0.5%At（Ai为供试品溶液中其他单个未知杂质的峰面积，At为对照溶液主峰面积）其他总杂八总- A丁 0.5%（A总为供试品溶液中所有峰的峰面积和,A主为供试品溶液中沃诺拉赞的峰面积,a Ax为供试品溶液中已知杂质的峰面积之和,At为对照溶液中沃诺拉赞的峰面积）限度：供试品溶液色谱图中如显杂质峰（溶剂峰及富马酸峰除外），杂质I、U、按外标法以峰面积计算，不得大于标示量的0.5%;其他单个未知杂质峰面积不得大于对照溶液的主峰面积（0.5%）;其他杂质峰面积的和不得大于对照溶液 的主峰面积的4倍（2.0%）。3.2.

11、 P.5.2.3.2 吡啶-3-磺酸检查方法：高效液相色谱法（中国药典 2010年版二部附录V D）仪器与用具：高效液相色谱仪、十八烷基键合硅胶柱（5卩m 250mr 4.6mm）、电子 分析天平、容量瓶、移液管、烧杯，PH计。试液与试药：磷酸二氢钾、磷酸、甲醇、水。试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5卩m 250mrH 4.6mm）;紫外检测器（检测波长为261 nm）;流动相：0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.0）为流动 相A，甲醇为流动相B，按下表梯度进行洗脱；溶剂：流动相A;流速：1.0ml/min。梯度如下表:时间（分钟）流动相A （ %）流动相B （%）0100

12、0710007.11090910909.11000201000具体试验操作：取本品细粉适量（约相当于沃诺拉赞25mg），精密称定，置50ml量瓶中，加流动相A适量，振摇，使充分溶解，加流动相 A稀释至刻度，摇匀，滤过， 取续滤液作为供试品溶液。另取杂质工作对照品适量，精密称定，加流动相A溶解并 稀释制成每1ml中约含吡啶-3-磺酸2.5 的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）试验，用十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.05mol/L 的磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节 pH值至3.0）为流动相A，甲醇为流动相B,按上表梯 度进行洗脱，检测波长为261 nm。取对照

13、品溶液、供试品溶液各 20注入液相色谱仪， 记录色谱图，计算公式：“亠”寸厶A 汇W P 小心平均片重吡啶 -3 -磺酸 = W匕 V 均 100 %As汉W汉Vx汉标示量（Ax为供试品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面积，As为对照品溶液中吡啶-3-磺酸的峰面积, Wx为杂质工作对照品的称样量，Px为杂质工作对照品含量，Vx为吡啶-3-磺酸对照 品溶液的稀释体积，V为供试品溶液的稀释体积， W为供试品的称样量）限度：供试品溶液色谱图中如显与对照品溶液相对应的杂质峰，按外标法以峰面积 计算不得大于标示量的0.5%。3.2. P.5.2.3.3 溶出度检查方法：溶出度测定法（中国药典 2010年版二部附

14、录X C第二法）高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）仪器与用具：溶出仪、温度计、高效液相色谱仪、电子分析天平、十八烷基键合硅胶柱（5 m 250mrH 4.6mm）、容量瓶、移液管、烧杯， PH计。试液与试药：盐酸、磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5 m 250mrH4.6mm）;紫外检测器（检测波长为230nm）; 流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（三乙胺调pH值至7.2）-甲醇（52:48）;溶剂：pH1.0盐酸溶液；流速：1.0ml/min。具体试验操作：取本品，照溶出度测定法（中国药典 2010年版二部附录X C第二 法），以pH1.

15、0盐酸溶液900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分 钟时，取溶液适量滤过，精密量取续滤液适量，用溶出介质定量稀释成每 1ml中约含沃诺拉赞11的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸沃诺拉赞工作对照品适量，用溶出 介质溶解并定量稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞11旧的溶液，作为对照品溶液，精密 量取供试品溶液与对照品溶液各 20卩，照含量测定项下的色谱条件测定， 计算每片的溶出量计算公式：溶出量共M对丁对.7485血100%A寸汇V对汉X（A供为供试品溶液的主峰面积；A对为对照品溶液主峰面积；M对为对照品的称样 量，mg； T对为对照品的含量；V对为对照品溶液的稀释体积；V供为供试

16、品溶液的稀释 体积；X为标示量，10mg或20mg）限度：不得低于标示量的85%。3.2. P.5.2.3.4含量均匀度检查方法：含量均匀度检查法（中国药典 2010年版二部附录X E） 高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）仪器与用具：高效液相色谱仪、电子分析天平、十八烷基键合硅胶柱（5卩m250mm 4.6mm）、容量瓶、移液管、烧杯， PH计。试液与试药：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。试验条件：十八烷基键合硅胶柱（5卩m 250m 4.6mm）； 紫外检测器（检测波长为230nm）;流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（三乙胺调pH值至7.2）-甲醇（52:48）；溶剂

17、：流动相；流速：1.0ml/min。具体试验操作:供试品溶液：取本品1片，置100ml量瓶（10mg规格）或200ml量瓶（20mg规格）中, 加流动相适量，振摇，使充分溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤 液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。对照品溶液：取富马酸沃诺拉赞工作对照品适量（约相当于沃诺拉赞 10mg），精密 称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 5ml，置50ml量瓶 中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取供试品溶液和对照品溶液各 20卩，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按10片中沃诺拉赞的含量外标法以峰面

18、积分别计算每片中沃诺拉赞的含量。依法测定计算公式：含量（%）=W对 P寸0.7485 A样V样A对V对标示量100%（W对分别为对照品的称样量，mg； P对为对照品的含量；A样、A对分别为供试品、 对照品溶液中沃诺拉赞的峰面积；V样、V对分别为供试品溶液、对照品溶液的稀释体积）分别测定每片以标示量为100的相对含量X，求其均值X和标准差S以及标示量与均值之差的绝对值A :如A 1.80115.0，则供试品的含量均匀度符合规定；若A S 15.0，则不符合规定；若A 1.80S 15.0，且A 115.0，则应另取20支复试，根据初、复试结果，计算30支的均值X、标准差S和标示量与均值之差的绝对

19、值 A :如A 1.45115.0，则供试品的含量均匀度符合规定；若 A 1.45S 15.0，贝U不符合规定其中: X -Xn -1，A=100-X限度：应符合规定。3.2. P.5.2.3.5微生物限度1. 试液及培养基：营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、MUG培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%氯化钠溶液。2. 仪器与用具：智能生化培养箱、霉菌培养箱、电动吸引器、薄膜过滤器等。3. 具体试验操作：用平皿法，依法检查（中国药典2010年版二部附录幻J）o（1）细菌、霉菌及酵母菌：供试品配制：按中国药典（2010年版二部）微生物限度检查法（附录X

20、I J）的规定, 称取供试品10g，加pH 7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，静置10min， 取上部澄清液体作为1： 10供试液，备用。直接接种法：取1:10供试品每皿1.0ml，分别加入1ml约含50100cfu/m15株试验 菌。立即倾注琼脂培养基1520ml，每株菌平行制备2个平皿，待凝固后置规定温度 培养35天观察结果，测定其菌数。菌液组测定试验所加入试验菌的菌数。供试品对照组：取1:10供试液1ml，按试验组供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。（2）控制菌的检查法大肠埃希菌：试验组取1： 10供试液10ml，分别加入100ml、200ml的胆盐乳糖培 养基中，

21、加入10100cfu/ml试验菌，35-37E培养18-24h;取培养液0.2ml，接种至 5mlMUG培养管内，培养5h与24h时，置紫外灯366nm处观察，然后沿培养基管壁加 入数滴靛基质试液。阴性菌对照组：取1: 10供试液10ml，分别加入100ml、200ml的胆盐乳糖培养基 中，加入10100cfu/ml的金黄色葡萄球菌，同试验组方法进行试验。于5、24h在366nm紫外光下观察，同时用未接种的 MUG培养基作本底对照。在 紫外光下若管内培养物呈现蓝白色荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。观察后，沿培养管的管壁加人数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈 试剂本色

22、，为靛基质阴性。本底对照的 MUG和靛基质试验应为阴性。如 MUG阳性、 靛基质阳性，判检出大肠埃希菌；如 MUG阴性、靛基质阴性，判未检出大肠埃希菌。限度：细菌数不得过1000cfu/g ;霉菌和酵母菌数不得过100cfu/g;大肠埃希菌不 得检出/g3.2. P.5.2.4含量测定检查方法：高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录V D）仪器与用具：高效液相色谱仪、电子分析天平、十八烷基键合硅胶柱（5卩m250mm 4.6mm）、容量瓶、移液管、烧杯、 PH计。试药与试剂：磷酸二氢钾、三乙胺、甲醇、水。色谱条件：流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（三乙胺调 pH值至7.2）-甲醇

23、（52:48）流速：1.0ml/min检测器：紫外检测器波长：230nm 溶剂：流动相色谱柱：十八烷基键合硅胶柱（5卩m 250m 4.6mm）具体试验操作：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于沃诺拉 赞10mg），置100ml量瓶中，加流动相适量，振摇，使充分溶解，用流动相稀释至刻 度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀， 作为供试品溶液。精密量取20H注入液相色谱仪，记录色谱图；另取富马酸沃诺拉赞 工作对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。计算公式：含量（）=A样 M对 T对 0.7485 V样 M100%（A样为供试

24、品溶液中主峰的面积；A对为对照品溶液中主峰的面积；M对为对照品 的称样量，mg； M样为供试品的称样量，mg； T对为对照品的含量；V对为对照品溶液的 稀释体积；V样为供试品溶液的稀释体积；M为平均片重，mg； X为标示量，10或20mg） 限度：应为标示量的90%110%。3.2. P.5.3分析方法的验证按照化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则、化学药物质量标准建立 的规范化过程技术指导原则、化学药物杂质研究技术指导原则等以及中国药典 2010年版二部附录中有关的指导原则提供以下方法学验证资料。3.2. P.5.3.1分析方法学验证用样品批号规格批量（片）试制日期试制地点XA00910

25、mg1552015.1.30山东富创医药科技有限公司XS15030110mg36402015.3.72015030110mg364802015.3.14 2015.3.152015030210mg361602015.3.16 2015.3.172015030310mg368402015.3.17 2015.3.18XB00120mg1452015.2.28XS15030220mg18002015.3.8 2015.3.92015030420mg184602015.3.18 2015.3.192015030520mg185202015.3.19 2015.3.202015030620mg1856

26、02015.3.20 2015.3.213.2. P.5.3.2有关物质方法学验证3.2. P.5.3.2.1有关物质检查方法学验证总结试验项目验证结果条件选择C18柱，以0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲液 （用三乙胺调节 pH值至7.2）-甲醇（52:48） 为流动相A，甲醇为流动相 B，进行梯度洗脱；紫外检测器，检测波长为230nm。系统适用性主峰及各已知杂质与相邻杂质分离良好，理论板数符合要求。专属性酸、碱、高温、氧化、光照降解杂质均与主峰分离良好，各已知杂质与相邻峰分离良 好，主峰及各已知杂质峰纯度均合格；辅料及其降解产物和梯度峰不干扰本品有关物 质的测定。检测限沃诺拉赞检测限为 0

27、.18ng ;杂质I的检测限为 0.18ng ;杂质n的检测限为 0.18ng ； 杂质川的检测限为 0.17ng ;杂质W的检测限为 0.18ng ;杂质V的检测限为 0.17ng ； 杂质W的检测限为 60ng。定量限沃诺拉赞定量限为0.60ng ;杂质I的定量限为0.59ng ;杂质n的定量限为 0.59ng ；杂质川的定量限为 0.57ng ;杂质W的定量限为0.61 ng ;杂质V的定量限为 0.55ng ;杂质W的定量限为 2.00 ng。线性富马酸沃诺拉赞在 0.0992.962用/ml线性良好，相关系数R2=0.9999杂质I在0.0992.962 冯/ml线性良好，相关系数R

28、2=0.9995杂质H在0.0982.943 冯/ml线性良好，相关系数R2=0.9999杂质川在0.0942.831 冯/ml线性良好，相关系数R2=0.9999杂质在0.1023.061 冯/ml线性良好，相关系数R2=0.9999杂质V在0.0922.752 冯/ml线性良好，相关系数R2=0.9994杂质W在0.13.0（g/ml线性良好，相关系数R2=0.9997准确度杂质I回收率在 98.16%100.46%范围内，准确度良好，RSD=0.72%杂质H回收率在 98.46%100.69%范围内，准确度良好，RSD=0.73%杂质川回收率在 98.22%99.62%范围内，准确度良好

29、，RSD=0.44%杂质回收率在 98.49%100.98%范围内，准确度良好，RSD=0.82%杂质V回收率在 98.26%100.17%范围内，准确度良好，RSD=0.70%杂质W回收率在 98.07%100.24%范围内，准确度良好，RSD=0.79%精密度重复性试验：测得杂质I含量RSD-1.74%，杂质H含量 RSD-2.08%，杂质川含量 RSD-1.91%，杂质W含量 RSD-1.86%，测得杂质V含量 RSD=2.19%，杂质W含量 RSD=1.61%，其他单杂含量 RSD=5.83%，其他总杂含量 RSD=5.19%。 中间精密度试验：测得杂质I含量RSD-1.42%，杂质H

30、含量 RSD-1.49%，杂质川含量 RSD-2.23%，杂质W含量 RSD-1.40%，测得杂质V含量 RSD=1.63%， 杂质W含量 RSD=1.32%，其他单杂含量 RSD=5.18%，其他总杂含量 RSD=5.40%。溶液稳定性供试品溶液、对照溶液、杂质对照品溶液室温放置12小时内溶液稳定性良好。耐用性采用不冋色谱柱，不冋的流动相比例、pH、盐浓度等检查本品的有关物质，各已知杂质的分离度均符合要求。各已知杂质测的含量的RSD均小于10%。3.2.P.5.3.2.2有关物质检查方法学验证内容1仪器设备岛津LC-20AT高效液相色谱仪、岛津 SPD-M20A二极管阵列检测器岛津LC-20

31、AT高效液相色谱仪、岛津 SPD-M20A紫外检测器2、色谱条件选择及溶液配制2.1色谱条件选择 同原料药采用十八烷基键合硅胶为填充剂， 以0.05mol/L的磷酸 二氢钾溶液（用三乙胺调节pH值至7.2）-甲醇（52:48）为流动相A，甲醇为流动相B， 进行梯度洗脱；紫外检测器，检测波长为 230nm；流速为1.0ml/min。梯度表如下：时间（分钟）流动相A （%）流动相B （%）010002310004520805010006010002.2溶液配制供试品溶液：取本品细粉适量（约相当于沃诺拉赞25mg）,精密称定，置 50ml量瓶中，加流动相A适量，振摇，使充分溶解，加流动相 A稀释至刻

32、度，摇匀，滤过， 取续滤液作为供试品溶液。对照溶液：精密量取供试品溶液适量，加流动相A定量稀释制成每1ml中约含沃诺 拉赞2.5 yg勺溶液，作为对照溶液。分别取杂质I、U、M、W、V、切工作对照品各适量，精密称定，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5卩宙勺溶液，作为杂质对照品溶液。系统适用性溶液：取富马酸沃诺拉赞工作对照品及杂质工作对照品各适量，加流动 相A溶解并稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞0.5mg及各杂质均为2.5卩的混合溶液，作 为系统适用性溶液。3、破坏性试验破坏试验溶液的配制与处理:溶液稀释步骤处理方法溶剂辅料空白辅料 101.23mg 20ml无降解处理未破坏

33、原料 13.43mg+辅料 103.61mg 20ml无降解处理高温破坏原料 13.51mg+辅料 101.77mg 20ml水浴100C加热13小时高温空白辅料 101.82mg 20ml水浴100C加热13小时光照破坏原料 13.44mg+辅料 105.01mg 20ml光照箱4500LX照射45小时光照空白辅料 103.66mg 20ml光照箱4500LX照射45小时酸破坏原料 13.39mg+辅料 102.57mg 20ml1mol/L盐酸2ml，室温放置42小时酸空白辅料 100.94mg 20ml1mol/L盐酸2ml，室温放置42小时碱破坏原料 13.42mg+辅料 100.85

34、mg 20ml1mol/L氢氧化钠溶液1ml，室温放置42小时碱空白辅料 104.05mg 20ml1mol/L氢氧化钠溶液1ml，室温放置42小时氧化破坏原料 13.25mg+辅料 104.44mg 20ml高氯酸1ml，室温放置17小时氧化空白辅料 103.38mg 20ml高氯酸1ml，室温放置17小时取上述溶液各20分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表3.2.P.5.3.2-1（图3.2.P.5.3.2-113,制剂的质量控制一第 6577页）表3.2.P.5.3.2-1富马酸沃诺拉赞片有关物质检查破坏试验结果名称沃诺拉赞总峰面积主峰面积/%物料平衡/%分离度峰纯度未破坏4.770

35、合格2246747099.924100高温破坏1.652合格2234047196.52098.85光照破坏1.678合格2234663197.64699.39酸破坏2.189合格2161695791.01296.50碱破坏2.236合格2119482394.78794.41氧化破坏4.642合格2164593189.30997.65计算公式：物料平衡%=（破坏后总峰面积/浓度）/ （破坏前总峰面积/浓度）结论：溶剂及辅料均不干扰本品的测定，各破坏条件下主峰与相邻杂质峰的分离度 符合要求，主峰未检出不纯物，样品破坏前后物料守恒，故该方法测定本品有关物质的 专属性良好。4、定量限试验 同原料药，详

36、见3.2.S.4.32表3.2.P.5.3.2-2富马酸沃诺拉赞及已知相关杂质定量限试验结果名称峰面积平均RSD%定量限/ng123456杂质川15901462154616621653179016176.940.57杂质I24262707269527072996235926488.660.59沃诺拉赞30593252310030473340320331673.710.60杂质n4510510851094607468256914951.178.950.59杂质W2579284424362198258523442497.678.980.61杂质V40124711440943074079446043

37、29.675.960.55杂质w6520646367526003668764966486.834.062.00结论：此法灵敏度较高，在限度范围内可用于富马酸沃诺拉赞及已知杂质定量检查。5、检测限试验 同原料药，详见3.2.S.4.32表3.2.P.5.3.2-3富马酸沃诺拉赞及已知相关杂质检测限试验结果名称杂质川杂质I沃诺拉赞杂质n杂质W杂质V杂质WC检测限ng/ml8.498.898.958.839.188.2630.00检测限/ng0.170.180.180.180.180.170.60结论：此法灵敏度较高，可有效检出富马酸沃诺拉赞及已知杂质6、线性关系试验同原料药，详见3.2.S.4.3

38、2表3.2.P.5.3.2-4富马酸沃诺拉赞及已知相关杂质线性试验结果名称浓度范围（pg/ml）线性方程R2沃诺拉赞0.099 2.962A=93720C-842.280.9999杂质I0.099 2.962A=94476C-11530.9995杂质n0.098 2.943A=115542C-2715.90.9999杂质川0.094 2.831A=63504C-14470.9999杂质W0.102 3.061A=90488C-1954.70.9999杂质V0.092 2.752A=70947C-3387.40.9994杂质W0.1 3.0A=100700C-5469.80.99977、精密度试

39、验7.1重复性试验取本品（批号：XS150301,规格：10mg） 100片，精密称定其重量，求得平均片重为115.23mg。将上述100片样品置于研钵中研细，混匀，作为供试品粉末。分别取杂质I、U、M、W、V、切工作对照品各适量，精密称定，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5yg的溶液，作为杂质对照品溶液。取供试品粉末约11.5g，取杂质I、U工作对照品各约 7.0mg，杂质川工作对照品 约8.0mg,杂质W工作对照品各约 5.0mg，杂质V工作对照品各约 5.3mg，杂质切工作 对照品约6.0mg，混合均匀，作为供试品。取供试品适量，加流动相A充分溶解，再加流动相A稀释制

40、成每1ml中约含沃诺拉赞0.5mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试 品溶液；精密量取供试品溶液适量，加流动相A稀释制成每1ml中约含沃诺拉赞2.5yg 的溶液，作为对照溶液。分别精密量取 20卩，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法 计算各已知杂质的含量；未知单杂以自身对照法计算其含量。重复测定6次，考察精密度。试验结果见表3.2.P.5.3.2-5 （图3.2.P.5.3.2-14-31,制剂的质量控制一第 7895页）表3.2.P.5.3.2-5富马酸沃诺拉赞片有关物质检查重复性试验结果序号123456平均值RSD%杂质1( %)0.5010.5060.507P 0.4960.511 10.

41、4870.5011.74杂质n（ %）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5012.08杂质川（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5081.91杂质w（ %）:0.5080.4990.498P 0.4900.4870.4830.494r 1.86杂质V( %)0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5002.19杂质W（ %）0.5030.5060.490P 0.4850.497 10.5000.497r 1.61其他单杂（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.83其他

42、总杂（%）0.0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.19结论：试验结果表明，此法重复性良好。7.2中间精密度试验取重复性项下供试品，由不同试验人员分别在不同日期、不同仪器检查其有关物质，试验结果见表3.2.P.5.3.2-6 （图3.2.P.5.3.2-3249制剂的质量控制一第96113页）表3.2.P.5.3.2-6富马酸沃诺拉赞片有关物质检查中间精密度试验结果序号123456平均值RSD%杂质1( %)0.50厂0.5060.507P 0.496 :0.5110.4870.5011.420.4910.5040.5080.5030.4980.502杂质n（

43、%）0.5060.4960.4910.5060.5160.4890.5031.490.5030.5070.5050.5020.5080.503杂质川（%）0.5070.5040.5190.5110.5140.4910.5002.230.484 :0.4940.493P 0.4890.5060.493杂质w（ %）0.5080.4990.4980.4900.4870.4830.4951.400.490 :0.4970.490P 0.499 10.5000.498杂质v（ %）0.5070.4950.4890.4880.5160.5020.5001.630.5020.4930.496P 0.496

44、 10.5050.505杂质w（ %）0.5030.5060.4900.4850.4970.5000.4961.320.4880.5020.4960.4910.5010.496其他单杂（%）0.0200.0200.0220.0220.0200.0190.0215.180.0200.0210.0200.0220.0190.021其他总杂（%）0.0280.0280.0310.0300.0270.0280.0295.400.0260.0290.0280.0310.0270.029结论：此法检查本品的有关物质中间精密度良好。8、溶液稳定性试验供试品溶液：取本品适量（约相当于沃诺拉赞25mg），精密称

45、定，置50ml量瓶中， 加流动相A适量，振摇，使充分溶解，加流动相 A稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤 液作为供试品溶液。对照溶液：精密量取供试品溶液适量，加流动相A定量稀释制成每1ml中约含沃诺 拉赞2.5 yg勺溶液，作为对照溶液。分别取杂质I、U、M、W、V、切工作对照品各适量，精密称定，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中含各杂质均约为2.5yg的溶液，作为杂质对照品溶液。将上述各溶液于室温下放置12小时，分别于0、3、& 9、12小时，精密量取20 yl 注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积考察溶液稳定性，结果见表3.2.P.5.3.2-79。（图3.2.P.5.3.2-5064制剂的质

46、量控制一第 114128页）表3.2.P.532-7富马酸沃诺拉赞片有关物质检查溶液稳定性试验结果（供试品溶液）名称/时间0h3h6h9h12h平均值RSD%未知杂质14059370138863998428239855.39杂质I100409532987895141047598884.03沃诺拉赞:4354665143546049434730264344392443434101434887500.13杂质n2144421347218122210223923221264.74未知杂质28351823676549349957886349.34表3.2.P.5.3.2-8富马酸沃诺拉赞片有关物质检查

47、溶液稳定性试验结果（对照溶液）名称/时间0h3h6h9h12h平均值RSD%沃诺拉赞2235192245612241462242572242102241390.17表3.2.P.5.3.2-9富马酸沃诺拉赞片有关物质检查溶液稳定性试验结果（杂质对照品溶液）峰面积/时间0h3h6h9h12h平均值RSD%杂质I2323312324032327992325382300542320250.48杂质n2505242507642511062512642501232507560.18杂质川1546791543441533191536441542831540540.36杂质w :222815 :222039

48、224030223597P 222471222990 10.37 :杂质V1943491906411885701852351807211879032.77杂质W2448022465392502332468582375312451931.92结论：供试品溶液、对照溶液、杂质对照品溶液12h内稳定性良好。9、准确性试验杂质对照品溶液：分别取杂质1（含量 73.14%）、U（含量72.46%）、川（含量 62.67%）、W（含量99.44%）、V （含量94.37%）、切（含量84.59%）工作对照品各 适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每 1ml中含各杂质均约为2.5 yg勺溶液，作为 杂质对照

49、品溶液。供试品溶液：取20140701批原料适量（约相当于沃诺拉赞 25mg），精密称定，置50ml量瓶中，加流动相A适量，使充分溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液;按外标法计算各已知杂质的百分含量表3.2.P.5.3.2-10富马酸沃诺拉赞各已知杂质的测定结果名称杂质I杂质n杂质川杂质W杂质V杂质W测得含量%0.0150.031未检出未检出未检出未检出回收率溶液:1）取杂质I、U工作对照品各约 11.0mg,杂质川工作对照品约12.8mg,杂质W工 作对照品各约8.0mg，杂质V工作对照品各约8.5mg，杂质切工作对照品约9.5mg，精 密称定，置200ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至

50、刻度，摇匀；精密量取 1ml，置 20ml量瓶中，取原料约13.36mg,精密称定，置同一 20ml量瓶中，按处方比例加入辅 料，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率（80%浓度）溶液。同法配制3 份。2）取杂质I、U工作对照品各约 13.7mg,杂质川工作对照品约16.0mg,杂质W工 作对照品各约10.0mg,杂质V工作对照品各约10.6mg,杂质切工作对照品约11.8mg, 精密称定，置200ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取 1ml，置 20ml量瓶中，取原料约13.36mg,精密称定，置同一 20ml量瓶中，按处方比例加入辅 料，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，作为回收率（100%浓度）溶液。同法配制 3份。3）取杂质I、U工作对照品各约 16.5mg,杂质川工作对照品约19.1mg,杂质W工 作对照品各约12.0mg，杂质V工作对照品各约12.7mg,杂质切工作对照品约14.2mg, 精密称定，置200ml量瓶中，加流动相