豆制品、火锅、麻辣烫等食品中喹诺酮类化合物测定

1、豆制品、火锅、麻辣烫等食品中瞳诺酮类化合物测定 (BJS, 202109)豆制品、火锅、麻辣烫等食品中唾诺酮类化合物的测定BJS2021091 范围本标准 规定了豆腐、豆干、火锅底料、麻辣烫底料及火锅和麻辣烫的食材中诺氟沙 星、氧氟 沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司 帕沙星、环丙 沙星、达氟沙星、恩诺沙星的高效液相色谱 - 串联质谱检测法。本标准适用于豆腐、 豆干、火锅底料、 麻辣烫底料及火锅和麻辣烫的食材中诺氟 沙星、 氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、沙拉沙星、双氟沙星、 司帕沙星、 环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星的测定和确证。2 原理采用 0. lmol/L

2、EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液提取样品中的喳诺酮类化合物， 经离心 和过滤后，上清液经 HLB 固相萃取柱净化后，用高效液相色谱 - 串联 质谱仪检测 和确证，内标法定量。3 试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯，水为 GB/T6682 规定 的一 级水。3. 1乙睛 (CH3CN) ：色谱纯。3.2甲醇( CH30H) ：色谱纯。3. 3甲酸(CHOOH):色谱纯。3. 4 甲醇(CH30H)。3. 5 氨水(NH40H):浓度 25%? 28%。3.6 乙二胺四乙酸二钠 (C10H14N2Na208 ? 2H20)。3. 7 柠檬酸(C6H807 ? H20)。3. 8

3、 磷酸氢二钠 (Na2HP04 ? 12H20)。3.9 氢氧化钠 (NaOH)o 3. 10 盐酸(HC1):含 HCI38%。3. 11 乙酸铁 (CH3COONH4) :色谱纯。3. 12 磷酸氢二钠溶液 (0. 2mol/L) :称取 71. 63g 磷酸氢二钠 (3.8),用水溶解 并定容至lOOOmLo3. 13柠檬酸溶液0. Imol/L:称取21.01g柠檬酸3.7,用水溶解并定容至lOOOmLo3. MMcllvaine 缓冲溶液：将 lOOOmLO. lmol/L 柠檬酸溶液 3. 13与 625mL0. 2mol/L 磷酸氢二钠溶液 3.12混合，用盐酸或氢氧化钠调节 p

4、H 至 4.00. 1。3. 15EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液0. Imol/L :称取 60. 5g 乙二胺四乙酸二钠 3. 6至 1625mLMcllvaine 缓冲溶液 3. 14中, 超声使其溶解。3. 165%甲醇水溶液:取 5mL 甲醇 3.4 ,用水稀释至 100mLo3. 1725%氨水甲醇溶液:取 25mL M 水 3.5 ,用甲醇 3.4稀释至 100mLo3. 1 8标准品:标准品中文名称、英文名称、 CAS 登录号、分子式、相对分子质量 见 附录 A 表 A. 1, 纯度 299%。3. 19标准储藏液配制：分别精密称取标准品3. 18约10mg,置10mL容

5、量瓶中， 加 入 0. 2mL 甲酸 3.3 ,超声使溶解，用乙 . 腌 3. 1定容至刻度，摇匀， 配制成 浓度为1. Omg/mL的标准储藏液，转移至溶剂瓶中于-18以下避光保 存，有效期 6 个月。3. 20混合标准溶液的配制：准确吸取标准储藏液3. 19 ImL于100mL容量瓶中，用 甲醇 3.2定容至刻度， 配制成浓度为 O.Olmg/mL 的混合标准溶液环 丙沙星、 沙拉沙星浓度约0.015mg/niL ，于 QC以下避光保存，有效期 3个 月。3.21混合标准中间溶液的配制：准确吸取混合标准溶液3.20 lmL至10mL容 量瓶中，用甲醇3.2定容至刻度， 配制成浓度为 l.O

6、ug/mL 的混合标准 中间溶液环 丙沙星、沙拉沙星浓度约l.Sug/mL,于4工以下避光保存，临用新配。3. 22内标标准储藏液配制：分别称取笊代同位素标准品3. 18约10mg,至 10mL容量瓶中，参加0. 2mL甲酸3.3,超声溶解，用乙脯3. 1稀释至刻度，配制成浓度为1. Omg/mL的标准储藏液，于-18T以下避光保存，有效期6个月。3.23混合内标标准中间溶液的配制： 准确吸取内标标准储藏液 3.22 O.OlmL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇 3.2定容至刻度，配制成浓度为 1.0ug/mL 的混合内标标准 中间溶液，于 4工以下避光保存，临用新配。3.24固相萃取小柱 5

7、00mg, 6mL： HLB 柱或相当者。使用前依次以 6mL 甲醇、 6mL 水活化，保持柱体湿润。4 仪器和设备 4.1 液相色谱 - 串联质谱仪：配有电喷雾离子源 ESI o4. 2分析天平：感量 0. 001g和O.OOOOIg。4. 3涡旋振荡器4. 4超声仪4. 5离心机：转速8000r/min4. 6均质器4. 7氮气浓缩仪 5 测定步骤 5.1 试样制备与保存豆制品、火锅和麻辣烫的食材从待检样 品中 取出样品约500g,用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18 “C冷冻存放。火锅底料、麻辣烫底料固体状：从待检样品中取出样品约500g,用组织捣碎机 充

8、分捣碎混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于 4工冷藏存放。半固体状：从待检样品中取出样品约500g,放入研钵中，迅速研磨均匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记于 4C 冷藏存放。液体状：从待检样品中取出样品约500g,搅拌均匀后装入洁净容器中，密封，并标明标记，于 4工冷藏存放。5. 2样品溶液制备提取：称取 5. 0g均匀样品精确至0. 001g,置50mL离心管中，精密参加混合内标标准中间溶液3.23 0. ImL,参加20mL0. Imol/LEDTA-Mcllvaine 缓冲溶液3. 15涡旋混匀 Imin,超声提取 15min, 8000r/min离心5min,上淸液转移至 5

9、0mL容量瓶中，残渣用EDTA-Mcllvaine缓冲 溶液3.15同法重复提取两次，每次 10mL,合并上 淸液至同一容量瓶中，用 EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液 3.15定容至刻度，混匀。用滤纸过滤必要时10000r/min 离心 5min 后过滤，续滤液待净化。净化：精密吸取上述待净化液 25.0mL,以约lmL/min的流速全部通过固相小柱3.24，用 3mL5%甲醇水溶液3.16淋洗，抽干，先后以 6mL甲醇、3mL氨 水甲醇 3.17洗脱，合并甲醇及氨水甲醇洗脱液，45*氮吹至近干，准 确参加2.0mL流动相初始比例复溶液溶解残渣，过0.22uni滤膜，续滤液供 液相色谱-

10、串联质谱仪分析。5. 3基质标准工作溶液的制备称取5.0g空白试样精确至0. 001g,置50mL离 心管中，除不参加混合内标标准中间溶液外，其余同 5.2操作处理后得到空 白基质， 共制备 6份。分别精密吸取混合标准中间溶液 3. 21 0mL、 0. 010mL、 0. 020mL、 0. 050mL、 0.lOOmL 、0. 200mL及混合內标标准中间溶液(3. 23)0. 025mL于试管中，氮吹至近干， 精密 参加l.OmL空白基质复溶，过0.22um滤膜，制成浓度为Ong/mL. IOng/mL, 20ng/mL.50ng/mL. 100ng/mL 、200ng/mL 的基质标准

11、工作溶液 ( 环 丙沙星、沙拉沙星浓度 为 Ong/mL, 15ng/mL. 30ng/mL, 75ng/mL 、150ng/mL. 300ng/mL, 同位素内标浓度约 25ng/mL)05. 4 测定 5. 4. 1液相色谱参考条件 1)色谱柱： C18 色谱柱， 2. ImmX50mmX1.7um, 或性能相当者。2)柱温: 40C o3)流速： 0. 25mL/min o4)进样量： 2uL50%20%? 50% 10%? 20%八10%允许的相对偏差， 20% 5% 0% 0%5. 6定量待测样 液中唆诺 酮药物的响应值应在标准曲线线性范围内，诺氟沙星、氧氟沙星、 培氟沙星、氟 罗沙

12、星以氛代诺氟沙星为内标，洛美沙星、双氟沙星、环丙沙 星、达氟沙星以氛 代环丙沙星为内标，司帕沙星、沙拉沙星、恩诺沙星以笊 代恩诺沙星为内标，内 标法定量。本方法中所列内标能根本满足方法要求， 如条件允许，可采用各化合 物的对应同位素化合物作为内标。6 结果计算试样测定结果按公式 1计算目标物的含量：1式中：X试样中被测组分的含量，单位为微克每千克 ng/kg；m 试样的称样量，单位为克 g;C由工作曲线计算得到的试样中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升ng/mL；V 定容体积，单位为毫升 mL 。F稀释倍数计算结果需扣除空白值空白基质，并保存三位有效数字。7 检测方法灵敏度、准确度、精密度 7.

13、 1 灵敏度诺氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、 培 氟沙星、氟罗沙星、双氟沙星、司帕沙星、达氟沙星、恩诺沙星检出限均 为 5 u g/kg, 环丙沙星检出限为7. 5 u g/kg,沙拉沙星检出限为7. 5 y g/kg。诺氟沙星、氧氟沙星、洛 美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、双氟沙星、司帕沙星、 达氟沙星、恩诺沙星定量限均 为15ug/kg,环丙沙星定量限为22.5ug/kg,沙拉沙星定量限为22.5ug/kg。7. 2 准确度本方法在 15. 0? 100. Ou g/kg 的添加水平上的回收率范围为 65. 0%? 120. 0%。7. 3 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不

14、得超过算术 平均值 的 15%0附录 A 标准品信息表 A.1 标准品中文名称、英文名称、 CAS 登录号、分子式、相 对分子质量序号化合物名称英文名CAS登录号分子式相对分子质量1诺氟沙 星Norfloxacin70458-96-7C16H18FN303319. 332 氧氟沙星Ofloxaci n82419-36-IC18H20FN304361. 373 洛美沙星Lomef 1 oxacin98079-51-7C17H19F2N3O3351. 354 培氟沙星 Pefloxacin7O458-92-3C17H2OFN3O3333. 365 氟罗沙星 F1 eroxacin7966O-72-

15、3C 17H18F3N3O3369. 346 盐酸沙拉沙星SarafloxacinHydrochloride91296-87-6C20H18CIF2N303421.817 盐酸双氟 沙星 D 辻 loxacinHydrochloride91296-86-5C21H2OClF2N3O3435. 858 司帕沙 星 Spar fl oxac i n 11O871-86-8C19H22F2N4O3392. 4O9 环丙沙星 Ciprofloxacin85721-33-lC17H18FN3O3331. 341O 甲磺酸达氟沙星Danofloxacinmesylatell9478-55-6C2OH24FN3O6S453. 4811 恩诺沙星Enrofloxacin93106-60-6C19H22FN3O3359. 3912D8 -环丙沙星 Ciprofloxacin-d8/C17H1OD8FN3O3339. 3913D5- 恩诺沙星Enrofloxacind5/C 19H17D5FN3O3364. 3714D5- 诺氟沙星Norf 1 oxacin-d5/C 16H13D5FN3O33