3 烟草中农残检测技术LC-MSMS

1、烟草及烟草制品烟草及烟草制品 多种农药残留量多种农药残留量的测定的测定 LC-MS/MSLC-MS/MS 国家烟草质量监督检验中心国家烟草质量监督检验中心 ( (一）、一）、LC-MS/MSLC-MS/MS简介简介（二）、方法原理（二）、方法原理 ( (三）、适用农药三）、适用农药（四）、检测流程（四）、检测流程（五）、检测中常见问题（五）、检测中常见问题主要内容主要内容n以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在液相色谱部分分离，经质谱离子化，质量分析器将离液相色谱部分分离，经质谱离子化，质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。

2、子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。 n色谱和质谱优势结合，应用广泛。色谱和质谱优势结合，应用广泛。 适用于高沸点、大分子、强极性和热稳适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析。定性差的化合物的分析。适于复杂基质样品适于复杂基质样品, ,特别是农产品，生物特别是农产品，生物样品中的农兽药残留的定性定量分析。样品中的农兽药残留的定性定量分析。利于多组分分析。利于多组分分析。 实验原理 粉碎后的干燥样品在调节含水量之后使用乙腈振荡粉碎后的干燥样品在调节含水量之后使用乙腈振荡提取，然后用无水硫酸镁和氯化钠振荡促使其分层；提取，然后用无水硫酸镁和氯化钠振荡促使其分层；采用采用PSAP

3、SA（primary secondary amineprimary secondary amine）吸附剂去除）吸附剂去除提取液色素、脂肪酸等实现净化，用高效液相色谱提取液色素、脂肪酸等实现净化，用高效液相色谱- -串接质谱仪实现检测，内标法定量。串接质谱仪实现检测，内标法定量。适用农药适用农药A A、有机磷类有机磷类 安硫磷、毒虫畏、毒死蜱、二嗪磷、乐果、灭线磷、苯线磷、氧乐果、倍硫磷、马拉硫磷、久效磷、甲拌磷、伏杀硫磷、辛硫磷、甲基嘧啶磷、杀虫畏、敌百虫、蚜灭磷、磷胺B B、氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类 涕灭威、甲萘威、克百威、丁硫克百威、甲硫威、灭多威、 杀线威、抗蚜威、残杀威、硫双威C C

4、、杀菌剂杀菌剂 腈菌唑、霜霉威、氟吗啉、霜脲氰、咪鲜胺和咪鲜胺锰盐、阿拉酸式苯-S-甲酸、苯霜灵、多菌灵、甲基硫菌灵、噁霉灵、稻瘟灵、苯菌灵、噁唑菌酮、烯酰吗啉、戊菌唑、恶霜灵、三唑醇、三唑酮D D、除草剂除草剂 异噁草松、双苯酰草胺、吡氟禾草灵、喹禾灵、克草敌、敌草胺、甲草胺、异丙甲草胺E E、其它杀虫剂、其它杀虫剂啶虫脒、除虫脲、吡虫啉、吡蚜酮、噻虫嗪常见检出的农药杀菌剂：杀菌剂：腈菌唑、霜霉威、甲霜灵、苯霜灵、多菌灵、甲基硫菌灵、稻瘟灵、烯酰吗啉、恶霜灵、三唑醇、三唑酮、异菌脲除草剂：除草剂：甲草胺、二甲戊灵、异噁草松其它杀虫剂：其它杀虫剂：啶虫脒、吡虫啉测定条件测定条件步骤步骤时间（时

5、间（min）流速（流速（L/min）水水（%）乙腈乙腈（%）00.00200901011.00200505025.002005050316.002004060425.002002080530.00200595640.00200595740.012009010845.002009010 液相色谱条件液相色谱条件色谱柱：色谱柱： C18液相色谱分析柱液相色谱分析柱 (柱长柱长 150 mm ，内径，内径 2.1 mm ， 固定相粒径固定相粒径3 m) 或相当者；或相当者；柱温：柱温：25 ；进样量：进样量：10 L；推荐：AtlantisdC18 3m 质谱条件质谱条件扫描方式：正离子扫描扫描方式

6、：正离子扫描/负离子扫描；负离子扫描；监测方式：多反应监测；监测方式：多反应监测；电喷雾电压：电喷雾电压：5500 V；雾化气压力：雾化气压力：0.414 MPa；离子源温度：离子源温度：500 ；测定条件测定条件检测流程检测流程样本采集样本采集测定测定制备制备净化净化确证确证提取提取前处理过程前处理过程内标：内标：磷酸三苯酯磷酸三苯酯 Rp以干基计的农药残留量，单位为毫克每千克（mg/kg） cr从基质混合标准工作曲线上得到的被测组分在试样萃 取液中的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）； V提取步骤提取剂乙腈的使用体积，单位为毫升（mL）； m样品质量，单位为克（g）； w样品的水分含量，%

7、（质量分数）。计算公式计算公式不同稀释倍数基质标准曲线响应强度变化 基质混合标准工作曲线的制作基质混合标准工作曲线的制作 标准工作溶液标准工作溶液 分别移取混合标准储备液 1000L、 500 L、250 L、100 L 及50 L到5个10 mL容量瓶中，加入100 L内标工作液，用乙腈定容。空白样品提取液空白样品提取液+标准工作溶液标准工作溶液+乙腈乙腈空白样品空白样品提取及净化提取及净化空白样品提取液空白样品提取液基质混合标准工作溶液基质混合标准工作溶液LC-MS/MS分析分析相对等浓度标准溶液的响应强度（相对等浓度标准溶液的响应强度（1ppb）不同基质对信号的影响需要注意的问题需要注意

8、的问题 样品含水率对于萃取乃至回收率影响很大样品含水率对于萃取乃至回收率影响很大调整样品含水率，调整样品含水率，2g样品添加样品添加10mL水水基质效应基本上引起响应信号的下降基质效应基本上引起响应信号的下降不同基质的影响趋势一致，但幅度有差别不同基质的影响趋势一致，但幅度有差别相同基质对不同目标物的影响差别很大相同基质对不同目标物的影响差别很大基质标准曲线的应用，结合内标基质标准曲线的应用，结合内标稀释有助于减小基质效应，但效果有限稀释有助于减小基质效应，但效果有限适当稀释适当稀释需要注意的问题需要注意的问题 灵敏度低检查步骤灵敏度低检查步骤 若若FIA正常，则再继续接上色谱柱采样，判断是色

9、谱柱问题还是流动相问题。正常，则再继续接上色谱柱采样，判断是色谱柱问题还是流动相问题。 样品本身的问题，如样品没有完全溶解，浓度不够，所用溶剂与流动相不匹样品本身的问题，如样品没有完全溶解，浓度不够，所用溶剂与流动相不匹配等。配等。 样品存贮时间过长，保存条件不好，分解或吸附了。样品存贮时间过长，保存条件不好，分解或吸附了。 放在自动进样器中的样品小瓶内套管底部有气泡，没取到样品，或针头位置放在自动进样器中的样品小瓶内套管底部有气泡，没取到样品，或针头位置太高，而样品液面太低。太高，而样品液面太低。 前处理步骤中，标准品、内标样品是否加进，提取过程中有无遗洒。前处理步骤中，标准品、内标样品是否

10、加进，提取过程中有无遗洒。 离子对质量数输入准确否，有无错误？离子对质量数输入准确否，有无错误？ 管路漏液管路漏液:样品没有完全进到离子源里。样品没有完全进到离子源里。 管路部分堵塞管路部分堵塞:喷雾时断时续喷雾时断时续,小流量信号好小流量信号好,大流量信号差。大流量信号差。 先调出安装仪器时的先调出安装仪器时的PPG等方法，用注射泵等方法，用注射泵SYRINGE PUMP，进，进PPG看看，看看，质量校准点漂移否质量校准点漂移否,若质量校准不对，造成质量数无法选准，要重新校准仪器。若质量校准不对，造成质量数无法选准，要重新校准仪器。 若注射泵采集若注射泵采集PPG强度和质量校准正常，则再看标

11、准品样品，强度和质量校准正常，则再看标准品样品，COMPOUND等参数是否正确，质量数是否准确。等参数是否正确，质量数是否准确。仪器设备因素仪器设备因素重复性差检查步骤重复性差检查步骤 气帘气气帘气(Curtain Gas)太低，会有周期性降低现象。太低，会有周期性降低现象。 采样时间采样时间(Dwell Time)太长，每个色谱峰采样点太少，至少十几点，采样时太长，每个色谱峰采样点太少，至少十几点，采样时间间太短则噪声太高，信噪比不好。太短则噪声太高，信噪比不好。 新色谱柱没有充分平衡，旧色谱柱老化，重新清洗活化，或更换。新色谱柱没有充分平衡，旧色谱柱老化，重新清洗活化，或更换。 源温度太高，样品分解。源温度太高，样品分解。 加样前与标准液分别平行做处理，观察有无区别加样前与标准液分别平行做处理，观察有无区别, 若标准品溶液无问题，而样若标准品溶液无问题，而样品重复性差，则问题可能出在基质的干扰或前处理方法不当。品重复性差，则问题可能出在基质的干扰或前处理方法不当。 稀释配制样品的移液枪，移液管，容量瓶等有无污染问题。稀释配制样品的移液枪，移液管，容量瓶等有无污染问题。 梯度洗脱后平衡时间不够，或脏东西没洗干净，累积使得重复性差梯度洗脱后平衡时间不够，或脏东西没洗干净，累积使得重复性差 重复性差重复性差 重复性差重复性差 重复性差，应彻底冲洗柱子。重复性差，应彻底