血清直接胆红素测定.doc

1、血清直接胆红素（D-BIL ）测定1. 实验原理直接胆红素与 2,4- 二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。2. 标本：2.1病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。2.2类型：血清、肝素或 EDTA血浆，应避光保存。3. 标本存放： 15 25保存可稳定 2天； 28保存可稳定 7天； -20 保存可稳定 3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！ 。4. 标本运输： 常温条件下避光保存运输。5. 标本拒收标准： 标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。6. 实验材料6.1试剂：申能总胆红素试剂盒： 141 0827170 1试剂试剂 26.1.1试剂组成试剂

2、1： 16 64mlEDTA-Na20.07mmol/L氯化钠6.6g/L氨基磺酸70mmol/L试剂2： 6 16ml2,4-二氯苯胺重氮盐0.09mmol/L盐酸130mmol/LEDTA-Na0.02mmol/L26.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2 8，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为18个月。试剂2必需避光保存。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用。警告！腐蚀剂！不要入口。避免和眼睛，皮肤或衣服接触。如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。接触

3、到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。6.2校准品：使用 DiaSys公 司 提 供 的 TruCal U校 准 品 对 自 动 分 析 仪 进 行 校 准 ， 参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯 AU680生化分析仪8. 操作步骤8.1项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件检验结果的判断与分析10.质量控制： 在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以 2S为质控警告限， 3

4、S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法以 TruCal U复 合 校 准 品 校 准 仪 器 后 ， 在 病 人 结 果 可 报 告 范 围 内 ， 仪 器 直 接 报告 可 靠 的 检 测 结 果 无 需 手 工 计 算 ， 以 mol/L报 告 。手工测定计算方法为： Au直接胆红素( mol/L) =-校准液浓度 As12. 参考值范围： 6.8 mol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义： 胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红素非极性很强，几乎

5、不溶解于水。在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合, 生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。溶血（肝前黄疸） 、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使6070%的婴儿血液出现总胆红素增高。常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。14. 操作性能14.1线性范围： 1.7 171m

6、ol/L14.2精密度： 精密度的评估是根据 NCCLS推荐的标准方法5，AU680批内精密度小于4%或SD 0.04 ，总精密度小于 5%或 SD 0.07 。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度xsCV批间精密度xsCVn=20( mol/L)( mol/L)(%)n=20( mol/L)( mol/L)(%)样品 16.00.203.34样品 16.20.193.12样品 212.80.121.00样品 213.00.191.46样品 336.40.260.71样品 335.40.461.3014.3方法学比较：本公司的试剂盒(y) 与某商品化试剂盒 (x)

7、 ，同时对 85个样品进行 DBIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.95x+0.68 mol/L ； r=0.995 。14.4灵敏度： 1.7 mol/L 。14.5病人结果可报告范围：1.7 171 mol/L15 超出范围结果处理本法线性上限为171mol/L 。样品测定值超过上限时，应将样品用0.9 氯化钠溶液作 1:1 稀释，重新测定，结果乘以2。16.病危报警值的处理无。17. 方法局限性17.1本法线性上限为171mol/L 。样品测定值超过上限时，应将样品用0.9 氯化钠溶液作1:1 稀释，重新测定，结果乘以2。17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度17

8、04 mol/L，甘油三酯浓度22.6mmol/L 时没有观察到干扰。血红蛋白浓度0.50g/L 将产生干扰。18. 补救措施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献：Tietz, N.W.(Ed), Fundamentals of Clinical Chemistry, 3rdEdition, W.B. Saunders,1987.Van den Bergh, A. and Mueller, P., Biochem Z,77:90,1916NCCLS, Interference Testing in Clinical Chemistry, EP7-P,1986.Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 4thEdition, AACC Press, 1995.NCCLS, Evaluation Protocol EP5-T2,1992.Rand, R. N., DI Pasque, A., Clin Chem 1962; 8: 570Henry,J.,Cannon, D. C.,Winkelmann, J.V.,Clinicalchemistry,p