活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用(作者：单位：邮编：)【摘要】目的 研究活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽 的吸附作用。方法 将活性炭加入小牛血清去蛋白提取液中，过滤后 检测蛋白含量及吸光度值，呼吸活性及氨基酸的含量。结果 与无活性 炭对照比较，加入活性炭后小牛血清去蛋白提取液吸光度值、多肽含量均明显下降；呼吸活性及氨基酸含量没有明显变化。结论 活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽有吸附作用。【关键词】活性炭;小牛血清去蛋白提取液；多肽The Absorpti on Effect of Active Carb on on the Polypepti

2、dein Calf Serum Abstract Prote in-freeLI Xi n, WANG Tie(Lia oning Ahon PharmaceuticalsCorporati onLimitedJnzhou 121000 China)Abstract : Objective To study the effects of active carb on on the polypeptide in calf serum abstract protei n-free. Methods Put active carb on into calf serum abstract protei

3、 n-free; and determ ine protein content, absorbanee, amino acid content and breath nature after filtrati on .Result Compared with the group without active carb on, absorba nee and prote in content decreased ,while breath n ature and amino acid content did not decrease.C on clusi ons Polypeptide was

4、absorbed by active carb onKey words: active carb on; calf serum abstract protei n-free; polypeptide活性炭是一种多孔径的炭化物，有极丰富的孔隙构造，具有良好 的吸附特性，它的吸附作用藉物理及化学的吸咐力而成的，其外观色泽呈黑色。其成份除了主要的炭以外，还包含了少量的氢、氮、氧， 其外形似一个六边形，由于不规则的六边形结构，确定了其多体枳及 高表面积的特点，每克的活性炭所具有的比表面相当于1 000个平方米之多，其吸附容量大、脱附速度快，耐酸、耐碱、耐高温，无毒、 无味、无臭；广泛应用于国防、科研、

5、石化、生化、环保、医药、食 品、卫生等领域。几乎所有人工合成和生物制药的原料药，尤其是西 药都采用活性炭进行脱色精制1 ,2。活性炭吸附的主要作用是去除 杂质、提高纯度和去除热源。我公司产品小牛血去蛋白提取液在生产 中采用，活性炭脱色，本文研究其在脱色的同时对小牛血清去蛋白提 取液中多肽的吸附作用及其对产品质量的影响。1材料与方法1.1材料1.1.1活性炭（上海活性炭厂有限公司）；小牛血清去蛋白提取液 （奥鸿药业提供）1.1.2药品与试剂 血清白蛋白（中国药品生物制品检定所）；酚 试剂（医学科学院生物制剂中心）；碱性铜（奥鸿药业提供）。1.1.3仪器UV-1700紫外分光光度计（岛津苏州仪器制

6、 造）;BP211D电子天平（北京赛多利斯有限责任公司）；微孔滤膜过滤1.1.4高效液相色谱仪1.1.5呼吸活性检测仪1.2方法取小牛血清去蛋白提取液6个批次各1 000 mL,检测吸光度值、 蛋白含量、氨基酸含量及呼吸活性（1组），分别加入活性炭0.15 g， 混合均匀后，放置30 min，过滤除炭，检测吸光度、蛋白含量、氨 基酸含量及呼吸活性（2组），再分别继续加入活性炭 0.15 g重复上 述操作两次，得（3组）、（4组）。4组数据相比较。1.3检测方法1.3.1吸光度的测定3依据紫外-可见分光光度法（中国药典2005年版附录），在波 长420 nm处测定吸光度值。1.3.2多肽含量的测

7、定标准曲线的制备：精密量取标准蛋白溶液 （0.1 mg/mL）0mL、0.2 mL 0.4 mL 0.6 mL 0.8 mL 1.0 mL分别于试管中，加水至 1 mL 再分别加碱性铜溶液5 mL，混匀于室温放置10 min，再加入酚试剂 0.5 mL摇匀，于室温放置30 min，于650 nm波长处用空白管调零， 测定各管的吸光度值，以蛋白质含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标 绘制标准曲线。李鑫，等：活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽的 吸附作用辽宁医学院学报2008年8月，29（4）样品测定：取本品10倍稀释，作为供试品溶液，精密量取供试 品溶液1 mL于试管中，加碱性铜溶液5 mL摇匀于室

8、温放置10 min, 再加入酚试剂0.5 mL摇匀，于室温放置30 min，于650 nm波长处 测定吸光度，从标准曲线中求得样品中蛋白质的含量。133氨基酸含量的测定将对照溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，每次2.5卩L,记录色谱图，按内标法以峰面积计算。计算公式：游离氨基酸含量（mg/mL）二（滤样浓度-内标浓度）X 58.8内标浓度X 1 0001.3.4采用呼吸检测仪检测各组样品的呼吸活性测定方法如下：预先把测压计反应瓶洗净并干燥备用，装好测压液于测压管内， 调节液面至150 mm加10%|氧化钾溶液0.2 mL于反应瓶小杯中（为 了增加氢氧化钾对二氧化碳的吸收面积， 在氢氧化钾溶液

9、中插入一小 片滤纸）。反应瓶中先加入磷酸盐缓冲液1.1 mL,肝匀浆液1.0 mL, 然后加供试品0.2 mL于反应瓶中。由于肝匀浆本身有耗氧作用，故试验时以磷酸盐缓冲液0.2 mL代替供试品，作空白管。将装好的反应瓶按管号与测压计相连（注意密闭，勿使漏气）置37 C恒温水浴中。开动振荡器10 min（120次/分)使反应瓶内外温度一致，将测压计右侧液面调至150 mm记下左侧液面读数(A)。关闭三向活塞，开始计时，反应 30 min将测压计右 侧液面调至150 mm记下左侧液面读数(B)。重复二次，记下读数 C 和0实验过程中必须附加一套供校正用的稳压计，在反应瓶中先加 与试验液相同体积的磷

10、酸盐缓冲液，使其在与试验管完全相同的条件 下，观察压力的变化( C)，以消除由于温度及大气压的影响而引起 的误差。计算方法QO2 IO2/mg h)二(A-B)+(C-D)x K1- Cx K2/(G T)K1:供试品或对照品的反应瓶常数G :每mL肝匀浆干重(105 C恒重)(mg)T :反应时间(小时)K2:稳压计组反应瓶常数： C:稳压计组压力变化之和。刺激指数(SI)= 供试品QO2空白QO2本品刺激指数(SI)应不小于3.0。1.4统计学处理实验所得数据以士 s表示，应用SPSS统计软件11.5进行单因素 方差分析及q检验，P0.05具有显著性意义，P0.01具有极显著性意 义。2结

11、果2.1活性炭对小牛血去蛋白注射液吸光度值的影响标准曲线见图1。图1蛋白质含量标准曲线 不同量的活性炭加入后，与未加活性 炭组相比，吸光度值均有明显下降；活性炭的加入量越多，吸光度值 下降越明显，第2、3组与第1组相比，P0.01，第4组与第3组相比 P0.05，结果见表1。2.2加入活性炭后对小牛血去蛋白注射液多肽含量的影响不同量的活性炭加入后，与未加活性炭组相比，多肽含量均有明 显下降；活性炭的加入越多，多肽含量下降越明显，第 2、3组与第1 组相比，P0.01，第4组与第3组相比P0.05，结果见表1。2.3加入活性炭后对小牛血去蛋白注射液氨基酸含量的影响不同量的活性炭加入后，与未加活性炭组相比，各组氨基酸含量 没有明显变化，无统计学意义。结果见表1。2.4加入活性炭后对小牛血去蛋白注射液氨基酸含量的影响不同量的活性炭加入后，与未加活性炭组相比，各组氨基酸含量 没有明显变化，无统计学意义。结果见表1。表1活性炭对小牛血去蛋白注射液吸光度值3讨论活性炭作为一种制药企业中常用的脱色剂及吸附剂，被广泛地应用，以前大家仅关注活性炭可以吸附有色物质，使吸光度值下降。我 们的实验发现：活性炭加入到小牛血清去蛋白提取液中后，不仅使提取液颜色变浅，吸光度值下降，起到脱色作用，同时吸附了小牛血清 去蛋白提取液中多肽，使其蛋白质含量下降。但并未影响其氨基酸的 含量及呼吸活性。因此，通