Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的实验研究

1、Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的实验研究辽寄压亏院2008Dec.29(6)JLiaoningMedicalUniversity509Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的实验研究谷燕娇,苏荣健,高志安(1.辽宁医学院附属第一医院病理科;2.辽宁医学院科学实验中心,辽宁锦州120001)摘要:目的探讨分子伴侣Grp78用于胸部良恶性肿瘤鉴别诊断的可能性.方法应用免疫印迹技术对36例疑似肺癌病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测,并将检测结果与胸水脱落细胞学检查结果和临床病理资料对照.结果免疫印迹结果表明Grp78高表达的2l例病人,经过临床观察和病理学检查,有l9例被临床诊断为肺

2、癌,Grp78表达水平较低15例病人中,没有病例被诊断为肺癌,灵敏度为90%,特异度为85.7%;而应用传统的检测方法对36例肺癌疑似病人胸水进行脱落细胞学检查,有12例病人怀疑为肺癌,经过临床及病理学检查有4例被排除,灵敏度为47%,特异度为85%.结论检测肺癌疑似病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平可以提高肺癌鉴别诊断的灵敏度,有利于胸部恶性肿瘤的早期诊断及鉴别诊断.关键词:Grp78;胸部肿瘤;鉴别诊断中图分类号:R735.2文献标志码:A文章编号:16740424(2008)06一o50902TheExperimentalResearchofGrp78ExpressionintheH

3、ydrothoraxDetachedCellsintheDifferentialDiagnosisinChestTumorGUYanjiao,SURongjian,GAOZhian(1.ThePathologyDepartmentoftheFirstAffiliatedHospitalofLiaoningMedicalUniversity;2.CentralLaboratoryofLiaoningMedicalUniversity,Jinzhou121001China)Abstract:ObjectiveToexplorethepossibilityofdetectingGrp78expres

4、sionlevelsinthehydrothoraxdetachedcellsinthedif-ferentialdiagnosisinchesttumors.MethodsTheexpressionlevelsofGrp78in36casesofsuspendedchesttumorpatientswerede-tectedbywestelTtblotandthehydrothoraxdetachedcellsanalyseswerealsodetectedbyHEstaining.ResultsInthe21easesofpatientsthatGrp78isoverexpressedin

5、thehydrothoraxdetachedcells,19casesofpatientswereidentifiedaslungcancerbyretrospectiveanalysisofclinic0patholocaldata.Inthe15CaSSofpatientsthatGrp78wasradicallyexpressed,noneofwhichWasdiagnosedascancer.Inthe12casesofpatientsdiagnosedaslungcancerbythebydrothoraxdetachedcellsanalysisbyHEstaining,4case

6、swereexcludedfromthediagnosisofcancerbasedonclinicopathologicManalysis.ThesensitivityofHEstainingis47%comparedwith81%ofwesternblot.ThespecificityofHEstainingandwesternblotis85%and85.7%respectively.ConclusionsDetectionofGrpT8expressionlevelsinthehydrothoraxdetachedcellsisausefultargetinthedifferentia

7、ldiagnosisofchesttumor.Keywords:Grp78;chesttumor;differentialdiagnosis肺癌发病率高预后较差是一种严重威胁人类健康的疾病,其早期发现对于肺癌病人的治疗及预后具有重要意义.胸水脱落细胞学检查是早期诊断肺癌的一种常用方法,但是传统的脱落细胞学检查过多依赖于操作者的业务能力,主观性较强,而且灵敏度低,在一定程度上延误了肺癌的诊断,因此,提高检测的灵敏度和客观性是非常必要的.Grp(glucoseregulatedprotein)78是内质网合成的分子伴侣,在内质网中与新生蛋白质和错误折叠的或非折叠蛋白质结合,帮助其折叠形成正确的构象

8、.近年来的研究表明,Grp78的表达与功能与肿瘤的发生,进展关系密切,在正常细胞中低/不表达,在恶性肿瘤细胞中高表达-5o在分化程度不同的细胞中Grp78表达的水平不同,在分化程度低的细胞中其表达水平较高而在分化程度高的细胞中其表达水平较低j.本研究,对36例肺癌疑似作者简介:谷燕娇(1970),女,辽宁省锦州市人,主治医师,在读硕士研究生,主要研究方向为病理诊断学.通讯作者:高志安(1955),男,辽宁省锦州市人,教授,博士学位,主要研究方向为病理诊断学.5lO辽宁医学院2008年12月,29(6)病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测,以探讨胸水脱落细胞中Grp78表达作为肺癌鉴别

9、诊断的一个辅助指标的可能性.】材料与方法1_1样品36例肺癌疑似病人的胸水均来者本钢胸科医院肿瘤科,32例胸膜炎病人的胸水均来自本钢胸科医院结核内科.1.2样品的处理将胸水5000g离心3rain,收集细胞,PBS漂洗3次,向沉淀中加入500LRIPA缓冲液,混匀,置于冰上作用30rain,12000g离心10min,将上清移人一个干净的EP管中.另取少量沉淀涂片,3.7%多聚甲醛固定,HE染色进行形态学检查.1.3蛋白质定量取细胞裂解液2L加入去离子水3L,考马斯亮蓝3mL,标准管加人蛋白标准液2代替细胞裂解液.对照管用2tzLRIPA缓冲液代替细胞裂解液,应用分光光度计与575nm读取吸光

10、度值,计算细胞裂解液中蛋白质浓度.蛋白质浓度=(A测定一A对照/A标准一A对照)标准液蛋白质浓度.1.4WesternBlot取相当5Og蛋白质的细胞裂解液上样于10%的SDSPAGE,电泳至溴酚蓝出胶,然后将蛋白质转印的用甲醇浸透的PVDF膜上,5%脱脂奶粉封闭过夜,然后加入一抗(山羊抗小鼠Grp78IgG,山羊抗小鼠ActinIgG)杂交2h,二抗杂交1h,ECL显色.用凝胶分析系统测定Gp78和Acfin的灰度值,并计算二者比值,作为Grp78表达的相对量.1.5统计学分析应用t检验对炎性胸水和癌性胸水中Grp78表达水平进行比较;应用检验比较两种检查方法的灵敏度及特异性.2结果2.1W

11、B检测应用WesternBlot技术分别检测癌性胸水及炎性胸水脱落细胞中Grp78的表达水平,结果发现癌性胸水中Grp78的表达量明显高于炎性胸水,这表明胸腔积液脱落细胞中Grp78表达水平可用于癌性胸水与炎性胸水的鉴别诊断.炎性胸水癌性胸水上图为Grp78的表达情况,下图为actin的表达情况图1WB检测癌性胸水及炎性胸水中脱落细胞的Grp78的表达水平表1癌性胸水与炎性胸水中Grp78表达水平经统计学检验分析表明,癌性胸水脱落细胞中中Grp78表达水平明显高于炎性胸水.2.2两种方法对肺癌的鉴别诊断与传统的脱落细胞学检查方法相比,应用WesternBlot技术分别检测癌性胸水中Grp78的

12、表达水平可以提高胸水脱落细胞学检查的灵敏度,这些进一步证明胸腔积液脱落细胞中Grp78表达水平可用于癌性胸水与炎性胸水的鉴别诊断.如表2所示,在36例肺癌疑似病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测,结果发现其中2l例Grp78表达水平较高,15例表达水平较低.在Grp78高表达的病例中有l9例被临床确诊为肺癌,灵敏度为90%.特异度为85.7%.应用传统的形态学检查36例肺癌疑似病人胸水脱落细胞,有12例被诊断为肺癌,其中8例临床确诊为肺癌,灵敏度为42%,特异度为85%,经统计学检验分析新方法的灵敏度明显高于形态学检查,特异度没有差别.表2两种方法进行肺癌鉴别诊断的结果对比3讨论肺癌

13、在我国发病率以及病死率高,严重威胁人们的生命,胸水是肺癌的一个重要临床表现j,因此,胸水脱落细胞学检查是肺癌的诊断与鉴别诊断的一个重要环节.但传统的脱落细胞学检查过多依赖于操作者的业务能力,灵敏度低,尤其难以区(下转第532页)532辽宁医学院2008年12月,29(6)管炎常累及的部位为皮肤,胃肠道,关节和肾脏,以胃肠道症状为突出时称为腹型过敏性紫癜.胃肠道的病理改变:黏膜散在大小不等的猩红热样的出血点,重者可见散在的鲜红或暗红的淤斑及黏膜下血肿,黏膜呈不同程度的充血,水肿,糜烂,大小深浅不一的溃疡,黏膜较脆,触之易出血,病变间黏膜正常.胃,小肠和结肠均可受累,但以十二指肠降段,球部,回肠末

14、段,回盲部和升结肠黏膜病理改变最严重,食管黏膜很少受累.由于腹型紫癜患者临床表现出的恶心,呕吐,便血,绞痛等症状缺乏特异性,并且皮肤紫癜出现晚于腹部症状,所以极易误诊.本组病人误诊的主要原因为:医生对腹型紫癜的症状特点认识不足.询问病史不仔细,未仔细询问患者发病前是否服用某些药物,是否进食海鲜等食物等.为降低该病的误诊率,早期做出诊断,改善疾病预后,我们建议在诊断消化系统疾病之前一定要提高警惕,应想到过敏性紫癜,仔细研究病情,做相关查体.以几点有助于诊断:过敏性紫癜多发生于儿童,青少年,常有过敏史.过敏性紫癜腹痛虽可有局部压痛,但大部分无肌紧张.过敏性紫癜多伴有腹泻,腹痛前1至7d多有皮疹史.

15、过敏性紫癜多体温正常或体温轻度增高.白细胞计数多正常或轻度增高,大便潜血多阳性.详细观察内科治疗过程中病情变化,警惕腹痛程度及性质的突然变化并全面细致的体格检查,如发现细小的皮肤紫癜则具有确诊的意义.腹型过敏性紫癜单纯使用抑酸剂,黏膜保护剂,解痉剂,治疗效果不佳.如确诊为过敏性紫癜,必须应用肾上腺糖皮质激素治疗,应用肾上腺糖皮质激素能迅速止血,缓解腹痛,预防穿孔.而一般合并上消化道出血与腹痛的消化系疾病(如急性胃黏膜病变,消化性溃疡和急性胰腺炎等),肾上腺糖皮质激素治疗则属禁忌.由于消化系统本身的疾病与腹型过敏性紫癜的治疗不同,因此明确诊断十分必要,可正确指导临床治疗.参考文献:1杨崇美,孙艳

16、.腹型过敏性紫癜32例临床分析J.中国实用内科杂志,2005,25(11):10311032.2王晓东,王盂春,孙思予,等.过敏性紫癜的胃镜表现J.医学理论与实践,2002,15(6):634635.3任万英,李华,赵丽婷.过敏性紫癜在内镜下的胃肠黏膜改变J.中华消化杂志,2002,22(4):250251.4姜凤元.腹型紫癜24例临床诊治体会J.中华医学全科杂志,2003,2(1):21.收稿日期:20080916(上接第510页)分肺癌和炎性增生,因此,提高检测的灵敏度和客观性是非常必要的.Grp(glucoseregulatedprotein)78是内质网合成的分子伴侣,近年来的研究表明

17、,在分化程度不同的细胞中Grp78表达的水平不同,在分化程度低的细胞中其表达水平较高而在分化程度高的细胞中其表达水平较低J5.本研究36例肺癌疑似病人胸水脱落细胞中Grp78的表达水平进行检测,以期明确Grp78作为肺癌早期诊断的一个客观指标的可能性.我们的研究表明,癌性胸水脱落细胞中Grp78的表达水平明显高于炎性胸水.与形态学检查相比,应用WestemBlot技术检测胸水中Grp78表达水平应用于肺癌的诊断和鉴别诊断灵敏度高,特异性差别不大.这些表明,胸水脱落细胞中Grp78表达水平是反映细胞增殖程度的一个指标,可以应用于肺癌的诊断与鉴别诊断.参考文献:1袁帅,张煜和.恶性胸/腹水的实验诊

18、断研究现状J.中国实验诊断学,2008,12(6):815817.LeeAS.GRP78inductionincancer:therapeuticandprognosticimplicationsJ.CancerRes,2007,67(8):34963499.FuY,LeeAS.Glucoseregulatedproteinsincancerprogression,drugresistanceandimmunotherapyJ.CancerBiolTher,2006,5(7):741744.YeungBH.KwanBW,HeQY,eta1.Glucoseregulatedprotein78a8anoveleffectorofBRCA1forinhibitingstressin-ducedapoptosisJ.Oncogene,2008,27(53):67826789.ZhengHC,TakahashiH,LiXH,etatOverexpressionofGRP78andGRP94aremarkersforaggressivebehaviorandpoorpregno-sisingastriceaYcinuma$J.HumPathol,2008