药物的体外抗菌试验

1、微生物与药学的关系v1.某些微生物可以生产药物（微生物制药）（微生物制药）v2.微生物可能会污染药品（药物的微生物检查）（药物的微生物检查）v3.某药物有能抑菌或是杀菌（药物的抗菌试验）（药物的抗菌试验）药物的体外抗菌药物的体外抗菌试验试验药物的体外抗菌试验药物的体外抗菌试验v用途：用途：v 抗菌药物的筛选、药物的抗菌谱测定及抗菌药物的筛选、药物的抗菌谱测定及临床药物敏感性试验等方面。临床药物敏感性试验等方面。 抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微生物，在药物除去后微生物又能生长；杀菌：即能杀死微生物，当药物除去后，微生物也不能再生长繁殖。两者并非绝对，只是在一定条件下相对而言。常用的体

2、外抑菌试验常用的体外抑菌试验 琼脂扩散法琼脂扩散法 滤纸片法滤纸片法v 挖沟法挖沟法 连续稀释法连续稀释法琼琼 脂脂 扩扩 散散 法法v原理：原理： 药物可以在琼脂培养基中自由扩散，形成一定浓度的含药药物可以在琼脂培养基中自由扩散，形成一定浓度的含药区域。区域。 由于各种微生物对不同药物或同一药物不同浓度的敏感性由于各种微生物对不同药物或同一药物不同浓度的敏感性不同，因而形成一定大小的不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离抑菌圈或抑菌距离，根据其大小，根据其大小，可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。 v滤纸片法：滤纸

3、片法：v 制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置制成含菌平板后，将滤纸片蘸取药液置于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。v用于用于新药的初筛及临床的药敏试验。新药的初筛及临床的药敏试验。 v挖沟法：挖沟法：v1、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种各种试验菌，沟内加入药液。各种试验菌，沟内加入药液。v2、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。

4、v适用于在一个平板上试验适用于在一个平板上试验一种药物对几种不一种药物对几种不同试验菌同试验菌的抗菌作用。的抗菌作用。v 琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一般能用于般能用于定性或初步判断其作用的强弱定性或初步判断其作用的强弱。v 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用定量方法定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较，较琼脂扩散法精确，因而运用较普遍普遍 。 连续稀释法v可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。可以用液体培养基液体培养基

5、，也可用固体培养基固体培养基。v凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该药的药的最低抑菌浓度最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。）。 v以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为以培养后无细菌生长的最高药物稀释度为最最小杀菌浓度小杀菌浓度（Minimal bactericidal concentration，MBC）。）。 液体连续稀释法液体连续稀释法v1、在一系列的试管中用液体培养基将试验药在一系列的试管中用液体培养基将试验药物作连续对倍稀释，使药物的浓度沿试管顺物作连续对倍稀释，使药物的浓度沿试管顺序成倍

6、递减。序成倍递减。v2、再于各管中加入等量的实验菌，经、再于各管中加入等量的实验菌，经 1624 h培养后，与阴性及阳性对照管进行对照培养后，与阴性及阳性对照管进行对照观察。观察。 v3、将未长细菌的培养液取出，分别转种琼脂、将未长细菌的培养液取出，分别转种琼脂平皿。如培养后重新长出试验菌，说明该药平皿。如培养后重新长出试验菌，说明该药仅有抑菌作用。如无菌生长则可以认为该药仅有抑菌作用。如无菌生长则可以认为该药物有杀菌作用。物有杀菌作用。 联合抗菌试验 在药学中，常需要检查两种抗菌药物在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不同PH值或不同离子溶液的相互影响。 加强药物抗菌作用的为协同（syner

7、gism）； 减弱药物作用的为拮抗（antagonism）； 互相无影响的为无关（indifference）； 作用二者之和为累加（addition）。 联合抗菌试验的常用方法 一、纸条试验（paper strip test） 即在已接种实验菌的平板表面垂直放置两条浸有一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或无影响来判断它们在联合应用时的效应。 图20-2是纸条实验的示意图。 图20-2是纸条实验的示意图。图中A列的两纸条中只有一条含有抗菌药物，另一条不含抗菌药物；B列的两纸条均含有抗菌药物。 二、棋盘格法（check board test） 是由于在试验时,含两种不同浓度药物的试管排

8、列呈棋盘状而得名,用以评价两种药物同时用不同浓度进行联合试验时的抗菌活性。实验时排列6排试管，每排6管，共36管使成方块，A及B药各以液体培养基进行稀释，A药各稀释度纵行定量加入各管，B药各稀释定量按横排加入，两药同时作单独抗菌实验对照。然后加入定量菌液，经培养后观察结果。抗菌试验的影响因素抗菌试验的影响因素v1、试验菌：、试验菌：v用专门的供应机构提供的用专门的供应机构提供的标准菌株标准菌株。v北京卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中北京卫生部药品生物制品检定所菌种保藏中心。心。v试验菌应合理保藏，用前加以纯化及生物学试验菌应合理保藏，用前加以纯化及生物学特征鉴定。特征鉴定。v所用的试验菌株应

9、处于所用的试验菌株应处于对数生长期对数生长期，因此期，因此期的微生物对外界因素变化最敏感。的微生物对外界因素变化最敏感。v试验结果的灵敏度在一定程度上与试验结果的灵敏度在一定程度上与试验菌的试验菌的接种量接种量成反比关系，故应选用适宜的接种量。成反比关系，故应选用适宜的接种量。 抗菌试验的影响因素抗菌试验的影响因素2、培养基、培养基 v抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制，如链球抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制，如链球菌常用含血清的肉汤培养基，抗真菌药物试验需用菌常用含血清的肉汤培养基，抗真菌药物试验需用沙氏培养基。沙氏培养基。v培养基的酸碱度、电解质、还原性物质等均可影响培养基的酸碱度、

10、电解质、还原性物质等均可影响试验结果，实验时应尽可能排除各种影响实验结果试验结果，实验时应尽可能排除各种影响实验结果因素的掺入。因素的掺入。v经无菌检查合格。经无菌检查合格。 抗菌试验的影响因素抗菌试验的影响因素3、抗菌药物、抗菌药物 v 药物的浓度、药物的浓度、pH及含有的其他成分均可及含有的其他成分均可影响试验结果，特别是中草药制剂往往含有影响试验结果，特别是中草药制剂往往含有色素、杂质和鞣质等，这些均可造成错误结色素、杂质和鞣质等，这些均可造成错误结果，应加注意。果，应加注意。 抗菌试验的影响因素抗菌试验的影响因素4、对照试验：、对照试验：v 为精确判断实验结果，试验时应设各种对为精确判断实验结果，试验时应设各种对照，包括试验