传染病样品采集方法

1、1/ 9样品采集、标本采集对象1、预警病例：2、医学观察病例、疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究地确诊病 例。3、其他需要进行诊断或排除者。4、需要采集地环境标本。二、标本采集要求1、从事标本采集地技术人员必须经过生物安全培训和具备相应地实验技 能。在标本采集过程中，采集人员必须采取相应生物安全防护。2、住院病例地标本由所在医院医护人员在当地疾控机构专业人员地指导下 采集。（人感染高致病禽流感标本采集技术方案）3、标本采集详尽种类和数量由现场工作组确定。4、密切接触者标本由当地疾控机构负责采集。5、结果不好判断时，结合病程再次采样。三、标本采集种类1、上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽

2、抽取物、咽漱液、深咳痰 液、最佳采集时间为发病后 3 天内。2、下呼吸道标本；包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本。3、尸检标本：病人死后应依法尽早进行解剖，在严格按照生物安全防护地条件 下进行尸检，主要采集肺、气管组织标本、条件允许下也可采集肝、肾、脾、 脑、淋巴结等组织标本。4、血清标本：每一病例必须采集血清标本。须采集急性期、恢复期双份血 清。第一份血清应尽早（最佳在发病后 7 天内）采集，第二份血清应在发病后 第 34 周采集。采集量要求 5ml ，以空腹血为佳，建议使用真空采血管。2/ 95、其他标本：如果病例由腹泻症状，可采集粪便标本：有胸水者可采集胸 水标本。淤血点等。

3、四、标本采集方法1、咽拭子：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含45ml采样液地管中，尾部弃去，旋紧管盖。注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作 量。2、鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入 4 5ml 采样液中，尾部弃去，旋紧管盖。3、鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘 液或从气管抽取呼吸道分泌物。先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压， 旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用 3ml 采样液涮洗收集器 1 次4、咽漱液：用10ml不含抗菌素的采样液漱口，漱口时让患

4、者头部微后仰， 发“噢声 ”，让洗液在咽部转动。然后，将咽漱液收集于 50ml 无菌的螺口塑料管 中。无条件可用平皿或烧杯收集咽漱液并转入10ml螺口采样管中。注：取鼻洗液和漱口液时，需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史，如有 洗液和含漱液中不应含有抗菌素。5、 深咳痰液：要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于50ml含3ml采样液 的螺口塑料管中。6、 呼吸道灌洗液：将收集器头部从鼻口处插入气管（约30cm）深处，注 入 5ml 生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液， 并用采集液涮洗收集器 1 次。7、胸水：在B超定位下进行胸腔穿刺，抽取胸水 5ml，置于无菌的塑料口 管中

5、。8、肺组织活检标本：在超声或 X 线定位下，经皮穿刺取肺组织活检标本， 置于含 3ml 采样液的塑料螺口管中。9、尸检标本：每一采部位分别使用例外消毒器械，以防交叉污染；每种组 3/ 9织应多部位取材，各部位应取 2050g,淋巴结取2个。10、 粪便标本：采取 5-10g 粪便置于含 5-10ml 采样液无菌螺口管中，严格 密封。11、 血清标本：用真空负压血管采集血液标本 5ml，室温静止30分钟， 1500-2000rpm 离心 10 分钟，收集血清于无菌螺口塑料管中。12、 淤血点：选病人皮肤上的新鲜淤斑或淤血点，消毒后用针头挑破，挤 出组织液，用无菌棉签蘸取先接种含双抗的葡萄糖增菌

6、肉汤管中增菌 812小时 后分离培养或直接接种EPV平板，再涂片染色直接镜检。涂片也可做免疫荧光 检查。13、尿液标本：取病人急性期尿液 5ml加20ml无水乙醇，置4C 2小时，离心（3000转/分钟， 15 分钟），弃上清，收集沉淀部分加 0.25ml 磷酸盐缓冲 液将其溶解，同前离心，吸取上清液检测脑膜炎奈瑟氏菌（Nm）群起义抗原麻疹、风疹：取病人急性期尿液 5-10ml 于无菌螺口塑料管中。14、 脑脊液（CSF）如果怀疑为脑膜炎，CSF是用于分离和鉴定病原体最佳的 标本。取患者 CSF2-3m，l 注入无菌的试管内。 3000 转/分，离心 20 分钟，用无 菌吸管取沉淀物直接接种到

7、10%羊血巧克力色琼脂平皿上做细菌培养。CSF沉渣 还可涂片，作革兰氏染色镜检。CSF离心后的上清液可置-20C，供做血清学检 查脑膜炎奈瑟氏菌（Nm）群起义性抗原。五、采样液1、普通肉汤2、ph7.47.6 的 Hanks3、5%水解乳蛋白液。为防止细菌和真菌生长，在采样液中需加入抗菌素，以往抗菌素多用青、链霉素（每毫升含青霉素1000单位.链霉素100微克），近来发现不少种类细菌对它们具有耐药性，故近来多用庆大霉素（其终浓度为每ml采样液中加入 0.1m1的lOmg/ml）水解乳蛋白5.0gNaCI0.85g加去离子水100ml高压灭菌后4度保存4 / 94、0.85%生理盐水六、标本运送

8、1、 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除分外情况外大凡不运送全血和 其他标本。2、应采用WHO提出的三级包装系统2.1第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上 应有明明的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的 周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品 分开放置。2.2第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装 若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处 理。2.3第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器 外面要贴标签（数量，收、发件人）。3、血清和血浆样品

9、应在2 8 C条件下由专人运送。用于 CD4/CD8T淋巴细胞测定的样品应在室温下 18 23 C运送。每一包装的体积以不超 过50ml为宜。4、运送感染性材料必须有记录。+七、样品接收1 含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训 的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。2 核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚 存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。3 检查样品的状况，记录有无危机溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等 5/ 9情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将 样品情况立即通

10、知送样人。4 打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅 出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。5、接收样品时应填写样品接收单。八、拒收样品1、危机溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况2、样品破碎、样品溢出的情况3、没按要求进行样品包装三层保护的情况4、样品姓名、编号脱落，含混的情况5、无送检单，有送检单没领导签字和公章的情况九、样品保存1、标本应在低温下，24小时内运送至实验室。标本至实验室后，病毒分离 标本应尽快进行接种分离，48h内能进行接种的可置于4C保存，如未能接种应 置70C或以下保存。2、血清标本可在4C存放一周，

11、长期保存置20 “C或以下。3、试验前血清标本以56C 30分钟处理，去除非起义性物质及补体4、 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20C以下，进行病 毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80C。5、用于CD4/CD8T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。在室温下（18 23C ）保存和运输样品，避免极端温度（冷冻或过热）。 超过37C的温度会破坏细胞，对血液学和流式细胞仪的检测有影响。天气热 6 / 9时，需要用一个隔热的容器装样品，并且把这个容器放于+另一个有冰袋和吸热物质的容器中。这种方法有助样品的保存。CD4 禾口 CD8T淋巴细胞样品

12、采集、运输和接收+1样品的米集1.1选择适合的抗凝剂，分别用于血液学检测和流式细胞仪的免疫表型检 测。1.1.1用于血液学检测的抗凝剂（1）EDTA（ 1.5 士 0.15mg/m血液）。（2） 在血球分析仪生产商允许的时间范围内检测，不超过 30h，不检测超 出抗凝时间范围的样品。1.1.2用于流式细胞仪免疫表型检测的抗凝剂（1）用 K3EDTA抗凝，收集样品应在30h以内，尽早（8h以内）处理。（2）用ACD或肝素抗凝，收集样品在48h以内，尽早（8h以内）处理。1.2静脉采血收集血样，将血液注入一个事先加入合适抗凝剂的试管（有条 件者最佳用真空试管）。7 / 91.2.1当收集儿童样品时

13、，采用儿童用注射器、小试管。122采血后立即握住试管两端，颠倒混匀数次，将血液与抗凝剂混匀，以 防止凝固。1.3准备合适数量的样品管1.3.1当同一样品的血球检测和流式细胞仪免疫表型检测在同一个实验室内 进行时，用1个装有K3EDTA的试管即可。1.3.2在所有其它条件下用2个试管（用K3EDTA作血球检测，用K3EDTA ACD或肝素作流式细胞仪免疫表型检测）。1.4对所有样品编号，并写明日期和收集时间。2样品运输2.1在室温下（18 23C ）保存和运输样品，避免极端温度（冷冻或过 热）。超过37C的温度会破坏细胞，对血液学和流式细胞仪的检测有影响。天 气热时，需要用一个隔热的容器装样品，

14、并且把这个容器放于另一个有冰袋和 吸热物质的容器中。这种方法有助样品的保存。2.2尽可能快地将样品送至免疫表型检测实验室。2.3如需运送样品到其它地点时，应将装样品的试管放于一个防漏的容器 中，并将此容器放于一个装有充塞的吸水性物质的纸罐中，以防止震动并可吸 收所有因试管破裂漏出的血液。盖紧纸罐，用橡皮带系紧。2.4应选择特定的方案，并且安排适合的时间收集和运输样品。3样品接收3.1样品到达以后立即检查试管及其所装的血样。3.2如有以下现象发生，采取正确的方法处理：8/ 93.2.1 如果样品较热或较冷，但没有明明的溶血或结冰，可以处理样品，但 要在工作表的报告上注明温度条件。不要马上加热和冷

15、冻样品以使其达到室 温，因为这样会对免疫表型检测的结果产生晦气的影响，散射光模式的不正常 会显示出所受到的影响。3.2.2 不可检测溶血或结冰的样品。3.2.3 不可检测凝血的样品。324如果样品的采集时间已超出48h，不可检测。流脑标本采集1、脑脊液（CSF）如果怀疑为脑膜炎，CSF是用于分离和鉴定病原体最佳的 标本。取患者 CSF2-3m，l 注入无菌的试管内。 3000转/分，离心 20 分钟，用无 菌吸管取沉淀物直接接种到10%羊血巧克力色琼脂平皿上做细菌培养。CSF沉渣 还可涂片，作革兰氏染色镜检。CSF离心后的上清液可置-20C，供做血清学检 查脑膜炎奈瑟氏菌（Nm）群起义性抗原。

16、2、 血液：疾病早期，病人高热时采取静脉血57ml，往盛有50ml葡萄糖 肉汤的三角瓶内注入35ml血做增菌培养。留2ml血注入无菌试管内分离血 清，做血清学检查脑膜炎奈瑟氏菌（Nm）群起义抗原和急性期抗体。在病人病 后1-3周采取第二次血液2ml，注入无菌试管内分离血清，检查病人恢复期抗 体。若恢复期抗体的滴度比急性期升高 4倍或 4倍以上，具有追溯诊断的意义。3、淤血点：选病人皮肤上的新鲜淤斑或淤血点，消毒后用针头挑破，挤出 组织液，用无菌棉签蘸取先接种含双抗的葡萄糖增菌肉汤管中增菌 812小时后 分离培养或直接接种EPV平板，再涂片染色直接镜检。涂片也可做免疫荧光检查。4、鼻咽拭子：对康健人群或病人密切接触者进行带菌检验时大凡采咽拭子。咽拭子直接接种到 10%巧克力色双抗血琼脂平皿或卵黄双抗琼脂平皿上分 离Nm。咽拭子也可以插入卵黄双抗液体培养基或双抗兔血清肉汤中37C ,5%CO2增菌后再分离。9/ 95、尿液标本：取病人急性期尿液 5ml加20ml无水乙醇，置4C2小时，离 心（3000转/分钟， 15 分钟），弃上清，收集沉淀部分加 0.25ml 磷酸盐缓冲液 将其溶解，同前离心，吸取上清液检测脑膜炎