病理技术专业知识

1、（一）单纯固定液 甲醛：1. 浓度：40%气体2. 渗透力强，固定均匀，组织收缩小，3. 不能使白蛋白和核蛋白沉淀4. 保存脂类，必须用冷冻切片。是糖的保护剂 5可固定高尔基体，线粒体重铬酸钾1. 浓度：1%-3%水溶液，有毒，橘红色结晶2. 穿透速度快，几乎不收缩，经乙醇脱水后明显收缩，3. 未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀，但可使蛋白质变为脂溶剂。 酸化后可使蛋白质沉淀，此时染色体可被保存，但线粒体破坏。4. 固定高尔基体和线粒体有良好效果。5. 酸性染料着色好，碱性染料着色差6. 固定的组织需经流水冲洗12-24h，或用亚硫酸盐洗涤。苦味酸1. 黄色结晶体，是一种强酸，易燃易爆，配成饱和

2、溶液储藏2. 穿透慢，组织收缩明显，无明显硬化。3. 能沉淀一切蛋白质4对脂肪和类脂无固定作用。5. 可软化皮肤和火棉胶，不宜用火棉胶包埋6. 固定时间不宜超过24h，7. 固定的组织应尽快放入 70%L醇，滴加饱和碳酸锂或浓氨水，有助于除去苦 味酸固定产生的黄色。升汞1. 浓度为5%-7%勺水溶液，针状结晶2穿透力低，只宜固定薄片组织，单独应用组织收缩明显3. 对蛋白质有固定作用，4. 对类脂和糖类无固定作用5. 临用时加冰醋酸 醋酸1. 刺激性气味的无色液体，低于15C为冰醋酸5%勺醋酸PH为2-8，可抑制细菌和酶的活性，可防止自溶。2. 穿透力强3不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白4

3、不能固定脂肪和内酯，不能保存糖5. 固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸，可较好的保存染色体6, 缺点是组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白铬酸1. 为三氧化铬的水溶液，浓度 %-1%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2 穿透力弱，一般组织需固定 12-24h ，固定的组织有收缩，3 能沉淀蛋白质，核蛋白固定良好。4 对脂肪无固定作用6.7.5 固定线粒体和高尔基复合体 宜避光保存，以防蛋白质溶解。必须彻底流水冲洗（A 24h）。四氧化锇）锇酸1. 淡黄色结晶， 剧毒，浓度1%-2%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2. 渗透力极弱，易使组织变硬， 延长固定时间， 组织的脆性增加，

4、对染色不利 。3. 固定均匀，不沉淀蛋白质。4为脂类固定剂6.7.8.9.5. 适用于线粒体和内质网的固定 为电镜研究的必须固定剂。 固定目的不同，配方和浓度根据需要改变 固定后对碱性染料亲和力强，细胞核的染色效果好 应在临用前前几天配制以保证充分溶解。丙酮1易挥发，易燃的无色液体，可与水，醇，氯仿，醚混合2. 渗透力强，对核的固定差3. 可使蛋白质沉淀4. 作用基本与乙醇相同，但对糖原无固定作用5广泛用于酶组织化学中各种酶的固定乙醇1. 无色液体，还原剂，可与水无限相溶，有固定兼脱水作用用于固定的浓度为 80%-95%2渗透力弱，固定速度较慢，易使组织变脆，无水乙醇固定时，穿透速度快， 渗透

5、力差，使组织收缩3. ，能沉淀白蛋白，球蛋白，核蛋白4. 用于糖原的固定5. 50%以上乙醇可溶解脂肪和类脂体， 并可溶解血红蛋白， 对其他色素也有破坏。三氯醋酸1. 为无色易潮解的结晶体，水溶液为强酸性，易溶于醇和醚，应密封保存2. 也是一种良好的脱钙剂二）混合固定液B-5 固定液（醋酸钠 -升汞 -甲醛）1 多用于固定淋巴组织，2. 染色前应进行脱汞处理3. 配方：无水醋酸钠，升汞6g，甲醛10ml，蒸馏水90ml.Bouin 液1. 有一定毒性 ，应避免吸入或与皮肤接触2. 固定液偏酸，对抗原有一定损害，使组织收缩， 不适宜标本的长期保存3. 固定效果好，组织细胞结构完整。 细胞核着色鲜

6、明，细胞质着色较差。4. 对脂肪固定效果好，尤适用于含脂肪的淋巴结，乳腺组织和脂肪瘤标本5. 适用于结缔组织染色，尤其是三色染色更为理想 。6. 配方：饱和苦味酸水溶液：甲醛水溶液：冰醋酸 =15： 5:： 1Carnoy 液1 有防止乙醇的硬化和收缩作用，增加渗透力，外膜致密的组织可用其固定2. 固定速度快，3mn厚组织块1h内即可固定，大块组织不超过 4h。3. 固定细胞质和细胞核，对于 染色体固定佳，显示DNA RNA效果好。4. 常用于糖原和尼氏体的固定5不能保存脂类，不适用脂肪染色。6. 配方：冰醋酸10ml，氯仿30ml，无水乙醇60mlMuller 液1. 作用缓慢，固定均匀，组

7、织收缩小2. 多用于媒染和硬化神经组织3. 固定过程中，需常更换新鲜的液体4. 配方：重铬酸钾，硫酸钠，蒸馏水 100mlOrth 液1. 渗透力强，组织收缩小2. 应临时配置，在暗处固定 ，固定 24h 左右，固定液变为黑色时不可用，固定后流水冲洗 12-24h。3. 固定胚胎组织，神经组织。脂肪组织PFG液 1.2.3.4. 配方：重铬酸钾，硫酸钠，蒸馏水 100ml，37%-40喲甲醛10ml （用时加入） 适用于多种肽类抗原的固定，多用于免疫电镜研究 对细胞抗原性和结构保存好配方：对苯醌20g，多聚甲醛15g, 25%戊二醛40ml，L二甲砷酸钠缓冲液1000ml。PLP和 PLPD液

8、1. 均含过碘酸盐2. 对细胞抗原性和结构保存好,适用于富含糖类组织的固定Rossman液1. 对糖原固定好 ,固定 12-24h ,2. 配方：无水乙醇苦味酸饱和液用 95%的乙醇洗90ml,甲醛 10mlZenker 液1 用于固定多种组织,对于病毒包涵体固定效果也较好2. 使细胞核和细胞质染色清晰,常用于三色染色, 对免疫球蛋白染色最好3. 不适用含血量较多的标本 ,如充血的脾脏和肺梗死等标本4. 不能用金属容器盛放,且固定后不能用金属镊夹取。4%多聚甲醛 L 磷酸缓冲液1. 适用于光镜免疫组织化学法,2. 动物先用此液灌注固定,取材后再用该液浸泡固定3. 可用于标本的较长时间的保存4%

9、多聚甲醛 -磷酸二钠 /氢氧化钠1. 适用于光镜和电镜免疫组织化学法,2. 用于免疫电镜时,应加入新鲜配置的戊二醛。使其终浓度为 %3. 性质温和,可长期保存组织。4. 配置后PH值应调至4保存甲醛 - 钙液. 适用于固定脂肪组织和组织化学染色乙醇-甲醛液有脱水作用,对皮下组织中肥大细胞的固定好乙醚- 乙醇液渗透性强,固定效果好,用于细胞涂片的固定。去除甲醛色素： Verocay 液 脱汞盐结晶： 脱黑色素： 蓝化作用：Lugol 液% 高锰酸钾稀氨水组织的脱水一）乙醇 乙醇脱水的浓度： 70% 80%90%95% 100% 进行糖原和尿酸盐结晶染色的标本应直接用无水乙醇固定， 更换一次无水乙

10、醇脱水即可。（二）丙酮 与乙醇作用相似，但对组织块的收缩作用比乙醇更严重，快速脱水或固定 兼脱水时应用，脱水时间为 1-3h.丙酮可作为染色后的脱水剂，用于 DNA和RNA染色。（三）异丙醇是乙醇的良好替代品， 不含水， 可代替无水乙醇使用， 对火棉胶和染料不溶， 因此不能用于火棉胶包埋和染料配制。（四）正丁醇和叔丁醇 （电镜标本制作时常用作中间脱水剂。 ） 正丁醇：无色液体，脱水能力较弱，可与水，乙醇和石蜡混合，因此，这种这种脱水的组织块可直接浸蜡包埋，叔丁醇：无毒， 可与水，乙醇和二甲苯混合，与正丁醇相比，它不易使组 织收缩或变硬，而且脱水后可不经透明直接浸蜡，（五）还氧已环 还氧已环能于

11、水和乙醇混合，也能溶解石蜡，可代替乙醇进行脱水，也可代替二甲苯进行透明，不引起组织收缩和硬化， 用于制备植物标本较好， 易挥 发，价格昂贵。（六）四氢呋喃 易于水，乙醇，丙醇和苯类混溶，对组织渗透快，易挥发，无毒， 可用作封 片溶剂，对染料不溶。（七）环己酮环己酮无毒， 与苯，二甲苯，氯仿和石蜡混合，可代替无水乙醇脱水后直 接浸蜡，组织块不会变硬。（八）松脂醇 可取代无水乙醇用作脱水剂和随后的浸透与包埋。显示胶原纤维，网状纤维， 胶原纤维：红 ， 网状纤维：黑，树脂包埋法适用于：不脱钙骨髓活检组织，肝、肾穿刺活检和淋巴结组织等一 结缔组织染色Mallory 三色Masson胶原纤维，网状纤维蓝

12、色绿色软骨，粘液，淀粉样淡蓝色神经胶质纤维，肌纤维红色红色髓鞘，红细胞橘红色橘红色常用的特殊染色技术三色弹性纤维三联染色弹性纤维：绿色 肌肉和红细胞：淡黄色 二 胶原纤维染色（一） 显示胶原纤维，细胞，肌肉的染色法Victoria blue（2 结果： 胶原纤维： 细胞核和血细胞： 肌肉：3 注意事项： ：Ponceau染色后。不能与水接触，直接用无水乙醇冲洗脱水1试剂：Ponceau（丽春红）染色液：丽春红水溶液 10-15ml, 苦味酸饱和水溶液 85-90ml 维多利亚蓝 ） ：维多利亚蓝， 70%乙醇 红， 绿色 黄色 ：胶原纤维切片的厚度需6um, : Victoria blue染色

13、液应盛染色缸内，进行染色。（二）天狼星红苦味酸染色法1.试剂：天狼星红饱和苦味酸液：%天狼星红10ml，苦味酸饱和水溶液,90ml2 结果： 胶原纤维： 细胞核和血细胞： 其他：3 注意事项： ：细胞核复染可以用Harris 苏木精淡染天青石蓝液：天青石兰，铁明矾，蒸馏水，甘油，浓盐酸 红， 绿色 黄色 ：必须用偏光显微镜观察 网状纤维染色（一）Gomori 银染色法黑色红，黄色1. 结果：网状纤维： 胶原纤维： 背景：3 注意事项： 氨性银溶液：必须器皿洗干净，滴加氨水不能过量，冰箱保存 氧化液存放时间不能过长，以免失去氧化作用 丽春红复染用滴染方便，无水乙醇冲洗要倾斜黑色 红， 淡黄色（二

14、）James染色法1. 结果：网状纤维： 胶原纤维： 背景：3 注意事项： 5%硝酸银使用时不能滴染 二氨银配制时，氨水要一滴一滴的加，以免浓氨水加的太多 甲醛液要新配制四：弹性纤维染色 （一）维多利亚蓝染色结果： 弹力纤维： 蓝色细胞核： 红色注意事项：配制的溶液放置 2 周成熟后使用 （二） Gomori 醛复红染色法1 试剂：醛复红染液：碱性复红，浓盐酸1ml, 70聽醇100ml，三聚乙醛1ml 室温下静置 1-2 日，待变为紫色即成熟，于冰箱保存备用 。橘黄G染液：2：对特殊的蛋白质及含硫酸根的粘多糖有很强的亲和力， 和弹力纤维结合很紧。 对肥大细胞颗粒，脂褐素，HBsAg，胃主细胞

15、，胰岛的P细胞，脑垂体的嗜碱 性细胞 也能很好着色。3固定液：以甲醛生理盐水固定的染色效果最佳。结果 ：弹力纤维 深紫色粘液 紫色蓝绿色 红色 淡黄色五 显示弹性，胶原纤维的双重组合染色 结果：弹力纤维： 胶原纤维： 背景： 注意事项：维多利亚蓝液可每次反复使用，溶液在室温中保存可用数年PTAH） 蓝色 黄色或玫瑰红色 紫蓝色或 棕黄色六 肌肉组织染色 （一）横纹肌组织染色 Mallory 磷钨酸苏木精染色法（1. 结果： 横纹肌 胶原纤维，网状纤维： 心肌（缺血缺氧）：2注意事项： .此液经阳光处理数周后至数月才成熟，置冰箱内保存可使用多年时间。 .可加入高锰酸钾，加快促使成熟 95%乙醇分

16、化时应注意在切片上保留一定的红色，然后用无水乙醇快速脱 水，冷风稍干燥后封固。早期心肌病变组织染色红色 黄色或黄棕色蓝色（一） NagarOlsen 结果： 缺氧心肌，红细胞 正常心肌 细胞核（二）Poley 显示缺氧心肌染色法 结果： 缺氧心肌红色胞核紫色其他：绿色红色蓝色七：糖类染色 糖原染色：过碘酸 -Schiff（PAS） 染色法 1结果：糖原及其他PAS反应阳性物质细胞核2. 注意事项： 过碘酸是一种氧化剂 染色前将 Schiff 试剂取出后，适应室温后再进行染色 八粘液物质（粘多糖）染色 中性粘多糖多见于：胃粘膜的表面上皮，十二指肠腺，颌下腺，前列腺上皮，结 肠的杯状细胞。强硫酸化

17、粘多糖多见于：皮肤，动脉和肺、软骨、角膜及肥大细胞 弱硫酸化粘多糖多见于：颌下腺、结肠、气管、支气管的杯状细胞 粘液物染色用于：肿瘤方面的胃癌，粘液瘤和粘液肉瘤，软骨粘液样纤维瘤、横 纹肌肉瘤、动脉粥样硬化和胶原病及慢性胃炎的肠化（一） Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS染色法1 结果：红色蓝色中性粘液物质 酸性粘液物质混合性粘液物质 紫红色2 注意事项： 切片中不能涂白胶或火棉胶Schiff 试剂保存于冰箱中备用，滴染法，用过的不能回收使用。 阿尔辛蓝染色 30 分钟，或更长二）Schiff 阿尔辛蓝地衣红染色法蓝色棕色时间不能长。1 结果： 胃粘膜肠化生上皮和胃肠肿瘤的酸性粘多糖：

18、中性粘多糖：2. 注意事项： 高锰酸钾氧化液必须新配制使用 地衣红染色液冰箱保存，可反复使用 地衣红染色时间 4h, 阿尔辛蓝染色 5 分钟， 九 黑色素染色黑色素见于：恶性黑色素瘤，淋巴结肿瘤，色素性神经瘤，皮肤性淋巴结炎， 皮肤异色病，红斑狼疮，扁平苔藓，神经性黑色素病变，假性黑变病色素的 大肠，阑尾，小肠黑色红色 浅黄色（一） Masson Fontana 黑色素浸银染色法 结果：黑色素及嗜银细胞颗粒 胶原纤维 背景（二） Lillie 亚铁染色法结果： 黑色素暗绿色背景浅绿肌纤维和背景注意事项：硫酸亚铁和铁氰化钾染色液需临用时配制，不能存放, 也可使含铁血黄素呈阳性，可用结合铁反应法来

19、鉴别黄色十含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士南）反应显示三价铁结果：含铁血黄素蓝色其他组织 浅红色注意事项：器皿应洁净，操作中避免与铁接触，洗涤需用蒸馏水陈旧标本染色效果不好，必要时可用 高锰酸钾处理切片20-60分钟，再 用草酸漂白。组织固定不能使用酸性固定液。t三氯醋酸染色方法 结果：胆色素 绿色其他复染的红色或黄色注意事项：不适用的固定液：Helly , Zenker等含铬固定液胆色素染色:纤维蛋白染色（一） MSB染色法（马休黄猩红蓝法） 结果：纤维蛋白 陈旧性纤维蛋白 细胞核 红细胞红色 紫色 蓝色黄色注意事项：可以使用Masson三色法进行对照染色 亮结晶猩红6R染料可用酸

20、性复红代替。（二） Gram甲紫染色法 结果：纤维蛋白蓝黑色，背景 红色淀粉样物质染色（一）刚果红染色法 结果：淀粉样物质：细胞核注意事项：红色蓝色苏木精染色的细胞核不能深淀粉样物质可以结合偏光的方法得到良好的效果，其色彩呈绿色双折光性。无水乙醇有脱色作用，脱水后即用冷风干燥，再透明封固（二） Jurgens甲紫染色法:结果：淀粉样物质 红色或紫红色细胞核蓝色真菌染色一）Grocott 六胺银染色 结果： 菌丝和孢子细胞核 背景二）高碘酸复红染色法结果： 真菌 紫红色，黑褐色，红色 淡绿色红细胞 浅黄色细菌染色一 Gram 碱性复红结晶紫染色法： 结果： G+蓝色G ,细胞核 红色， 注意事项

21、：苯胺油苯酚复红液是一种不稳定的混合液，染色液表面易产生氧化结晶，染色应适当加热防止氧化物质污染切片。二甲苯苯胺油分化后，必须用二甲苯洗除结晶紫溶于乙醇，草酸铵溶于蒸馏水二 Ziehl Neelsen 抗酸杆菌染色法结果： 抗酸杆菌 红色 背景 灰蓝色注意事项： 苯酚复红液，必须加温37C -40 C,时，秩序染色15-20分钟 亚甲蓝复染后用 95%乙醇快速分化，防止过度脱色三 Warthin starry 胃幽门螺杆菌染色法 结果：胃幽门螺杆菌呈棕黑色或黑色，背景淡黄色 注意事项：1%硝酸银液内1h左右（温箱56 C）四 螺旋体染色Giemsa染色法结果 螺旋体及细菌呈蓝到淡紫色 ，细胞质

22、呈蓝色，红细胞呈橘黄色注意事项：放入Giemsa染色工作液中需要8-18h或更长五 HBsAg 染色（一） Shikata 地衣红染色法结果：HBsAg阳性呈棕色注意事项 高锰酸钾须新配制地衣红染色液PH应为（二）醛复红改良染色法结果：HBsAg阳性呈紫色，结缔组织呈红色，红细胞及基质呈黄色 （三）维多利亚蓝染色法紫色 淡紫色 无色 （ 二） Einarson 棓酸青蓝染色法 结果： 尼氏小体 核 背景 （三）甲苯胺蓝染色法： 结果： 尼氏小体 核 背景 神经纤维染色方法扣结，老年斑染色方法 黑色 黑色 浅灰色结果：HBsAg阳性呈蓝绿色,细胞核红色 注意事项： 维多利亚蓝染液中需放置12-2

23、4h.神经组织染色 神经细胞尼氏小体染色法（一）焦油紫染色法 结果： 尼氏小体胶质细胞背景黑蓝，紫色 蓝色 浅灰色 深蓝色 淡蓝色 无色（一）Hol,mes 神经纤维染色方法结果：神经纤维黑色背景灰紫色（二）Bielschowsky 神经纤维染色结果：神经纤维黑色背景紫色（三）Von Braunmubl 神经纤维， 结果：神经纤维和扣结老年斑 背景（四）Eager 退变神经纤维的染色方法 结果：退变神经纤维背景 神经髓鞘染色方法（一）Weigert 髓鞘染色方法 结果：髓鞘 黑紫色，（二）Weil 髓鞘染色方法 结果：髓鞘 蓝黑色，（三）Kultshitzky 髓鞘染色方法 结果： 结果黑色

24、浅棕色蓝黑色，JZZLtAV l_J 5背景：淡灰色背景：淡灰色四） Luol fast blue 结果：髓鞘 核仁 尼氏小体髓鞘染色方法蓝色紫色紫色五）变色酸 2R- 亮绿髓鞘染色方法结果：神经髓鞘呈深红色；轴索和间质呈绿色，脱髓鞘纤维不着色。注：变色酸2R染液浓度在汛汛为好，可根据质量不同而增减。染色 液置4C冰箱内保存，可反复使用，用前回温。（六） Marchi 退变髓鞘染色方法 结果：退变髓鞘黑色背景浅棕色（七）锇酸a萘胺结果：变性髓鞘及脂肪：黑色正常髓鞘红色红细胞淡红色结缔组织蓝色神经胶质细胞染色方法（一） Cajal 星形细胞染色方法（冷冻切片）结果：原浆形及纤维性星形细胞二） N

25、aounenko紫黑色紫黑色粉红色和 Feigin 改良的 Cajal 染色方法（石蜡切片）结果：星形细胞 背景三）Weil 及 Davenport 小胶质细胞及少胶质细胞染色方法 结果：神经胶质细胞及少突胶质细胞黑色背景黄棕色黑色灰色四） Naou menko 及 Feigin 小胶质细胞石蜡切片染色方法 结果：小胶质细胞：背景神经内分泌细胞染色亲银反应（一）lillie Masson 二胺银染色方法结果：亲银细胞颗粒黑色细胞核红色背景淡灰黄色黑色 浅红色（二）Gomori Burtner 六胺银法 结果：亲银细胞背景细胞 嗜银反应：棕黑色红色（一） De Grandi 改良硝酸银反应法 结

26、果： 嗜银细胞颗粒 胞核橘红色至红色蓝色二）碱性重氮反应： 结果： 嗜银细胞颗粒 细胞核黄色结果 ： 嗜铬细胞红色至紫红色皮质细胞蓝色红细胞粉红色（二） Wiesel 染色方法结果： 嗜铬细胞黄绿色细胞核红色其他蓝色肥大细胞染色一 甲苯胺蓝改良染色方法结果： 肥大细胞：红紫色细胞核蓝色二 醛复红法结果： 肥大细胞颗粒深紫色红细胞橘黄色其他黄色DNA染色（Feulgen 法）结果：DNA紫红色细胞质及其他成分绿色胞质嗜铬细胞染色（一） Giemsa 改良染色方法染色方法胶原纤维， 网状纤维软骨，粘液， 淀粉样神经胶质纤维， 肌纤维髓鞘， 红细胞结 缔 组 织 染 色Mallory 三色蓝rtrL

27、淡蓝红黄Mass on三色绿红黄显示胶原纤维，网状纤 维，弹性纤维三联染色胶原纤维网状纤维弹性纤维肌肉和红细胞红黑绿黄胶原纤维染色胶原纤维细胞核和血 细胞肌肉显示胶原纤维，细胞， 肌肉的染色法红绿黄天狼星红苦味酸染色 法红绿黄网状 纤维 染色网状纤维胶原纤维背景Gomori银染色法黑红黄James染色法里红淡黄弹性纤维染色弹力纤维细胞核粘液背景维多利亚蓝染色蓝rtrL红Gomori醛复红染色深紫紫显示弹性，胶原纤维的 双重组合染色蓝绿色胶原纤维 红色淡黄色横纹肌 组织 染色横纹肌胶原纤维， 网状纤维心肌（缺血缺氧）Mallory 磷钨酸苏木精染色法（PTAH蓝rtrL黄色或玫瑰红色紫蓝色或棕黄

28、色早期心 肌病变 组织染 色缺氧心肌， 红细胞正常心肌细胞核其他Nagar Olse n红黄或黄棕色蓝Poley缺氧心肌染色 法红紫绿糖类染色糖原及其他PAS反应阳性 物质细胞核过碘酸-Schiff( PAS)红蓝rtrL粘液物质 （粘多 糖）染色中性粘液物酸性粘液 物混合性粘液物Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPA$红蓝rtrL紫红Schiff 阿尔辛蓝地衣 红棕蓝黑色素染色黑色素及嗜 银细胞颗粒胶原纤 维背景肌纤维Masson Fontana 浸银染色黑红浅黄Lillie亚铁染色暗绿色浅绿黄含铁血黄 素染色含铁血黄素其他Peris blue（普鲁士 南）蓝rtrL浅红胆色素胆色素其他不适

29、用的固定液：Helly , Zenker等含铬固定液三氯醋酸染色方法绿红或黄纤维 蛋白 染色纤维蛋白陈旧性纤维蛋白细胞核红细胞背景MSB染色法（马休黄猩 红蓝法）红紫蓝黄Gram甲紫染色法蓝黑JzzLtAv红淀粉样 物质 染色淀粉样物质细胞核刚果红染色法红蓝Jurgens甲紫染色法红或紫红色蓝真困 染色菌丝和抱子背景细胞核红细胞Grocott六胺银染色黑褐淡绿红高碘酸复红染色法紫红浅黄色细菌 染色幽门菌抗酸杆菌+G背景Gram碱性复红结晶紫 染色法蓝rtrL红Ziehl Neelsen 抗酸 杆菌染色法红灰监色Warthi n starry 胃 幽门螺杆菌染色法棕黑或黑淡黄色染色方法项目螺旋体

30、 染色螺旋体细菌细胞质红细胞Giemsa染色法蓝到淡紫色蓝rtrL橘黄色HBsAg染色HBsAg颗粒细胞核红细胞结缔组织Shikata地衣红染色棕色醛复红改良染色法紫色黄红维多利亚蓝染色法蓝绿色红神经细 胞尼氏小 体染色 法尼氏小体核背景胶质细胞焦油紫染色法紫无色淡紫Einarson棓酸青蓝黑蓝一紫色t t - 监浅灰色甲苯胺蓝染色法深蓝色淡蓝无色神经纤 维染色 方法神经纤维背景老年斑扣结Holmes神经纤维黑灰紫Bielschowsky 神经黑紫Von Braunmubl 神经纤维，扣结，老年黑浅灰色黑八黑Eager退变神经纤维黑色浅棕色神经 髓鞘 染色 方法髓鞘背景核仁尼氏小体Weiger

31、t髓鞘染色方黑紫淡灰Weil髓鞘染色方法蓝黑淡灰Kultshitzky 髓鞘染蓝黑JzzLtAv淡黄Luol fast blue蓝rtrL紫紫髓鞘脱髓鞘纤背景轴索间质变色酸2R-亮绿髓 鞘深红不着色绿色Marchi退变髓鞘染色方法黑色（退变）浅棕色锇酸a萘胺黑色（变性） 红色（正常）红细胞 （淡红）结缔组织（蓝色）神经胶 质细胞 染色方 法原浆形及纤维 性星形细胞神经胶质细 胞少突胶质背景小胶质细胞Cajal星形细胞（冷冻）紫黑色改良的Cajal染色紫黑色粉红Weil 及 Davenport 小胶质细胞及少胶质细胞黑色黄棕Naou menko 及 Feigin小胶质细胞灰黑色神经内 分泌细 胞

32、染色亲（嗜）细胞 颗粒细胞核背景胞质亲银 反应lillieMass on 二胺银黑红淡灰黄GomoriBurt ner六胺银法黑浅红嗜银 反应De Gran di改良硝酸银反应棕黑色红碱性重氮反应橘红色至红色蓝色黄色嗜铬细 胞染色嗜铬细胞皮质细胞红细胞细胞核Giemsa改良红色至紫红色蓝rtrL粉红Wiesel染色方法黄绿色蓝（其他）红色肥大 细胞 染色肥大细胞细胞核红细胞其他甲苯胺蓝改良红紫色蓝色醛复红法深紫色橘黄黄DNA染色DNA细胞质Feulgen 法紫红色绿色免疫细胞化学技术能与抗体形成比较牢固的共价键结合 不影响抗体与抗原的结合 放大的效益高 发光火显色反应要在抗原与抗体结合的原位并

33、且鲜明，有良好的对比。标记物应具有以下的特点：理想的标记酶： 酶的活性高并且稳定终产物稳定，不扩散，有良好的定位 酶与抗体和结合不影响Ag Ab的特异性反应 在组织与体液中不存在内源性的酶底物效果好又应用最多的是辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶 异硫氰酸荧光素：为明亮的黄绿色荧光四甲基异硫氰酸罗丹明： 为橙红色荧光免疫组织化学主要染色方法的原理一）直接法（又称一步法）特异性高，敏感性低原理：用已知的特异性抗体与荧光素或酶结合， 直接与待测组织中的抗原反应。 特点：将荧光素或酶标记在第一抗体上二）间接法 （又称夹心法）原理：第一步：以未标记的特异性抗体（第一抗体）与组织或细胞中的抗原反应， 洗去未与抗

34、原结合的第一抗体后，第二步：再以荧光素或酶标记的第二抗体与第一抗体结合，如何进行显色或 荧光检查。特点：将荧光素或酶标记在第二抗体上不用标记第一抗体第一抗体的工作稀释度高敏感性增强应用范围更广特异性低于直接法优点：三）未标记抗体法1 酶桥法酶桥法使用的三种抗体中的第 1，第 3两种抗体为同种动物所产生。 在染色的关键是第 2抗体（桥抗体）必须以较高的浓度过量使用 优点：提高了反应的敏感性，缺点：背景染色较重。2 PAP 法将游离酶和抗酶抗体在使用前先制成稳定的酶抗酶抗体复合物，在稀释后 使用。PAP法的关键在于 PAP复合物中的抗酶抗体必须与第一抗体为同种动物所产生。 第 2 抗体（桥抗体）必

35、须过量 （四）亲和素生物素方法1 亲和素生物素过氧化物酶复合物技术（ ABC）通过ABC复合物中亲和素桥梁的作用，将 ABC复合物与生物素化的抗体结合 在一起，达到检测抗原的目的。与PAP法比较，ABC法最大的优点是敏感性高，是 PAP法的20-40倍 其次是背景清晰。SP法与ABC法比较，特异性更高2 酶标亲和素生物素技术（ BA LAB ）制备生物素化抗体和酶标亲和素，利用生物素亲和素的亲和作用，将酶标 亲和素连接到抗原抗体复合物上，以显示被检测的抗原。3 桥联亲和素生物素技术（ BAB， BRAB）是用生物素分别标记抗体和酶，然后以亲和素为桥，将两者连接在一起对照常用的对照方法包括： 阳

36、性对照，阴性对照，阻断实验， ， 空白对照，替代对照，自身对照，吸收实验阳性细胞的染色特征：阳性细胞染色分布有 3 种类型：胞质，细胞核，细胞膜表面 阳性细胞可分为灶性和弥漫性染色强度不一 可定位于单个细胞，且与阴性细胞相互交杂分布。 切片边缘，刀痕或皱褶区域，坏死或挤压的细胞区，胶原结缔组织等表现为 相同的染色强度，不能判断为阳性多用尾静脉，用温水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管扩张， 4号细针一次注射量为，尽可能从尾端开始向尾根部移动注射，注射针垂直刺入 2-3mm,脑内注射：脑内注射：股部1-2ml/100g多用尾静脉，用温水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管扩张， 4号细针一次注射量为，尽可能从尾端

37、开始向尾根部移动注射，注射针垂直刺入 2-3mm,免疫荧光细胞化学染色方法荧光抗体法： 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法荧光抗原法： 用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法 对照：抗原对照，抗血清对照，灭活补体对照。染色结果判读对照试验： 吸收实验：应用尚无文献报道的抗血清/自己制备的抗血清进行IHC染色时，需用相应的饱和抗原吸收血清后，在孵育标本。判断结果的可信性 （结果应为阴性） 交叉实验 替代实验 置换实验 阳性对照动物实验技术实验动物的抓取 一 小鼠用左手拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤，其余三指和手掌心夹住背部皮肤和 尾部小鼠的灌胃针长4-5cm,直径1mm插入深度为3-4cm

38、,常用灌胃量皮内注射量: 最多不得超过 .皮下注射部位：背部股部肌内注射：腹腔注射：静脉注射：大鼠大鼠捉持方法与小鼠相似。 大鼠容易被激怒咬人， 捉持时左手应戴防护手套。另一种方法：张开左手虎口，迅速将拇指，食指插入大鼠腋下，虎口向前， 其余三指及掌心握住大鼠身体中端，并使其保持仰卧位，之后 调整左手拇指位置，紧抵在下颌骨上。大鼠的灌胃针长6-8cm,直径.插入深度为4-6cm,常用灌胃量1-4ml 皮内注射量：最多不得超过 .皮下注射部位：背部，左侧下腹部 肌内注射： 腹腔注射： 静脉注射：家兔一只手抓住兔颈背部皮肤，将兔轻轻提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐 姿势。切不可用手握持双耳提起兔

39、子家兔的固定：盒式固定：常用于经口给药，兔耳血管注射、采血或观察兔耳血管变化等。 台式固定：常用于颈部，胸部手术，兔静脉采血或测量血压，呼吸等实验 架式固定：常用作热原值实验一次灌胃能耐受的最大容积 兔为80-150ml猫为50-150ml皮内注射量：最多不得超过.皮下注射部位：背部或耳根部 肌内注射：腹腔注射： 静脉注射：脑内注射：两侧臀部或股部肌肉5ml,部位：下腹部近腹白线左右两侧约 1cm处。 耳缘静脉注射注射针垂直刺入3mm,兔，猫致死法： 空气栓塞法：静脉内注入20-40ml空气即可致死。四犬要用特制的钳式长柄犬夹夹住颈部，使犬头向上，颈部拉直，再套上犬链。急性实验用犬，可用犬夹夹

40、住犬颈部后，将它压倒在地，由助手将其四肢固定好。实验需要麻醉时，把麻醉完善后的犬固定在手术台或实验台上，应及时解去嘴上的带子, 以利动物呼吸，避免由于鼻腔被粘液阻塞而造成窒息。一次灌胃量不能超过200ml皮下注射部位：大腿外侧肌内注射：腹腔注射：静脉注射：两侧臀部或股部肌肉5-10ml，部位：脐后腹白线侧1-2cm前肢，皮下，头静脉或后肢小隐静脉注射大鼠和小鼠的采血方法眼眶后静脉丛采血3颈静脉和颈动脉采血6尾尖米血断头米血心脏米血：用左手触摸左侧第3-5肋间处，选择心脏冲动最明显处穿刺，一般选择胸骨 左缘外1cm第4肋间用6号半针头的注射器，垂直刺入心脏，可随针接触心脏的感觉随时调整刺 入方向和深度摘眼球采血股静脉和股动脉米血豚鼠采血方法心脏米血2 耳缘米血 3足静脉米血1外颈静脉采血心脏采血（不超过20-25ml）兔的采血方法耳（中央）动脉米血 2 耳缘静脉米血 3颈动脉采血5股静脉采血6前后肢皮下静脉采血颈静脉采血犬的采血方法2 股动脉采血 3 心脏采血5 耳缘静脉采血颈静脉采血 一般一次可取羊的采血方法2 前后肢皮下静脉采血50-100ml试验动物用药量的确定 药物剂量按