菌落总数的误操作及避免方法

1、菌落总数的误操作及避免方法核心提示：菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标，其检测工作在某种程度上具有相当的不可比性，这就要求检测人员要严格执行科学的操作程序。国家标准GB/T4789.2中只是简要提到了检测程序，对实际操作过程中容易出现的问题未作详细说明。本文就检测中容易出现的问题，作一阐述。1、样品的制备和稀释倍数的选择对于冰冻的样品，在接种前要放到04的冰箱中解冻。固体样品要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料并混合，在无菌操作下充分研细，混匀，做成均匀稀释液。样品制备的整个过程都应在无菌状态下进行，以防污染。任何样品在打开包装前，都要在取样开口处的周围表面进行消毒。以上过程的误操作是：冰

2、冻样品的解冻时间过长，导致细菌增殖，使实测结果偏高；固体样品取样不均衡，稀释液未充分混匀，使所测结果准确度降低；取样时未进行外包装消毒，引起样品污染。充气饮料应在无菌条件下进行排气；酸性样品用经过灭菌的2030%碳酸钠溶液调整pH值到中性；含盐量较高的样品应用灭菌蒸馏水进行稀释。误操作是：充气饮料未经排气，使样品接种量偏低；酸性样品未调pH值，使不适合酸性状态下生长的细菌受抑制；高盐样品仍用生理盐水进行稀释，使不适于高盐状态下生长的细菌受抑制，结果均使实测值偏低。不同的食品其菌落总数的检出限量也不一致。酱油、奶制品、熟肉制品等细菌含量一般偏高，稀释度可相应选择较大的，如1:100和1:1000

3、等，而饮料、糕点类样品中细菌量偏低，稀释度应选择较小的，如液体样品可选原样，固体样品选1:10等。误操作是或者选择的稀释度过大，使得菌落生长稀少，或者稀释度过小，菌落生长密度高，难以计数，导致实测结果或偏高或偏低。2、接种、培养过程中应注意的问题接种时，用移液管吸取稀释液不应用吸球，而要用管口上部塞有脱脂棉球的经过高温烘烤的移液管，并且用嘴吸取，以防产生交叉污染。稀释液加入平皿后，应在尽可能快的时间内倾入琼脂（倾倒琼脂时，应保证琼脂温度在5060，温度过高，易杀死细菌；温度过低，则琼脂提前凝固，导致检测失败），并立即在桌面上推旋平皿，使样液与琼脂混合均匀，切忌推旋动作过大，将琼脂溅到平皿盖上，

4、影响测定结果。平皿内琼脂凝固后，不要长久放置后才翻转平皿培养，而应在琼脂凝固后立即将平皿翻转予以培养，这样可避免菌落蔓延生长，难以计数。配制、分装稀释液或倾注平板不能在日光直射下进行，以防强烈的日光将细菌杀死。在培养时，恒温培养箱的温度不能过高，以免出现蔓延生菌的趋势，但也要防止因通风和空气循环而造成的培养基太干，而影响细菌的正常生长。3、灭菌消毒过程中应注意的问题细菌检测过程中所用到的一切用具和培养基都需经过灭菌程序。接种室要经常用消毒液进行地面、墙面和桌面的消毒处理。实验进行前，还要经紫外灯照射杀菌。检测人员的实验服也要经常用消毒液浸泡消毒。凡是能在高温下烘烤的玻璃器皿、金属器械等都应用专

5、用纸包好并在170烘烤3小时以上，以彻底灭菌。培养基和液体试剂，则要在高压锅内进行灭菌。高压锅使用时应注意在升压前要放净锅内残存的空气，以保证所需的压力，达到灭菌效果。灭菌效果的好坏可通过空白试验确定。空白试验有空气空白、稀释用水空白、器皿空白等，完美的空白试验平板上应该无细菌生长。4、菌落计数和检测结果报告中应注意的问题菌落计数在完成培养后应立即进行，以防细菌继续生长蔓延影响实测结果。由于不小心、视力疲劳或菌落没有辨认好，均可导致错误的结果，因此，检测人员在计数时应采取多人同时进行计数的方法，以避免这种情况造成的误差。如果所有稀释度的平板均无细菌生长，则检测报告应以最低稀释度报出，如最低稀释度为1，则报为1；若最低稀释度为1:10，则报为10，而不能报为未检出。以上所述，均是在实际检测菌落总数过