分析化学实验报告4.蛋白质微量凯氏定氮法-2013-1008[实验相关]

1、蛋白质浓度测定微量凯氏定氮法一 目的：学习蛋白质微量凯氏定氮法的原理及操作技术。二 原理：天然有机物(蛋白质等)的含氮总量，通常用微量凯氏定氮法来测定。该法是利用一般蛋白质含氮量平均在16，将测得的含氮量折算成样品中的蛋白质含量。样品在凯氏烧瓶中经硫酸消化后，蛋白质分解产生氨，氨与硫酸作用生成硫酸铵，分解反应进行很慢，需加入催化剂(HgO)，加K2S04以提高溶液的沸点，加入H202可加速反应。消化完后，在凯氏定氮仪中，加入强碱碱化消化液使硫酸铵分解，放出氨。用水蒸汽蒸馏法将氨收集于过量的硼酸溶液中，以标准酸滴定，根据标准酸消耗的量，乘以一定系数，即可计算样品中蛋白质的氮含量。若以甘氨酸为例，

2、其反应式如下：三 器材50ml凯氏烧瓶，50ml锥形瓶，12ml移液管，10ml量筒，表面皿，10ml酸式滴定管，滴定台，漏斗架，万用电炉，微量凯氏定氮仪，电热套。四 试剂及样品(1) 40% NaOH - 5% Na2S2O3溶液; (2) 混合指示剂：0.04%甲基红-60% 乙醇指示剂溶液;(3) 2%硼酸溶液;(4) 0.01N盐酸标准溶液；(5) 酱油（20ul）、维他奶(100ul)样品。(6) 标准硫酸铵溶液（0.3mg/mL 氮）五 操作方法(1) 消化：取酱油（20ul）、维他奶(100ul)，分别放入50ml凯氏烧瓶中，加入粉状硫酸钾约2.25g，黄色HgO 20mg，硫酸

3、1.5ml，摇动烧瓶，使全部样品浸没于硫酸内，将烧瓶置于电炉上，在通风橱内加热至量样品中有机物全部破坏，停止加热，放冷，加2滴H202，继续消化10min（颜色由黑变透明）。同时消化1份空白烧瓶。(2) 溶解消化液：冷后(约10分钟)，向每个盛有消化液的凯氏烧瓶加蒸馏水10ml，加热溶解，备用。(3) 蒸馏和滴定安装好凯氏定氮装置，在水蒸汽发生器内装入蒸馏水至 23体积处，加入硫酸lmL，甲基红指示剂23滴，少许沸石，毛细管数支，接通电热套的电源，加热，用产生的水蒸气冲洗全套仪器，至馏出液不显酸碱性。从进样杯中分别加入lml标准(NH4)2SO4溶液、样品液、空白液，用少量蒸馏水洗3次凯氏烧瓶

4、，塞好小玻塞。量取2硼酸-混合指示剂溶液10mL于锥形瓶(接收瓶)中，置于冷凝管下端，不要留下空隙。注入10ml 40Na0H5% Na2S2O3碱液到进样杯中，小心提起玻塞，慢慢放入碱液，当碱液流剩少许时，塞下小玻塞(防止NH3 逸出)，此时碱液与消化液呈黑色。10ml水分3次注入进样杯，操作同上，目的是尽量把碱液冲下去。立即塞紧棒状玻塞，并加入少量蒸馏水，水封进样杯口，以防漏气。关闭排液管，开始蒸馏，让其反应至指示剂在5分钟内变色，自变色起蒸馏5分钟，溶液从粉色绿色，到时间后，冷凝管下端移离指示剂液面，继续蒸馏1分钟，用蒸馏水冲洗冷凝管下端出口，锥瓶口以表面皿复盖待滴定。用标准盐酸滴定至终

5、点（淡粉色)。本实验成功的关键：A清洗干净反应室；B加样时放松排液夹；C加碱时保持密闭状态；D用硼酸指示剂接收氨，下口全泡入液中；E蒸馏时夹紧排液夹。F. 滴定准确。注意事项：(1)在整个测定过程中，应该避免周围环境里氨的影响，以确保结果的稳定。(2)若消化液未冷却便加水，可使硫酸爆沸或消化瓶爆裂，很危险!若水不纯，含OH-，可使无色透明之消化液变色，黄褐或黑色。六. 计算1）标准硫酸铵氮含量的计算：标A为滴定样品用去的盐酸平均ml数；NHCL 为盐酸的质量浓度等于0.0100mol/L; 14为氮的原子量(1ml 0.OlmolL盐酸相当于0.14mg氮)；2）样品氮及蛋白质的质量浓度的计算：样品氮的质量浓度的计算：式样品中：A为滴定样品用去的盐酸平均ml数；B为滴定空白用去的盐酸平均m1数；0.0100为盐酸的浓度(molL); n为样品的稀释倍数。14为氮的原子量(1ml0.OlmolL盐酸相当于0.14mg氮)；V为样品ml数。蛋白质的质量浓度的计算:样品中蛋白质含量（mg/ml）=蛋白氮NN为不同样品的蛋白质换算系数，一般均按蛋白质含