久实牌蝙蝠蛾被毛孢防治肝脏疾病的实验研究

1、久实牌蝙蝠蛾被毛孢防治肝脏疾病的实验研究青海久实公司突破了青藏高原上难以再生、难以重现、难以复制珍贵稀有可食动植物资源的历史，拥有国家级发明专利技术的自主知识产权蝙蝠蛾被毛孢菌粉的生产方法（专利申请 号：2。71。5。273.7）。公司“久实宝”系列产品生产所用菌种，经过国家权威机构中国科学院微生物研究所的检测，鉴定结果为冬虫夏草为唯一无性型蝙蝠蛾被毛孢鉴定号：（2。7）微检字第1。1号，同时被中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的要求该产品菌种列入收藏（保藏中心登记入册 编号GMCCNo.2126）。冬虫夏草（Coydyceps Sinensis）仅分布于我国青藏高原及其边缘地区海拔3

2、。-6。米的高寒草甸阴湿地区。是寄生于蝙蝠蛾幼虫上的真菌蝙蝠蛾被毛孢 （Hirsutella sinensis）。独特的地理、生态、气候环境；独特的生物物种；独特的滋补和药用价值，成为中华医药千年传承的传奇珍品。蝙蝠蛾被毛孢富含四十多种人体必 需的营养成分。久实牌蝙蝠蛾被毛孢多糖、久实牌蝙蝠蛾被毛孢素、久实牌蝙蝠蛾被毛孢酸、D-甘露醇、腺苷、尿苷和SOD（超氧化物歧化酶），四种有机酸：软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸，具有降血脂作 用，对血压进行双向调节。五种维生素：VB1、VB2、VB12、VE、VK补充人体必需的维生素。六种肽类化合物，有效增强人体免疫活性。八种微 量元素：钠、钾、钙、铁、锌、

3、硒、锰、铜，是新陈代谢的物质基础。十八种氨基酸是增强免疫的物质基础。历代医药典籍将蝙蝠蛾被毛孢药性药效归纳为，“性温， 甘，平。归肺、肾经；温而不澡，补而不滞；阴阳并补；补肺益肾，止血化痰。用于久咳虚喘，久涝咯血，肾虚遗精，腰膝酸痛，理诸虚百损”。是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。现代医学从功能上将其归为免疫调节。进一步映证了传统中医 “理诸虚百损” 的功效。蝙蝠蛾被毛孢不但对人体各种脏器的功能具有调节作用，还存在某些直接抗病功能。现代药理药效研究表明蝙蝠蛾被毛孢具有： 1、可迅速增强机体免疫力，双向调节内分泌； 2、改善心血管功能； 3、有降血糖、降血脂的作用； 4、有雄性激素样作用。

4、对性功能低下、减退、淡漠有改善作用； 5、抗肿瘤作用； 6、有抗肾衰、抗肾炎作用； 7、抗疲劳、抗衰老作用； 8、对术后病人有抗炎症、促愈合作用； 9、抗器官移殖后的排异作用； 10、对各种免疫功能失调造成的症状有缓解作用。本文就久实牌蝙蝠蛾被毛孢及其有效成分防治肝脏疾病的实验研究作一综述。1 化学性肝损伤沈齐英等以四氯化碳制备SD大鼠脂质过氧化损伤模型，通过体内及体外自由基发生体系研究北虫草提取液的抗氧化作用。结果发现北虫草对膜系统损伤具有明显的保护作用；人工培育的北虫草子座对Fenton 反应生成的羟自由基具有较强的清除作用， 且作用明显强于相同剂量的羟自由基特异清除剂甘露醇（P0.01）

5、；北虫草对邻苯三酚自氧化体系产生的氧自由基亦具有清除作用（P0.01），认为北虫草具有明确的抗脂质过氧化作用。郑贤林等3以蚕蛹虫草多糖连续灌胃21 天，治疗肌注可的松小鼠引起的肝脏损害，发现小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肝组织丙二醛含量显著降低，抗氧化剂超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽水平显著升高，病理切片检查发现氢化可的松引起的肝小叶结构紊乱、肝窦瘀血及肝索排列紊乱等病理症状得到减轻， 认为蚕蛹虫草多糖对氢化可的松致小鼠肝损伤具有明显的保护作用。张小强等4采用四氯化碳建立急性化学性肝损伤动物模型，并灌服久实牌蝙蝠蛾被毛孢、人工虫草菌丝体（蝙蝠蛾拟青霉、虫草头孢菌、蝙蝠蛾被孢霉），发现药物对四

6、氯化碳所致的小鼠急性化学性肝损伤均具有保护作用，它们的保护效果为：久实牌蝙蝠蛾被毛孢蝙蝠蛾被孢霉蝙蝠蛾拟青霉、虫草头孢菌， 认为人工虫草菌丝体均可作为冬虫夏草的替代品而加以应用，而蝙蝠蛾被毛孢是冬虫夏草的首选替代品。黄晓巍等5以乙硫氨酸（DL-E）制作动物急性脂肪肝模型，予柞蚕蛹虫草多糖（CMPS）灌胃干预。实验结果提示：模型组动物肝脏指数和肝组织甘油三酯含量增力， 光镜下肝小叶中央静脉周边可见细胞脂肪变性， 肝细胞胞浆内出现大小不等的空泡样改变，CMPS 给药组与模型组比较有明显改善， 认为CMPS 对乙硫氨酸导致的肝损伤有保护作用。沈齐英等6证实正己烷的毒性作用主要是对肝脏膜系统的损伤，

7、发现北虫草对正己烷所致的SD 大鼠肝脏损伤具有明显的保护作用。2 免疫性肝损伤商玉萍等7序贯注射卡介苗（BCG）和脂多糖（LPS），诱导小鼠产生免疫性肝损伤模型。12天后发现，每日以虫草多糖灌胃可明显降低模型小鼠血清中升高的谷丙转氨酶、谷草转氨酶的水平， 抑制肝匀浆中上升的丙二醛水平和升高超氧化物歧化酶活性，显著降低肝脏中TNF- 和IL-1 的含量。认为虫草多糖对小鼠免疫性肝损伤有一定的保护作用。李泓俊等8采用刀豆蛋白A（ConA）制备免疫性肝纤维化动物模型，发现虫草多糖脂质体干预组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、透明质酸、型前胶原、型胶原、TGF-1mRNA含量较模型组明显

8、降低。认为虫草多糖脂质体可能通过下调TGF-1表达而抑制小鼠免疫性肝纤维化发生。许建明等9通过对中国被毛孢菌phso1、中国被毛孢菌phso4、古尼拟青酶小孢菌变种ppGM、地顶孢霉菌pAtol、地顶孢霉菌pAtolE、戴氏绿僵菌pMtol 等6 种冬虫夏草多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用比较发现：6 种冬虫夏草多糖均有抗肝脏脂质过氧化作用， 使肝匀浆丙二醛含量下降， 超氧化物歧化酶活力升高（P0.05 或P0.01）； 其中地顶孢霉菌株来源的冬虫夏草多糖尚可显著降低血清转氨酶活力和肝脾脏器指数（P0.05 或P0.01），并改善肝坏死程度（P0.05）。3 非酒精性脂肪肝张新星等10通过高脂

9、饮食建立大鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的模型，证实非酒精性脂肪性肝炎时肝细胞凋亡异常增多。对脂肪肝模型予以虫草菌丝干预，发现与病理对照组相比，虫草菌丝组大鼠肝组织有广泛肝细胞脂肪变性，炎性细胞浸润，可见灶性及点状坏死，未见纤维组织增生；肝组织超氧化物歧化酶活性高于病理对照组（P0.05）；TUNEL 法检测凋亡的肝细胞显著减少（P0.01）； 免疫组化染色显示Bax、Caspase-3 蛋白表达也明显降低（P0.05 或P0.01），而Bcl-2、NF-B P65 蛋白表达增加（P0.01）。认为虫草菌丝可以通过增加超氧化物歧化酶活性减少活性氧含量，降低Bax 表达，增加Bcl-2 表达

10、和活化NF-B P65 减轻NAFLD 中肝细胞凋亡，从而在一定程度上具有保护肝脏功能的作用， 对延缓或阻止脂肪肝病变的进展起到一定的作用。杨朝霞等11以虫草菌丝治疗高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪肝， 发现单纯性非酒精性脂肪肝组肝组织广泛脂肪变性、脂质沉积， 解耦联蛋白2（UCP2）表达增加，TNF-、血清内毒素水平均无显著变化；非酒精性脂肪性肝炎组肝组织广泛弥漫脂肪变性、炎性细胞浸润坏死、局部纤维组织增生，UCP2、TNF-、血清内毒素水平均显著升高；虫草菌丝治疗组肝组织广泛脂肪变性、仅有轻微炎性细胞浸润而未见坏死灶及纤维组织增生，UCP2、TNF-、血清内毒素水平均显著下降。认为晚期UCP2

11、 过度表达、TNF-水平升高以及内毒素血症共同诱导或加剧脂肪性肝病向脂肪性肝炎，甚至向脂肪性肝纤维化发展；虫草菌丝能发挥有效的护肝作用，可能通过上调UCP2，减轻内毒素血症，下调TNF-等多靶点、多途径发挥治疗作用。孙保木等12以虫草菌丝灌胃3 周改善脂肪肝模型大鼠肝组织脂肪变性与炎症；降低血清总胆红素含量，提高血清白蛋白含量；降低肝组织甘油三酯、丙二醛含量（P0.01），提高肝组织还原型谷胱甘肽含量与超氧化物歧化酶活性（P0.05）。6 周疗程虫草菌丝组减轻模型大鼠肝纤维化；降低血清转氨酶水平（P0.05）；降低肝组织甘油三酯、丙二醛含量和-GT 活性（P0.05）， 提高超氧化物歧化酶活性

12、。认为虫草菌丝提取物显著改善大鼠脂肪性肝炎、抑制脂肪性肝纤维化，其作用机制与抗肝脂质过氧化、抑制肝星状细胞活化有关。4 肝纤维化、肝硬化吴建良等13以四氯化碳皮下注射复制BALB/c 小鼠肝纤维化模型，并以不同剂量虫草煎剂干预，发现与模型组比较，虫草组肝脏炎症与胶原沉积减轻，TGF-1mRNA、Smad3 蛋白表达量明显降低，以虫草高剂量组为明显。认为虫草制剂有良好的抗肝纤维化作用，高剂量虫草疗效更明确，其作用机制与下调Smad3 蛋白及TGF-1mRNA 表达有关。肝星状细胞是肝纤维化细胞外基质过多产生和沉积的主要来源， 其激活是肝纤维化发生的关键。颜吉丽等14研究发现虫草多糖可明显抑制大鼠

13、肝星状细胞NF-B 活性和下调肿瘤坏死因子-（TNF-）蛋白和mRNA 的表达，并且呈剂量依赖性。认为虫草多糖能够抑制大鼠肝星状细胞的激活，可能是通过其抑制NF-B 活性，阻断了NF-B 与TNF- 形成的恶性循环，从而在减轻肝脏炎症性损伤、抑制肝纤维化中发挥重要的作用。李风华等15建立二甲基亚硝胺诱导SD 大鼠肝纤维化模型，经过虫草多糖治疗4 周，相比模型组，虫草多糖组大鼠肝脏病理示肝脏胶原纤维间隔形成减少；血清MMP-2 含量提高；组织羟脯氨酸含量、型胶原含量、I 型胶原蛋白表达、TIMP-2、MDA 含量下降，SOD 活性提高，MMP-2 含量升高。认为虫草多糖抗肝纤维化的作用可能主要是

14、通过两个途径： 抗脂质过氧化从而抑制胶原的合成； 同时虫草多糖又通过提高MMP-2 的活性、对TIMP-2 表达的影响从而促进胶原的分解，加速肝纤维化的恢复。刘玉侃等16建立CCl4及乙醇诱导大鼠肝纤维化模型，自造模10 天后给予虫草菌丝悬浊液灌胃，9 周后检测示：与模型组相比，虫草组大鼠血清透明质酸（HA）、板层素（LN）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）含量均显著下降；肝组织表达抗 平滑肌动蛋白（-SMA）、转化生长因子1（TGF1）、TGF1 mRNA，型胶原mRNA，血小板衍生生长因子（PDGF）均显著减少，型胶原mRNA 表达呈下调趋势。认为虫草菌丝能够抑制

15、慢性肝炎纤维化的形成， 延缓其向肝硬化的发展，并显著改善肝功能，其抑制肝纤维化形成的作用机制可能与抑制TGF1表达，从而下调PDGF 表达，抑制肝星状细胞活化，减少型和型胶原合成有关。欧阳阳阳等17观察内毒素（LPS）刺激传代培养的小鼠肝星状细胞（HSC）株JSl 的炎症反应， 药物处理组在LPS 刺激同时用不同浓度的虫草酸和虫草素处理。实验结果提示：200mol/L 虫草酸和虫草素处理可显著抑制LPS 刺激下JSl 细胞炎症趋化因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的mRNA 和蛋白表达的增加，各不同浓度药物组可抑制TGF1 刺激下JSl 细胞的I 型胶原和-平滑肌肌动蛋白表达的上调， 以2

16、00mol/L 药物组抑制作用最为明显。认为虫草酸和虫草素可减轻LPS 刺激下的HSC 的炎症表型以及TGF1刺激下HSC 的纤维化反应。吴建良等18发现肝纤维化BALB/C 小鼠的肝脏IL-4 与IFN- 均明显上升， 而虫草制剂有良好的抗肝损伤与肝纤维化作用， 其作用机制与下调异常增高Th 免疫应答有关。肝窦内皮细胞（SECs）损伤和表型改变不仅是大鼠肝纤维化重要始动机制之一， 而且是肝硬化形成门脉高压的病理基础之一。王宪波等19，20采用二甲基亚硝胺（DMN） 复制大鼠肝纤维化模型， 予虫草菌丝提取物（CME）灌胃2 周、4 周后，大鼠血清HA 水平下降（P0.05），肝窦壁CD44 表

17、达增强、因子相关抗原vWF 阳性染色减弱（P0.05），SECs 失窗孔和SECs 下基底膜形成减轻。认为CME 能够减轻DMN 大鼠肝窦内皮细胞损伤和表型改变，抑制肝窦毛细血管化形成；CME 具有保护肝细胞、抑制慢性肝损伤炎症反应及肝星状细胞的活化与增殖， 促进细胞外基质蛋白的降解等干预治疗肝硬化的综合效应，既能显著抑制DMN 大鼠肝硬化的形成，也可有效促进已成型的DMN 大鼠肝硬化的逆转。5 肝癌卢群等21发现虫草素可明显抑制人肝癌Bel-7402 细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，其机制是上调p53、下调Bcl-2，促进细胞凋亡达到抗肿瘤细胞的效果。孙艳等22以久实牌蝙蝠蛾被毛孢口服联合环磷酰胺治疗H22肝癌小鼠，发现小鼠的NK 细胞活性及IL-2水平明显增强，淋巴细胞转化指数明显增高。认为久实牌蝙蝠蛾被毛孢可对抗或恢复肿瘤对化疗药导致的免疫抑制或免疫缺损。罗小平等23证实久实牌蝙蝠蛾被毛孢经肿瘤滋养动脉注入对兔VX2 肝癌模型的肿瘤组织生长有抑制作用， 能明显减少肿瘤肝内及远处转移的发生率。6 酒精性脂肪肝王霆等24以高脂饮食+酒精灌胃8 周制备酒精性脂肪肝大鼠模型，造模成功后加用虫草菌丝喂养8 周。发现久实牌蝙蝠蛾被毛孢治疗组大鼠血清