毛细管凝胶电泳PPT学习教案

1、会计学1 毛细管凝胶电泳毛细管凝胶电泳 第1页/共24页 第2页/共24页 Ogston Model Repatation Model 第3页/共24页 CH2=CH C=O NH CH2 NH CH2=CH C=O CH2=CH CO NH2 丙烯酰胺量(a) 甲叉双丙烯酰胺(b) 第4页/共24页 第5页/共24页 PA凝胶的浓度T和C T单体和交联剂的百分浓度 C交联剂的量 a 丙烯酰胺量（g） b甲叉双丙烯酰胺的量（g） m缓冲溶液的体积（ml） %100 %100 ba b C m ba T 第6页/共24页 第7页/共24页 聚丙烯酰胺凝胶毛细管柱的制备方法聚丙烯酰胺凝胶毛细管柱的

2、制备方法 1.1.检测窗口制备检测窗口制备 2.2.内壁修饰内壁修饰 120C热空气吹，室温氨气冲洗2h，后503甲基丙烯酰氧 丙基三甲氧基硅烷（3methacryloxypropyl-trimethoxysilane)充满 一昼夜后，用甲醇和水冲洗 3.3.缓冲溶液制备缓冲溶液制备 1.1g Tris和 0.01g EDTA溶于100 ml 7M尿素溶液，用 NaH2PO4调至pH 8.6 4.4.单体溶液制备单体溶液制备 29g 丙烯酰胺和1g N甲叉双丙烯酰胺溶解在100ml 缓冲 溶液中 5.5.催化剂制备催化剂制备 0.2g 过硫酸铵溶于2ml 缓冲溶液中 6.6.凝胶溶液制备凝胶溶

3、液制备 10ml 单体溶液加入到30ml缓冲溶液中，甲4ul 催化剂溶 液，2.5 ul 四甲基乙二胺（TEMED）预聚合45分钟 7.7.灌注聚合灌注聚合 上述凝胶溶液注入毛细管到无气泡，将两端浸入缓冲溶液中聚 合数小时。 第8页/共24页 亲水高分子聚合物无胶筛分体系 第9页/共24页 Mobility of dsDNA and the choice of gel concentration 第10页/共24页 第11页/共24页 凝胶的浓度ssDNA 第12页/共24页 Concentration of HPMC on the separation of dsDNA ladder A-0

4、.1%， B-0.3%， C-0.7% 第13页/共24页 电场强度 第14页/共24页 ssDNA 高效分离 塔板数达3千万！ 第15页/共24页 EB and dsDNA 第16页/共24页 ssDNA 第17页/共24页 Sanger 链中止法 扩增测序 第18页/共24页 HV supply Capillary Glass slide Detection window ITO thermostat PCR vial Fracture Chip PCR online with chip CE 第19页/共24页 Denaturing of protein before SDS-C-PAGE Denature condition: 1% SDS, 2% beta-mercaptoethanol 30min at 90C. 第20页/共24页 SDS CGE of proteins 第21页/共24页 Relation of