生物技术实验室仪器操作简介[管理材料]

1、生物技术实验室常用仪器生物技术实验室常用仪器 设备简介及操作设备简介及操作 实验一实验一 1优选课件 实验室主要仪器，设备的简介及使用方法实验室主要仪器，设备的简介及使用方法 2优选课件 微量移液器微量移液器 3优选课件 微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪 器，其装有直接读数容量计。器，其装有直接读数容量计。 微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续 调节读数。调节读数。 0.5 0.510l 10l 10 10100l100l 20 20200l 200l 100 1001000l1

2、000l 常见规格常见规格 4优选课件 量液的操作步骤：量液的操作步骤： 第一停点 第二停点 A A 保持微量移液器垂直，将按钮压至第一停点；保持微量移液器垂直，将按钮压至第一停点； B B 微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮；微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮； C C 保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢 慢压下按钮至第一停点；慢压下按钮至第一停点； D D 压至第二停点把溶液完全释放出；压至第二停点把溶液完全释放出； E E 释放按钮回原状。释放按钮回原状。 5优选课件 1 1 未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任

3、何液体。未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。 2 2 一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读 数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。 3 3 不要横放或倒拿带有残余液体吸嘴的移液器。不要横放或倒拿带有残余液体吸嘴的移液器。 4 4 不要用大量程的移液器移取小体积样品。不要用大量程的移液器移取小体积样品。 5. 5. 移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。 6优选课件 台式高速离心机台式高速离心机 离心机的分类离心机的分类 低速低速：每分

4、钟几千转：每分钟几千转 高速高速：每分钟：每分钟1 3万转万转 超速超速：每分钟：每分钟3万转以上万转以上 7优选课件 低速：细胞等大分子低速：细胞等大分子 高速：高速：DNADNA，蛋白等，蛋白等 超速超速: : 病毒，蛋白，细胞器等病毒，蛋白，细胞器等 基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品 的分离制备实验中都离不开低温离心技术的分离制备实验中都离不开低温离心技术 本实验室所用离心机本实验室所用离心机: :台式高速离心机（台式高速离心机（ ThermoThermo ），配有），配有 角式转头：角式转头：24241.5ml1.5m

5、l；极限转速；极限转速13000rpm ;13000rpm ;台式低温高速离台式低温高速离 心机（心机（sigma),sigma),极限转速极限转速20000rpm20000rpm。 离心机的功能：离心机的功能：分离，纯化分离，纯化 8优选课件 1 1、把离心机放置于平面桌或平面台上，检查离心机是否、把离心机放置于平面桌或平面台上，检查离心机是否 放置平稳。放置平稳。 2 2、将离心管对称放入转子内，且要、将离心管对称放入转子内，且要事先平衡事先平衡。 3 3、锁紧门盖。、锁紧门盖。 4 4、插上电源插座，按下电源开关。、插上电源插座，按下电源开关。 5 5、设置转子号、转速、时间：、设置转子

6、号、转速、时间： （常用，最高转速为（常用，最高转速为13000r/min13000r/min，时间最长为，时间最长为20min20min）；）； 注意注意：对应的转子不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。：对应的转子不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。 6 6、当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。、当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。 台式高速离心机使用步骤台式高速离心机使用步骤 9优选课件 注意事项注意事项： 1 1、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。 2 2、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应

7、与、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与 台面接触和均匀受力，以免产生振动。台面接触和均匀受力，以免产生振动。 3 3、离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大、离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大 的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必 须对称放入。须对称放入。 4 4、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停 机处理。机处理。 5 5、离心机彻底停止后，才可开盖，取样。、离心机彻底停止后，才可开盖，取样。 10优选课件 PCR仪仪 11优选课件 PC

8、R仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域， 如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医 学等。学等。 PCR仪，也称仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，能使热循环仪、基因扩增仪，能使 一对寡核苷酸引物结合到正负一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两链上的靶序列两 侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片片 段，它的每一循环包括段，它的每一循环包括DNA变性、复性、延伸变性、复性、延伸三个三个 反应。反应。 12优选课件 操作程序操作程序: : 1 1

9、）开机：打开电源，显示主界面；）开机：打开电源，显示主界面； 2 2）创建程序：使用）创建程序：使用”createcreate”输入新程序（包括输入新程序（包括PCRPCR循循 环数，预变性、变性、复性、延伸的时间和温环数，预变性、变性、复性、延伸的时间和温 度），保存程序（包括用户名和方法名）度），保存程序（包括用户名和方法名）; ; 3 3）放入样品，盖上盖子）放入样品，盖上盖子; ; 4 4）在所建用户名下按）在所建用户名下按“run”run”键，找到设定的程序，键，找到设定的程序， 按按“startstart”键键启动程序启动程序; ; 5 5）运行结束后按）运行结束后按“stopst

10、op”键停止运行，取出样品，关键停止运行，取出样品，关 闭电源。闭电源。 13优选课件 1、预变性：可用、预变性：可用9495，210min,一般用一般用 5min。 2、变性：一般用、变性：一般用94，30s2min,一般一般45s1min。 3、退火：温度自定，、退火：温度自定，30s2min。 4、延伸：、延伸：72，对于，对于(1kb=1min,每增加每增加1kb加加1min)。 5、循环数：一般、循环数：一般2535个循环个循环(2,3,4步循环）。步循环）。 6、最终延伸：、最终延伸：72，515min。 7、保存：、保存：4，时间设为，时间设为0。 8、END。 14优选课件 F

11、R-980生物电泳图像分析系统生物电泳图像分析系统 15优选课件 系统简介：系统简介： 系统可以通过紫外系统可以通过紫外/ /可见光分析装置及透光扫描仪直可见光分析装置及透光扫描仪直 接获得核酸、蛋白质凝胶电泳图像。系统配置有接获得核酸、蛋白质凝胶电泳图像。系统配置有 SmartViewSmartView生物电泳图像分析软件，可以进行密度扫描、生物电泳图像分析软件，可以进行密度扫描、 密度定量、分子量计算等电泳分析。此外，该系统含有密度定量、分子量计算等电泳分析。此外，该系统含有 多种图像滤波器，可降低图像的噪音，从而获得较清晰多种图像滤波器，可降低图像的噪音，从而获得较清晰 的图像。的图像。

12、 16优选课件 操作步骤：操作步骤： 1）将电泳样品放入分析装置中将电泳样品放入分析装置中 2）打开电脑，运行打开电脑，运行Smart View 软件，单击软件，单击“Import”键进入键进入 图像获取项目栏，图像获取项目栏，选择选择“获取视频图像获取视频图像”键，进键，进行图像采集行图像采集 3）选选 择紫外或可见光源，在图像采集窗口中调节好图像大择紫外或可见光源，在图像采集窗口中调节好图像大 小、亮度及焦距小、亮度及焦距 4）单击单击“采集图像采集图像”键，根据图像质量选择好优化摄影时间键，根据图像质量选择好优化摄影时间 （一般情况下在（一般情况下在12秒左右秒左右），即开始采集。，即开

13、始采集。 1 1、图像采集、图像采集 17优选课件 18优选课件 2、图像保存、图像保存 单击单击“System 键键”选择选择“另保存图像为另保存图像为”键，出现一个键，出现一个“图像文图像文 件登记件登记”窗口，窗口，输入标题，实验人，实验日期，实验摘要等输入标题，实验人，实验日期，实验摘要等 信息，信息，按按“保存保存”键完成图像文件登记键完成图像文件登记，同时出现，同时出现“另保存图另保存图 像为像为”窗口，输入图像名，保存图像至桌面。窗口，输入图像名，保存图像至桌面。 3、关闭操作系统、关闭操作系统 （1）关闭紫外）关闭紫外/可见光。可见光。 （2）退出软件界面。）退出软件界面。 （

14、3）关闭紫外与可见分析装置的电源。）关闭紫外与可见分析装置的电源。 19优选课件 注意事项：注意事项： 1、 不要戴不要戴“脏脏”手套触摸电脑鼠标、键盘及其它位置；手套触摸电脑鼠标、键盘及其它位置； 2、 不要戴不要戴“脏脏”手套触摸仓门和灯箱电源开关；手套触摸仓门和灯箱电源开关； 3、 不要戴不要戴“脏脏”手套触摸外接电源开关；手套触摸外接电源开关； 4、在图像获取过程中，若通过软件打开紫外、在图像获取过程中，若通过软件打开紫外/可见光，则可见光，则 必须再通过软件关闭，若通过紫外与可见分析装置上必须再通过软件关闭，若通过紫外与可见分析装置上 打开紫外打开紫外/可见光，则从分析装置上关闭，严

15、禁互用，可见光，则从分析装置上关闭，严禁互用， 导致紫外灯长亮。导致紫外灯长亮。 20优选课件 电泳仪电泳仪 DYY-12型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂） 21优选课件 操作程序：操作程序： 1）电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接（极）电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接（极 性不要接反）；性不要接反）； 2）打开电源，设置参数（选择稳压稳流方式及电压电）打开电源，设置参数（选择稳压稳流方式及电压电 流范围）；流范围）； 3）按）按“启动启动”启动程序（输出为高电压，注意安全）；启动程序（输出为高电压，注意安全）； 4）电泳结束，按）电泳结

16、束，按“停止停止”键终止程序。键终止程序。 22优选课件 注意事项注意事项 1 1、电泳仪工作时，禁止人体接触电极、电泳物及其它可、电泳仪工作时，禁止人体接触电极、电泳物及其它可 能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，以免触电，同能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，以免触电，同 时要求仪器有良好接地端，以防漏电。时要求仪器有良好接地端，以防漏电。 2 2、仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以、仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以 防短路。防短路。 3 3、由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳所通过的电、由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳所通过的电 流量也不同，其泳动速度

17、及泳至终点所需时间也不同，故流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故 不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。 4 4、使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常、使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常 气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外。气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外。 23优选课件 使用及性能使用及性能： 摇床（振荡器）广泛用于对摇床（振荡器）广泛用于对 温度和振荡频率有较高要求温度和振荡频率有较高要求 的细菌培养、发酵、杂交、的细菌培养、发酵、杂交、 生物化学反应以及酶和组织生物化学反应

18、以及酶和组织 研究等。实验室常用的液体研究等。实验室常用的液体 摇匀，微生物、细菌和细胞摇匀，微生物、细菌和细胞 培养。培养。 恒温气浴摇床恒温气浴摇床 SHK-99-SHK-99-型台式空气恒温摇床型台式空气恒温摇床 24优选课件 1 1）样品瓶牢固放入弹簧夹中；）样品瓶牢固放入弹簧夹中； 2 2）接通电源开关，设定参数（温度、时间、转速等）；）接通电源开关，设定参数（温度、时间、转速等）； 3 3）按启动键启动仪器，按暂停键可暂停托盘的旋转；）按启动键启动仪器，按暂停键可暂停托盘的旋转； 4 4）按下控制面板的电源键两秒，显示屏显示消失，关闭）按下控制面板的电源键两秒，显示屏显示消失，关闭

19、 电源总开关。电源总开关。 操作程序：操作程序： 25优选课件 超净工作台超净工作台 使用及性能：使用及性能： 超净工作台为分子生物超净工作台为分子生物 学无菌操作提供可能，学无菌操作提供可能， 分为垂直送风和水平送分为垂直送风和水平送 风两种。风两种。 26优选课件 超净台由三相电机作鼓风动力，空气通过由超净台由三相电机作鼓风动力，空气通过由 特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清超级滤清 器器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超 净空气层流，即所谓净空气层流，即所谓“高效的特殊空气高效的特殊空气”，能够，能够 防

20、止附近空气可能袭扰而引起的污染，同时也不防止附近空气可能袭扰而引起的污染，同时也不 会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。 工作人员就在这样的无菌条件下操作，可以保持工作人员就在这样的无菌条件下操作，可以保持 无菌材料在转移接种过程中不受污染。无菌材料在转移接种过程中不受污染。 27优选课件 台面清洁消毒台面清洁消毒 进行无菌操作进行无菌操作 清理工作台面清理工作台面 紫外消毒紫外消毒3030分钟分钟 关闭紫外灯、电源关闭紫外灯、电源 操作程序：操作程序： 1 1）工作台面上，不要存）工作台面上，不要存 放不必要的物品，以放不必要的物品，以 保

21、持工作区内的洁净保持工作区内的洁净 气流不受干扰。气流不受干扰。 操作时一定注意关掉操作时一定注意关掉 紫外，防止对实验人紫外，防止对实验人 员造成伤害员造成伤害 注意事项：注意事项： 28优选课件 灭菌锅灭菌锅 使用及性能：使用及性能： 细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用 的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌；的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌； 对于经过导入对于经过导入DNADNA重组分子的菌株，操作后重组分子的菌株，操作后 必须进行严格的高压消毒灭活处理必须进行严格的高压消毒灭活处理 。 29优选课件 1 1）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏

22、水刚没）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没 至板上；至板上； 2 2）通电：打开控制面板上电源开关，若水位低则红灯亮；）通电：打开控制面板上电源开关，若水位低则红灯亮； 3 3）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不超过）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不超过 200mm200mm100mm100mm100mm100mm为宜，各包装之间留有间隙，利于蒸为宜，各包装之间留有间隙，利于蒸 汽穿透，提高灭菌效果；汽穿透，提高灭菌效果； 3 3）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，压紧锅盖；）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，压紧锅盖； 4 4）灭菌：）灭菌：121121， 20min

23、20min；如为液体，液体必须装在可耐；如为液体，液体必须装在可耐 高温的玻璃器皿中，不宜超过高温的玻璃器皿中，不宜超过2/32/3； 5 5）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气。）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气。 操作程序：操作程序： 30优选课件 1 1）如是手动的灭菌锅，灭菌过程中，应注意排）如是手动的灭菌锅，灭菌过程中，应注意排 净锅内冷空气，否则会影响灭菌效果。净锅内冷空气，否则会影响灭菌效果。 2 2）灭菌结束后，要等温度降为）灭菌结束后，要等温度降为“0 0”，才可打开灭，才可打开灭 菌锅锅盖；菌锅锅盖； 3 3）高压蒸汽灭菌时，须保持高温高压，因此必）高压蒸

24、汽灭菌时，须保持高温高压，因此必 须严格按照操作规程操作，否则易发生意外须严格按照操作规程操作，否则易发生意外 事故。事故。 注意事项：注意事项： 31优选课件 琼脂糖凝胶电泳的制 备及核酸检测 实验二 32优选课件 带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳 一般分为一般分为自由界面电泳自由界面电泳和和区带电泳区带电泳两大类两大类: :自由界面电自由界面电 泳不需支持物，这类电泳目前已很少使用泳不需支持物，这类电泳目前已很少使用; ;而区带电泳而区带电泳 则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物

25、有滤 纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及 硅胶硅胶-G-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝琼脂糖凝 胶电泳胶电泳其优点主要在于操作简单、快速、灵敏。其优点主要在于操作简单、快速、灵敏。 33优选课件 一一. . 实验目的实验目的 1.1.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理掌握琼脂糖凝胶电泳的原理; ; 2.2.学习琼脂糖凝胶电泳的操作。学习琼脂糖凝胶电泳的操作。 34优选课件 二二. 实验原理实验原理 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解， 45开始

26、形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于 琼脂糖的浓度。琼脂糖的浓度。 DNA分子在碱性环境中带分子在碱性环境中带负电荷负电荷，在外加电场作，在外加电场作 用下向用下向正极泳动正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，分子在琼脂糖凝胶中泳动时， 有有电荷效应电荷效应与与分子筛效应分子筛效应。DNA分子量及构型不同，分子量及构型不同， 其泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电其泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电 泳法分离泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应。，主要是利用分子筛效应。 35优选课件 溴化乙锭（溴化乙锭（EB）为扁平状分

27、子，在紫外照射为扁平状分子，在紫外照射 下发射荧光。下发射荧光。EB可与可与DNA分子形成分子形成EB-DNA复合复合 物，其发射的荧光强度较游离状态物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光发射的荧光 强度大强度大10倍以上，且荧光强度与倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正的含量成正 比。用肉眼观察，可检测到比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的以上的DNA。 36优选课件 附 注： 1影响影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素：在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素： 1) DNA分子大小分子大小 2) 琼脂糖浓度：不同的凝胶浓度，分辨不同范围的琼脂糖浓度：不同的凝胶浓度，分辨不同范围的DNA A

28、garose： 0.5%：1-30 kb； 0.7%： 0.8-12 kb； 1.2%: 0.4-7 kb； 1.5%： 0.2-3 kb. 3) DNA构象：构象： 一般迁移速率超螺旋环状一般迁移速率超螺旋环状线状线状DNA单链开环。单链开环。 logNlogN 1 1 V=V= （V V：迁移速率：迁移速率 N N：碱基对数目）：碱基对数目） 37优选课件 4) 所加电压：低电压时，线状所加电压：低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电片段的迁移速率与所加电 压成正比。压成正比。 5) 嵌入染料的存在：降低线性嵌入染料的存在：降低线性DNA迁移率。迁移率。 6) 电泳缓冲液的组成及其离子

29、强度影响电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的迁移率，无离的迁移率，无离 子存在时，核酸基本不泳动，离子强度过大产热厉害，熔子存在时，核酸基本不泳动，离子强度过大产热厉害，熔 化凝胶并导致化凝胶并导致DNA变性，一般采用变性，一般采用1TAE，1TBE， 1TPE（均含（均含EDTA pH8.0）。）。 38优选课件 2溴化乙锭（溴化乙锭（EB）：）：致癌剂，操作时应戴手套，尽致癌剂，操作时应戴手套，尽 量减少台面污染。量减少台面污染。 3电泳指示剂：电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚 蓝（蓝（bromophenol blue, Bb）呈蓝紫色；二甲苯青）呈蓝紫色；二甲苯青 （xylene cyanol, Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚 蓝少，在凝胶中的的迁移率比溴酚蓝慢。蓝少，在凝胶中的的迁移率比溴酚蓝慢。 39优选课件 仪器仪器 微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉 试剂试剂 琼脂糖：琼脂糖：1.0%； 电泳缓冲液（电泳缓冲液（PH8.0）（）（50 TAE 电泳缓冲液：取电泳缓冲液：取 Tris24.2g ，冰醋酸，冰醋酸5.7ml ， 0.25mol/L ED