【大学课件】仪器分析实验

1、仪器分析实验 分子荧光法测定水杨酸和乙酰水杨酸 Cary Eclipse分子荧光光谱仪 分子发光分析法分子发光分析法 荧光分析荧光分析fluorescence analysisfluorescence analysis 磷光分析磷光分析phosphorescence analysisphosphorescence analysis 化学发光分析化学发光分析chemiluminescence chemiluminescence analysisanalysis 该类分析方法与吸收分光光度法有密切关该类分析方法与吸收分光光度法有密切关 系。系。 荧光分析法的应用荧光分析法的应用 荧光分析可应用于物

2、质的定性检测及定量分析。 荧光法主要应用在医学检验、生物医学、药物、环境监测、食 品分析等方面，尤其对体内活性物质及药物代谢物的测定更为 重要。 荧光分析法的特点荧光分析法的特点 1灵敏度高，检出限为灵敏度高，检出限为10-7-10-9g/ml， 比紫外可见分光光度法高比紫外可见分光光度法高101000倍。倍。 2荧光法的选择性强，能吸收光的物质荧光法的选择性强，能吸收光的物质 并不一定能产生荧光，且不同物质由于结并不一定能产生荧光，且不同物质由于结 构不同，虽吸收同一波长，产生的荧光强构不同，虽吸收同一波长，产生的荧光强 度也不同。度也不同。 3它还有用样量少、操作简便等的优点。它还有用样量

3、少、操作简便等的优点。 荧光法的缺点是，由于许多物质不发射荧荧光法的缺点是，由于许多物质不发射荧 光，因此使它的应用范围受到限制。光，因此使它的应用范围受到限制。 荧光分光光度计的结构荧光分光光度计的结构 发光源：采用高压氙灯。发光源：采用高压氙灯。 试样池：荧光分析用的试样池需用低荧光材料，试样池：荧光分析用的试样池需用低荧光材料， 常用石英池，常用石英池， 形状为四面透光的方形。形状为四面透光的方形。 检测器：荧光的强度比较弱，因此要求检测器检测器：荧光的强度比较弱，因此要求检测器 有较高的灵敏度，常用光电倍增管。有较高的灵敏度，常用光电倍增管。 单色器：采用光栅作为单色器。单色器：采用光

4、栅作为单色器。 激发光谱和荧光光谱 任何发射荧光的物质都具有两个特征光谱，即 激发光谱excitation spectrum和荧光光谱 (fluorescence spectrum)。它们是荧光分析中定性和 定量的根底。 荧光物质的最大激发波长ex和最大荧光 波长em是鉴别物质的根据，也是定量测定 时的最灵敏的条件。 一、实验目的一、实验目的 1、学习荧光分析法的根本原理和仪器的操作。、学习荧光分析法的根本原理和仪器的操作。 2、学习荧光分析法进行多组分含量分析的原、学习荧光分析法进行多组分含量分析的原 理及方法。理及方法。 二、根本原理二、根本原理 在稀溶液中，荧光强度在稀溶液中，荧光强度I

5、F与入射光强度与入射光强度I0、 荧光量子效率荧光量子效率F以及荧光物质的浓度以及荧光物质的浓度c等等 有关，可表示为：有关，可表示为： IF= K F I0 bc 式中：式中：K为比例常数，与仪器性能有关；为比例常数，与仪器性能有关； 为摩尔吸光系数；为摩尔吸光系数；b为液层厚度。为液层厚度。 当仪器参数固定后，以最大激发波长的当仪器参数固定后，以最大激发波长的 光为入射光，测定最大发射波长时的荧光光为入射光，测定最大发射波长时的荧光 强度强度IF与荧光物质的浓度与荧光物质的浓度c成正比。成正比。 乙酰水杨酸ASA，即阿司匹林水解能 生成水杨酸SA，而在乙酰水杨酸中，或 多或少都存在着水杨酸

6、。由于两者都有苯环， 也有一定的荧光效率，因而在以三氯甲烷为溶 剂的条件下可用荧光法进行测定。从乙酰水杨 酸和水杨酸的激发光谱和荧光光谱图中可以发 现：乙酰水杨酸和水杨酸的激发波长和发射波 长均不同，利用此性质，可在各自的激发波长 和发射波长下分别测定。 三、仪器与试剂 仪器： Cary Eclipse荧光光度计，容量瓶，移液管 试剂：乙酰水杨酸、水杨酸、三氯甲烷、乙酸均 为级，阿司 匹林药片 四、实验步骤四、实验步骤 1乙酰水杨酸和水杨酸使用液的配制乙酰水杨酸和水杨酸使用液的配制 2激发光谱和荧光光谱的绘制激发光谱和荧光光谱的绘制 3标准曲线的制作标准曲线的制作 4样品的分析样品的分析 五、

7、结果与讨论五、结果与讨论 1、从绘制的水杨酸和乙酰水杨酸激发光谱和发射、从绘制的水杨酸和乙酰水杨酸激发光谱和发射 光谱图上，确定它们的最大激发波长和最大发射波光谱图上，确定它们的最大激发波长和最大发射波 长。长。 水杨酸：最大激发波长水杨酸：最大激发波长 nm；最大发射波长；最大发射波长 nm 乙酰水杨酸：最大激发波长乙酰水杨酸：最大激发波长 nm；最大发射；最大发射 波长波长 nm 2、分别绘制水杨酸和乙酰水杨酸标准曲线，并、分别绘制水杨酸和乙酰水杨酸标准曲线，并 从标准曲线上确定试样溶液中水杨酸和乙酰水杨酸从标准曲线上确定试样溶液中水杨酸和乙酰水杨酸 的浓度，并计算每片阿司匹林药片中它们的

8、含量的浓度，并计算每片阿司匹林药片中它们的含量 mg。 六、本卷须知六、本卷须知 1、比色皿使用之前应清洗干净。假设比色皿很、比色皿使用之前应清洗干净。假设比色皿很 脏，清洗方法为：先将比色皿置于铬酸洗液中浸脏，清洗方法为：先将比色皿置于铬酸洗液中浸 泡半小时左右，再用蒸馏水洗净，凉干留用。泡半小时左右，再用蒸馏水洗净，凉干留用。 2、比色皿用完之后，应先用无水乙醇清洗，后、比色皿用完之后，应先用无水乙醇清洗，后 再用蒸馏水洗净，凉干后收于比色皿盒中。再用蒸馏水洗净，凉干后收于比色皿盒中。 3、定期清理仪器的比色局部，以保持仪器内部、定期清理仪器的比色局部，以保持仪器内部 的整洁和洁净。的整洁和洁净。 七、思考题七、思考题 1、在荧光测定中，为什