免疫学防治与诊断课件

1、2021-7-16 第四节第四节 免疫学应用免疫学应用 应用免疫学理论阐明应用免疫学理论阐明 疾病的发病机制和发展规律疾病的发病机制和发展规律 应用免疫学原理和技术应用免疫学原理和技术 诊断和防治疾病诊断和防治疾病 重点：常见免疫学防治方法和常见重点：常见免疫学防治方法和常见 的免疫学检测技术。的免疫学检测技术。 2021-7-16 免疫学防治免疫学防治 2021-7-16 特异性免疫类型 自然自然 免疫免疫 人工人工 免疫免疫 自然主动免疫：自然感染自然主动免疫：自然感染 自然被动免疫：自然被动免疫： IgG通过胎盘、初乳通过胎盘、初乳SIgA 人工自动免疫：接种疫苗、类毒素人工自动免疫：接

2、种疫苗、类毒素 人工被动免疫：动物免疫血清、胎盘球蛋白等人工被动免疫：动物免疫血清、胎盘球蛋白等 2021-7-16 （一）免疫学预防（一）免疫学预防 1.1.人工免疫的概念和种类人工免疫的概念和种类 通过人工的方法使机体获得免疫力，包括人工自动免通过人工的方法使机体获得免疫力，包括人工自动免 疫、人工被动免疫。疫、人工被动免疫。 （1 1）人工自动免疫）人工自动免疫：是指给机体接种疫苗、类毒素等抗原：是指给机体接种疫苗、类毒素等抗原 物质物质, ,刺激机体产生特异性免疫应答，以获得免疫力的方刺激机体产生特异性免疫应答，以获得免疫力的方 法，也称预防接种。主要用于传染病的特异性预防。法，也称预

3、防接种。主要用于传染病的特异性预防。 （2 2）人工被动免疫）人工被动免疫：是给人体输入抗体等制剂，使机体获：是给人体输入抗体等制剂，使机体获 得特异性免疫力。临床多用于治疗和紧急预防。得特异性免疫力。临床多用于治疗和紧急预防。 2021-7-16 人工自动免疫与人工被动免疫的比较人工自动免疫与人工被动免疫的比较 比较类别比较类别 人工人工自自动免疫动免疫人工被动免疫人工被动免疫 输入物质输入物质抗原（疫苗、类毒素）抗原（疫苗、类毒素） 抗体、活化的淋巴细抗体、活化的淋巴细 胞、细胞因子等胞、细胞因子等 接种次数接种次数1-3次次1次次 免疫力出现时间免疫力出现时间慢（慢（23周）周）快（注射

4、即生效）快（注射即生效） 免疫力维持时间免疫力维持时间较长，数月较长，数月数年数年较短，较短，23周周 用途用途多用于预防多用于预防 多用于治疗或紧急预多用于治疗或紧急预 防，调节机体免疫功防，调节机体免疫功 能，治疗肿瘤能，治疗肿瘤 2021-7-16 2.人工人工 （3） 2021-7-16 种类种类死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗 制剂特点制剂特点灭活，毒强株灭活，毒强株活，弱毒或无毒株活，弱毒或无毒株 接种途径接种途径多采取皮下注射多采取皮下注射多模拟自然感染途径、少数经多模拟自然感染途径、少数经 皮下注射皮下注射 制品类型制品类型可多种疫苗混合使用可多种疫苗混合使用一般单独使用一般单独使用

5、接种量及次数接种量及次数量大，量大，2-32-3次（次（7-107-10天）天）用量小，用量小，1 1次次 保存及有效期保存及有效期易保存，稳定，有效期易保存，稳定，有效期1 1年年不易保存，稳定性差，不易保存，稳定性差，44数周数周 免疫效果免疫效果较差，维持数月较差，维持数月-2-2年年较好，维持较好，维持3-53-5年甚至更长时间年甚至更长时间 副作用副作用较大较大, ,但无毒力回复突变但无毒力回复突变较小较小, ,但有毒力回复突变但有毒力回复突变 灭活疫苗与减毒疫苗比较灭活疫苗与减毒疫苗比较 2021-7-16 3.3.人工被动免疫生物制品人工被动免疫生物制品 抗毒素：外抗毒素：外/

6、/类毒素类毒素马马AbAb 人丙种球蛋白：血浆和胎盘丙种球蛋白人丙种球蛋白：血浆和胎盘丙种球蛋白 细胞因子细胞因子 单抗单抗/ /基因工程抗体基因工程抗体 人工被动免疫注意事项人工被动免疫注意事项 S注意防止超敏反应注意防止超敏反应 S早期和足量早期和足量 S不滥用丙球不滥用丙球 温馨 提示 2021-7-16 2021-7-16 5.计划免疫计划免疫 我国儿童计划免疫程序我国儿童计划免疫程序 年龄年龄疫苗疫苗年龄年龄疫苗疫苗 出生时出生时BCGBCG，乙肝疫苗（第，乙肝疫苗（第1 1针）针）6 6个月个月乙肝疫苗（第乙肝疫苗（第3 3针）针） 1 1个月个月乙肝疫苗（第乙肝疫苗（第2 2针）

7、针）8 8个月个月麻疹疫苗（初种）麻疹疫苗（初种） 2 2个月个月三价脊灰疫苗（初服）三价脊灰疫苗（初服）1.51.5岁岁三价脊灰疫苗（加服），三价脊灰疫苗（加服）， 百白破（加强）百白破（加强） 3 3个月个月三价脊灰疫苗（复服），三价脊灰疫苗（复服）， 百白破（第百白破（第1 1针）针） 4 4岁岁三价脊灰疫苗（加服），三价脊灰疫苗（加服）， 麻疹疫苗（复种）麻疹疫苗（复种） 4 4个月个月三价脊灰疫苗（复服），三价脊灰疫苗（复服）， 百白破（第百白破（第2 2针）针） 7 7岁岁BCGBCG（复种），麻疹疫苗（复种），麻疹疫苗 （复种），百白破（加强）（复种），百白破（加强） 5 5个月

8、个月百白破（第百白破（第3 3针）针）1212岁岁BCGBCG（农村）（农村） 2021-7-16 人工自动免疫的注意事项人工自动免疫的注意事项 接种对象：免疫功能低下、与病原体接触机会多、易感者。 接种剂量、次数和间隔时间：死疫苗：23次，间隔710 天。活疫苗接种一次。类毒素接种2次，间隔需46周。 接种途径：死疫苗：皮下；活疫苗：皮内注射、皮上划痕和 自然途径接种，脊髓灰质炎疫苗以口服为佳，流感、腮腺炎 疫苗以雾化吸入为好。 接种后反应：常于接种后24小时发生，表现为局部红肿、疼 痛、淋巴结肿大。 禁忌症：高热、严重心血管疾病、急性传染病、恶性肿瘤、 甲亢、活动性肺结核、糖尿病和免疫缺陷

9、病等患者，均不宜 接种疫苗。 2021-7-16 （二）免（二）免 疫疫 治治 疗疗 概念：指针对机体低下或亢进的免疫状态，概念：指针对机体低下或亢进的免疫状态， 人为地增强或抑制机体的免疫功能达到治疗人为地增强或抑制机体的免疫功能达到治疗 疾病的治疗方法。疾病的治疗方法。 1.抗体免疫治疗：抗体免疫治疗： 单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体 3.药物治疗药物治疗 免疫增强疗法、免疫抑制疗法免疫增强疗法、免疫抑制疗法 2.细胞免疫治疗细胞免疫治疗 造血干细胞、过继免疫、肿瘤细胞疫苗造血干细胞、过继免疫、肿瘤细胞疫苗 2021-7-16 （二）免（二）免 疫

10、疫 治治 疗疗 概念：指针对机体低下或亢进的免疫状态，概念：指针对机体低下或亢进的免疫状态， 人为地增强或抑制机体的免疫功能达到治疗人为地增强或抑制机体的免疫功能达到治疗 疾病的治疗方法。疾病的治疗方法。 1 1、被动免疫治疗：、被动免疫治疗： 被动增强：抗体、细胞免疫、小分子免疫肽被动增强：抗体、细胞免疫、小分子免疫肽 间接作用：过继免疫间接作用：过继免疫 2 2、免疫增强疗法、免疫增强疗法 免疫抑制疗法免疫抑制疗法 2021-7-16 二、二、 免疫学诊断免疫学诊断 目的：目的：用于多种用于多种免疫性疾病免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷（感染性疾病、免疫缺陷 病、超敏反应、自身免疫病、免疫

11、增殖病、移病、超敏反应、自身免疫病、免疫增殖病、移 植排斥反应和肿瘤等）的植排斥反应和肿瘤等）的诊断、疗效评估、发诊断、疗效评估、发 病机制探讨病机制探讨、以及、以及对抗原性物质或免疫细胞的对抗原性物质或免疫细胞的 定性、定量，定性、定量，对细胞因子、粘附分子及细胞受对细胞因子、粘附分子及细胞受 体的检测等。体的检测等。 方法：方法：检测抗原和抗体的体外实验检测抗原和抗体的体外实验 免疫细胞的测定免疫细胞的测定 （一）体外免疫学检测（一）体外免疫学检测 1. 1.体液免疫检测体液免疫检测 抗原与相应抗体在体内外均可发生特异性结抗原与相应抗体在体内外均可发生特异性结 合，体外可出现凝集、沉淀等反

12、应现象。据此可合，体外可出现凝集、沉淀等反应现象。据此可 利用已知的抗原（抗体）检测未知的抗体（抗利用已知的抗原（抗体）检测未知的抗体（抗 原），抗原抗体结合反应也称为血清学反应。具原），抗原抗体结合反应也称为血清学反应。具 有特异性、可逆性、可见性、比例性等特点。有特异性、可逆性、可见性、比例性等特点。 常见的血清学反应有凝集反应、沉淀反应及常见的血清学反应有凝集反应、沉淀反应及 免疫标记技术等。免疫标记技术等。 定义：定义：颗粒性抗原颗粒性抗原+ +抗体抗体凝集现象凝集现象 （颗粒性抗原：细菌、细胞等）（颗粒性抗原：细菌、细胞等） 定义：定义：可溶性抗原可溶性抗原+ +抗体抗体沉淀现象沉淀

13、现象 （可溶性抗原：血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等）（可溶性抗原：血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等） 大多沉淀反应是用大多沉淀反应是用半固体琼脂凝胶半固体琼脂凝胶为介质，进行为介质，进行 琼脂扩散故也称免疫扩散。琼脂扩散故也称免疫扩散。 单向琼脂扩散试验单向琼脂扩散试验 是将一定量已知抗体混是将一定量已知抗体混 于琼脂凝胶中制琼脂板，于琼脂凝胶中制琼脂板， 在适当位置打孔后将抗在适当位置打孔后将抗 原加入孔中扩散。抗原原加入孔中扩散。抗原 在扩散过程中与凝胶中在扩散过程中与凝胶中 的抗体相遇，形成以抗的抗体相遇，形成以抗 原孔为中心的沉淀环，原孔为中心的沉淀环， 环的直径与抗原含量成环的

14、直径与抗原含量成 正比相关。本法常用于正比相关。本法常用于 测定血清测定血清IgGIgG、IgMIgM、IgA IgA 和和 C C 3 3等的含量。 等的含量。 含抗体的凝胶含抗体的凝胶沉淀环沉淀环 双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验 是将抗原与抗体分别加入琼脂是将抗原与抗体分别加入琼脂 凝胶的小孔中，二者自由向周凝胶的小孔中，二者自由向周 围扩散并相遇，在比例合适处围扩散并相遇，在比例合适处 形成沉淀线。如果反应体系中形成沉淀线。如果反应体系中 含两种以上的抗原抗体系统，含两种以上的抗原抗体系统， 则小孔间可出现两条以上的沉则小孔间可出现两条以上的沉 淀线。本法常用于抗原或抗体淀线。本法常用

15、于抗原或抗体 的定性的定性 、组成和两种抗原相、组成和两种抗原相 关性分析的检测。关性分析的检测。 对流免疫电泳对流免疫电泳 是先将待侧血清标本作琼脂 凝胶电泳，血清中各蛋白组 分被分成不同的区带，然后 与电泳方向平行挖一小槽， 加入相应的抗血清，把分成 区带的蛋白抗原成分作双向 免疫扩散，在各区带相应的 位置形成沉淀弧。该法常用 于血清蛋白种类分析，以观 察Ig的异常增多或缺失。 定义：定义：是用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗是用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗 原或抗体的试验技术。通过检测标记物来反映抗原抗体反原或抗体的试验技术。通过检测标记物来反映抗原抗体反 应情况，间接测出待

16、检抗原或抗体的含量。本法特异性强，应情况，间接测出待检抗原或抗体的含量。本法特异性强， 敏感性高。敏感性高。 主要的免疫标记物主要的免疫标记物 类别类别 标记物标记物 用途用途 荧光素荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化免疫组化 镧系元素螯合物镧系元素螯合物 免疫分析测定免疫分析测定 放射性核素放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定免疫分析测定 125I、131I 酶酶 HRP、AP 免疫组化免疫组化 免疫分析测定免疫分析测定 化学发光物化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定免疫分析测定 金属颗粒金属颗粒 胶体金、铁蛋白胶体金、铁蛋白 免疫

17、组化免疫组化 免疫分析测定免疫分析测定 是用酶（常用的有是用酶（常用的有辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶，HRPHRP和碱性磷酸酶，和碱性磷酸酶， APAP) ) 标记的抗体进行的抗原抗体反应。标记的抗体进行的抗原抗体反应。EIAEIA将抗原抗体反将抗原抗体反 应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于 底物后显色来判定结果。底物后显色来判定结果。 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验( ( ELISA) ELISA) ：是将已知的抗原或抗体吸是将已知的抗原或抗体吸 附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。用附在固相载体表面，使抗原抗

18、体反应在固相表面进行。用 洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹心法、间洗涤法将液相中游离成分洗除。主要有双抗体夹心法、间 接法等。测定可溶性抗原或抗体接法等。测定可溶性抗原或抗体 酶免疫组化法：酶免疫组化法：测定组织中或细胞表面的抗原。测定组织中或细胞表面的抗原。 概念：概念：用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素，用荧光素（常用的有异硫氰酸荧光素， FITC) FITC) 与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本与抗体连接成荧光抗体，再与待测标本 的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体 复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴复合物散发出荧光，借此对标本中

19、的抗原作鉴 定和定位。有定和定位。有直接、间接及补体结合直接、间接及补体结合荧光法。荧光法。 直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染直接荧光法：将荧光素直接标记抗体作标本染 色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检色。该法的优点是特异性强，但其缺点是每检 测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。测一种抗原必须制备相应的荧光抗体。 间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用间接荧光法：用一抗与标本中的抗原结合，再用 荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比荧光素标记的二抗染色。该法的优点是敏感性比 直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多直接法高，制备一种荧光素标记的二抗可用于多 种抗原的检测，

20、但非特异性荧光亦会增加。种抗原的检测，但非特异性荧光亦会增加。 补体结合荧光免疫法：此法是在间接法的第一步补体结合荧光免疫法：此法是在间接法的第一步 抗原抗原抗体反应时加入补体，使之与抗原抗体反应时加入补体，使之与抗原抗抗 体复合物结合；再用荧光素标记的抗体复合物结合；再用荧光素标记的抗C3C3抗体进行抗体进行 示踪。示踪。 (RIA) 是用放射性核素标记抗原进行的免疫学检测技是用放射性核素标记抗原进行的免疫学检测技 术。它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗术。它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗 体反应的特异性结合，使检测的敏感性达体反应的特异性结合，使检测的敏感性达pgpg水水 平。常用于

21、标记的放射性核素有平。常用于标记的放射性核素有I I125 125和 和I I131 131。 。 常用于胰岛素、生长激素、药物等微量物质的常用于胰岛素、生长激素、药物等微量物质的 测定。测定。 Ag* Ab Ag 标记抗原标记抗原 特异性抗体特异性抗体 待测抗原待测抗原 ( Ag*-Ab)+ (Ag-Ab) 抗原抗体复合物抗原抗体复合物 分离分离Ag*-Ab 和游离和游离Ag* 从标准曲线上读知含量从标准曲线上读知含量 测定测定Ag*-Ab和和/或游离或游离Ag*放射性放射性 放射免疫测定法放射免疫测定法(RIA)示意图示意图 是以硝酸纤维薄膜为载体吸附抗原，用胶是以硝酸纤维薄膜为载体吸附抗

22、原，用胶 体金标记代替酶标抗体的免疫标记技术。体金标记代替酶标抗体的免疫标记技术。 斑点金免疫层析实验（一步金法）：斑点金免疫层析实验（一步金法）：HCGHCG 2.2. 细胞免疫检测细胞免疫检测 n免疫细胞数量检测免疫细胞数量检测 n免疫细胞的功能检测免疫细胞的功能检测 淋巴细胞类型和数量的测定淋巴细胞类型和数量的测定 （1）E花环试验：E花环试验可用于检测T细 胞数目。EA花环试验可用于检测B细胞数目。 （2）荧光免疫法：常采用间接免疫荧光法。 （3）流式细胞术：用流式细胞仪（FCM)。 花环试验示意图花环试验示意图 免疫细胞功能的测定免疫细胞功能的测定-T-T细胞功能测定细胞功能测定 体

23、内法体内法 ： 用生物抗原或用生物抗原或 化学抗原作皮化学抗原作皮 内试验。内试验。 OT-PPD OT-PPD皮试皮试 SD-SK SD-SK皮试皮试 体外法体外法 ： T细胞增殖试细胞增殖试 验（淋巴细胞验（淋巴细胞 转化试验）转化试验） 形态学检查形态学检查 3H-TdR掺入掺入 法法 淋巴细胞转化试验（淋巴细胞转化试验（形态学示意图形态学示意图） 原理：人原理：人T T细胞表面有细胞表面有PHAPHA或或ConAConA受体，受体，T T细胞在体细胞在体 外受外受PHAPHA或或ConAConA的刺激后能转化为体积较大、代谢的刺激后能转化为体积较大、代谢 旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，

24、以此测定旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定T T细胞细胞 的功能。的功能。 PHA刺激 4872小时 培养 液 3H-TdR PHA 淋巴细胞 全血 分层 液 离 心 过滤 测量放射性 淋巴细胞增殖试验（淋巴细胞增殖试验（3 3H-TdRH-TdR掺入法）示意图掺入法）示意图 靶细胞 51Cr 洗 涤 去除游 离的51Cr 效应细胞 测量上清液 中释放的51Cr 混合培养4-6 小时 细胞毒试验（细胞毒试验（51 51Cr Cr释放法）示意图释放法）示意图 （二）体内免疫学检测（二）体内免疫学检测 1.1.体液免疫检测体液免疫检测 （1 1）型超敏反应皮肤试验：型超敏反应皮肤试验： 变应原：变应原： 青霉素青霉素 免疫血清免疫血清 植物花粉浸液植物花粉浸液 方