肿瘤基因突变检测标本要求

1、肿瘤基因突变检测标本 病理评估合格的 标本适用于EGFR 基因突变检测 建议采用灵敏度 高的ARMS检测 方法 肺叶切除 肺段切除 支气管镜活 检 细针穿刺活 检 血浆 血清 支气管刷片 胸水 痰 手术 标本 活检 标本 血液学 标本 细胞学 标本 用于突变检测的标本用于突变检测的标本 1. Dacic S. Adv Anat Pathol 2008; 15(4):241-247. 2. Sequist LV, et al. Clin Cancer Res 2006; 12(14S):4403s-4406s. 3. Bai H, et al. J Clin Oncol 2009; 27(16)

2、:2653-2659. 肿瘤基因肿瘤基因突变检测突变检测标本类型标本类型 冰冻组织冰冻组织 外科手术标本：最好标本，可得高质量肿瘤DNA 支气管镜、穿刺活检测标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好 固定包埋组织固定包埋组织 外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，但DNA片段化 支气管镜、穿刺活检测标本：可得肿瘤DNA量少且片段化 细胞学标本细胞学标本 胸水、肺泡冲洗液和痰液标本：肿瘤细胞含量不确定，通常很少 血液标本血液标本 血清、血浆标本：含肿瘤DNA，但含量不稳定，DNA片段化 循环血肿瘤细胞：可得较高质量肿瘤DNA，但量很少 不同类型标本处理方式不同类型标本处理方式 新鲜组织标本新鲜组织标本： 1

3、、迅速低温放置，如有条件可放置-80或者液氮保存，如果没有条件可使用-20保 存，但是保存时间不宜太久； 2、放入组织保存液中保存，组织保存液的能渗透0.5cm厚度的组织，因此用组织保存液 保存时，建议组织不宜过大。核酸在组织保存液中 37 稳定存放1天，25 稳定存放一 周，4 1个月或20 长期存放 石蜡组织标本石蜡组织标本 1、手术、穿刺、活检标本等放入10%中性福尔马林中固定后制作成蜡块，可保存数年之久 。(病理科常规处理样本方式) 细胞学标本细胞学标本 1、胸水样本、心包积液、脑脊液等，建议在收到标本后两个小时内离心收集沉淀细胞进行 检测，如来不及操作可离心后将沉淀冻存至-20保存，

4、等使用时取出；亦可将沉淀包埋成 蜡块后再切片检测； 2、或者将样本直接放置4保存过夜再离心收集沉淀，可能会一定程度影响DNA的完整性 ，但一般不影响实验结果。细胞学标本建议涂片后经病理诊断含有肿瘤后在进行检测。 血液标本血液标本 1、血液标本收集后使用EDTA抗凝，由于血浆、血清中游离核酸以及循环肿瘤细胞量极少 ，建议尽可能在收集标本后2小时内进行核酸提取，以避免核酸更深降解。 标本通常较大，能提供足够的肿瘤组织用于检测 标本可以是冰冻或福尔马林固定组织 手术标本 标本接收、固定组织处理、石蜡包埋切片及H Rubbish Out 选择正确、合适的肺癌组织，是保证突变检测成功第一步及重要的选择正确、合适的肺癌组织，是保证突变检测成功第一步及重要的步骤步骤 诊断：确保肿瘤组织是非小细胞性肺癌 肿瘤量：确保有足够的肿瘤组织用于突变检测 尽量保证200-400个肿瘤细胞 对于技术成熟的实验室，可以尝试进行200个肿瘤细胞的标本检测 5-10uM 10张切片能满足突变检测需求 当细胞数较少时,可以适当增加切片数,以满足检测需求 肿瘤比例：标识肿瘤丰富的区域，提高肿瘤细胞比例用