实验三 组织分离法 2

1、实验三实验三 组织分离法组织分离法 组织分离法（离析法）组织分离法（离析法） o 组织分离法组织分离法：是利用物理（机械）的方法或化学的方：是利用物理（机械）的方法或化学的方 法（如药品或者酶的作用）把生物细胞间的胞间层溶法（如药品或者酶的作用）把生物细胞间的胞间层溶 解，使生物组织间的细胞分离开来，从而得到单个完解，使生物组织间的细胞分离开来，从而得到单个完 整细胞，以便在显微镜下观察细胞的立体形态结构。整细胞，以便在显微镜下观察细胞的立体形态结构。 o 缺点：缺点：由于组织的细胞间彼此分离，细胞间的关系无由于组织的细胞间彼此分离，细胞间的关系无 法显示，也就不可能了解整个组织的结构。法显示

2、，也就不可能了解整个组织的结构。 一、实验目的一、实验目的 o 学习物理（机械）分离制片方法；学习物理（机械）分离制片方法； o 学习化学分离制片方法。学习化学分离制片方法。 二、实验材料及用品二、实验材料及用品 o 实验材料实验材料：叶片（新鲜和固定）、南瓜茎。：叶片（新鲜和固定）、南瓜茎。 o 实验用具实验用具：载、盖玻片；显微镜；镊子；离心：载、盖玻片；显微镜；镊子；离心 机等。机等。 o 实验药品实验药品：蒸馏水、梯度酒精、：蒸馏水、梯度酒精、 二甲苯二甲苯+ 纯酒精，纯酒精，Naocl， 10%铬酸铬酸+ 10%硝硝 酸离析液，二甲苯，酸离析液，二甲苯，I-KI染液，染液，1%番红水

3、溶番红水溶 液，液，1%番红酒精溶液、加拿大树胶。番红酒精溶液、加拿大树胶。 三、实验步骤（一）三、实验步骤（一）表皮制片步骤表皮制片步骤 临时装片法临时装片法 选材选材 撕取下表皮撕取下表皮 染色染色 封固封固 镜检镜检 新鲜材料，靠近中脉部分新鲜材料，靠近中脉部分 1 （I-KI染色染色2min） 加盖玻片加盖玻片 置载玻片，加一滴置载玻片，加一滴 水，充分展开水，充分展开 三、实验步骤（一）三、实验步骤（一）表皮制片步骤表皮制片步骤 永久制片法永久制片法 选材选材 固定（固定（FAA固定液，固定液，24h） 清洗清洗 Naocl 撕取下表皮撕取下表皮 染色（染色（1%番红水溶液番红水溶液

4、 30min-1.5h） 水洗水洗（洗去浮色，一次即可）（洗去浮色，一次即可） （I-KI染色）染色） 分色（用盐酸水）分色（用盐酸水） 水洗（洗去酸液）水洗（洗去酸液） 粘片、烘片粘片、烘片 脱水（脱水（50%，70%，80%，95%，100%， 二甲苯二甲苯+ 100%酒精，各酒精，各2min） 透明（二甲苯）透明（二甲苯） 封固封固 镜检镜检 靠近中脉部分靠近中脉部分 染色期间观察如染色液干涸，再滴加染色期间观察如染色液干涸，再滴加 载玻片上滴一滴蛋白黏贴剂，期间加入一滴载玻片上滴一滴蛋白黏贴剂，期间加入一滴 水，移入叶表皮，水分吸干后放入烘箱烘干水，移入叶表皮，水分吸干后放入烘箱烘干

5、2 3 4 5 放入放入30-40度温箱，周边泛白度温箱，周边泛白 三、实验步骤（二）三、实验步骤（二）离析制片步骤离析制片步骤 取材取材 加热加热 离析（离析（10%铬酸：铬酸：10%硝酸硝酸=1:1 离析液）离析液） 水洗水洗 染色（染色（1%番红的番红的50%酒精溶液酒精溶液 4-24h或更长）或更长） 水洗（水洗（7%AL，1-2次）次） 脱水脱水 （50%， 70%， 85%， 95% AL 各各5min，100%AL，两次，每次，两次，每次5min） 透明透明 （二甲苯二甲苯+ 100%酒精，二甲苯酒精，二甲苯 各各5min） 封藏封藏 将茎切成将茎切成1cm长，长， 撕成细丝状撕成细丝状 离析液为材料的离析液为材料的20倍，倍，30-40的温箱中的温箱中24-48h 水洗数次，在离水洗数次，在离 心管中进行心管中进行 四、实验结果四、实验结果 o 表皮制片：表皮细胞的形态？气孔器的类型？表皮制片：表皮细胞的形态？气孔器的类型？ o 离析制片：南瓜茎的导管及木纤维形态？离析制片：南瓜茎的导管及木纤维形态？ 气孔器气孔器 气孔器类型 无规则型 不等型 平列型 横列型 离析法离析法 杨茎的木纤维和导管分子杨茎的木纤维和导管分子 五、作业五、作业 o 实验完毕，每人交制好的永久玻片标本实验完毕，每人交制好的永久玻片标本2片，片， 在标签纸写上玻片名