中药制剂分析(1)1

1、08药贸中药制剂分析题型：填空101 单选261 多选122 简答45（注意分点回答） 计算（3题共20 ，各5 7 8）课上为上课老师有重点讲，最后一节没有画的，大家可以去了解和掌握下。计算题：注意：单位换算；供试品是否有稀释；最终结果的表达方式；标准铅溶液的量要记住一、公式（Ax 和AR 分别为供试品和对照品溶液的吸光度）1、2、（有对照品）3、或（无对照品）4、外标一点法：这里的A为峰面积，工作曲线过原点5、 （片剂的含量表示）二、例题：（一）、杂质限量计算：例题：取本品（黄连上清丸）水丸或水蜜丸适量，研碎，精密称定1.0g，炽灼到完全灰化，取残渣及2.0ml标准铅溶液（标准铅溶液每ml

2、含10g Pb），依法检查重金属 .J计算黄连上清丸中重金属限量。解： 重金属限量（L）=0.002%例题：取红粉0.5克，加水适量与硝酸3ml，溶解后，加水稀释至约40ml，依法检查其氯化物。如果标准氯化钠（10ug/ml）取量为3ml，杂质限量是多少？解：（二）、紫外可见分光光度法中含量测定的方法：对照品比较法和吸收系数法1、朗伯-比尔定律（帮助理解公式和计算）：A=ELc A为吸光度E为吸收系数L为液层厚度c为溶液的溶度E为吸收系数，即单位浓度、单位液层厚度时的吸光度。E有两种表示方式：1 摩尔吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1mol/L，厚度为1cm时的吸光度，用表示2 百分吸收系

3、数：是指在一定波长下，溶液浓度为1%（1g/100ml），厚度为1cm时的吸光度，用表示。两者之间的关系为：=(M/10) ，其中 M为吸光物质的相对分子质量（1）对照品比较法（画线要记住，其他应用于计算）1. 原理：在同样条件下配制对照品溶液和供试品溶液，在规定波长下测定两者的吸光度，则可计算出供试品中被测成分的浓度或含量。2. 推导：由A=ELc得得得最终的公式Ax 和AR 分别为供试品和对照品溶液的吸光度，CR 为对照品溶液的溶度，D为稀释体积，m为供试品的取样量。使用时应注意对照品溶液的浓度应在供试品溶液中待测组分浓度的100%10%之间，所用溶剂也应完全一致。（2）吸收系数法本法优点

4、是无需对照品，方法简便。但使用时，应注意仪器的校正和检定。1. 原理：该法是测定供试品溶液在规定波长处的吸光度（A），根据被测成分的吸收系数（注意其单位为1g/100ml） 计算其含量。2. 推导过程：例题1、Wg样品溶于25ml量瓶，取5ml10ml量瓶，取1ml10ml量瓶，测得A为0.461，为728，计算样品中待测量（用mg/g表示）解：第一步：Wg样品25ml量瓶稀释25倍，第二步：取5ml10ml量瓶，稀释10/5倍，第三步：取1ml10ml量瓶，稀释10/1倍，所以稀释体积D为=500倍 这边的L为1厘米 下面有是因为最终的表达形式为用mg/g表示 的单位为1g/100ml含量%

5、=例题2、精密称量鱼干片粉末0.2502g，置于小烧杯中加水2ml，在不断搅拌下滴加氢氧化钠0.1mol/L的4.5ml，使全溶，转入50ml量瓶中，加水至刻度，精密量取15ML，置于50ml量瓶中，加10%乙醇至刻度，在精密量取1ML，置于25ML量瓶中，加HCl0.02mol/l至刻度，照分光光度法在276nm波长处测得吸光度0.341，按黄芩苷吸收系统数为631，试计算本品中总黄酮（以黄芩苷）的含量。解： 含量%=例题3、在金丸中盐酸小檗碱含量测定：粉末1.0250g，置索氏提取器，加盐酸-甲醇（1:100）适量，加热回流主提取无色，将提取液转移至50ml量瓶中，加盐酸-甲醇至主刻度，摇

6、匀。精密量取5ml，置氧化铝柱上，用乙醇25ml洗脱，收集洗脱液，置于50ml量瓶，加乙醇至刻度，摇匀，精密量取2ml，置于50ml量瓶，用0.05mol/L硫酸稀释主刻度，摇匀。照分光光度法，在345nm波长处称得吸光度为0.382，另外测得本品失重为7.23%，已知 为728，本品按干燥计算。解：未干燥品取量样为W样（g），则每一克供试品含总生物碱以盐酸小檗碱计算，含量（mg/g)为大于60mg/g,所以合格（三）GC和HPLC的定量方法：外标一点法：这里的A为峰面积 例题1、Wg样品25ml量瓶，对照品（C对=72ug/ml）,点样量为10ul,A样=638214，A对=845231，计

7、算样品中待测量（用mg/g表示）解：例题2、用薄层吸收扫描法测定黄连中小檗碱含量，由方法学考察证明工作曲线过原点。现进行如下实验，在同一薄板上，分别取浓度为2.00ug/ul对照品溶液和供试品溶液（取生药黄连0.3000克，提取后定容10.00ml）点样体积为2ul,由薄层扫描仪测得峰面积为As=58541.80，Ax=78308.3，计算黄连药材中小檗碱含量。解：工作曲线过原点，故用外标一点法定量。含量%（三）、标示量%的计算：（还要知道标示量的适用范围）片剂的含量常以每片中含被测成分的重量表示。若有效成分明确，结构已知，规格具体，则常采用按标示量计算的百分含量，以此表示每片中有效成分测得的

8、实际含量与标量的符合程度。推导过程为：的最终的公式例题：样品40片（0.12ml/片）总重4.2002g研细 精称1.2012g（相当于莨菪碱1.44mg） 25ml量瓶 +缓冲液至刻度续滤液供试品 供试品2ml、对照品（75ug/ml）2ml分液漏斗+缓冲液+溴甲酚液+10ml氯仿提取 分离氯仿层 25ml量瓶 415nm下 样品A：0.421；对照品A：0.613，计算标示量%。解答：注意标示量为规格即0.12ml/片 ，即一片含莨菪碱0.12mg平均片重= 由 得 标示量%= 第一章 绪论一、中药制剂分析的内容1、中药制剂鉴别（判断真伪的定性分析）2、中药制剂检查（是制剂的稳定性和安全性

9、的重要依据）3、中药制剂含量测定（评价制剂质量优劣的重要手段）二、中药制剂分析工作的基本程序1、取样：原则是均匀合理，所取的样品具有代表；2、供试品溶液的制备；3、供试品溶液的测定：鉴别、检查、含量测定；4、原始记录和检验报告；三、我国现行的国家药品标准包括中华人民共和国药典和局（部）颁药品标准。四、中国药典分为三部，主要内容分为凡例、正文、附录和索引。1. 凡例的作用：凡例是解释和正确使用中国药典进行质量的基本指导原则，对一些与标准有关的、共性的、需要明确的问题以及采用的计量单位、符号、术语等，用条文加以规定，以帮助理解和掌握药典正文，避免在正文中重复。2. 凡例中某些共性规定：1 未规定上

10、限时，系指不超过101.0% 2 乙醇未指明浓度时，均系指95%（ml/ml)的乙醇溶液。3 “精密称定”（用分析天平）系指称取重量应准确至所取重量的千分之一；“称定”（用电子秤）系指称取重量应准确至所取重量的百分之一；“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求；“量取”系指可用量筒或按照量取体积的有效数位选用量具；取用量为“约”若干时，系指量取不得超过规定量的10%。4 恒重系指供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下的重量。第二章 中药制剂鉴别目的及方法：中药制剂的鉴别是用来判断该制剂的真伪，主要包括性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别。、性状中的物理常数

11、：包括相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度或旋光度、折光率、黏度、吸收系数、碘值、皂值、酸值。、显微鉴别的适用范围：用于以原料药粉碎成细粉后直接制成的制剂或添加部分原料药粉末的制剂的鉴别，如散剂。、理化鉴别 （主要包括化学反应法、微量升华法、色谱分析法、光谱法和毛细管电泳法）1、 化学反应法 1、特点（了解）：操作简单，反应迅速，适合某种或某类化学成分官能团的反应，无法对各成分进行逐一鉴别2、常用的鉴别反应（与第六章结合）：蒽醌类成分遇碱性试剂的呈色反应，黄酮类成分的盐酸-镁粉反应，香豆素和内酯类成分的异羟肟酸铁反应，酚类成分的三氯化铁反应，皂苷类成分的Liebermann-Burchard反应

12、，氨基酸的茚三酮反应，糖类的a-萘酚-浓硫酸反应，以及生物碱的碘化铋钾沉淀试剂反应，鞣质与明胶的沉淀反应等。二、色谱分析法 是对混合物进行分离分析的有效方法， 包括TLC、气相色谱法（GC)、 高效液相色谱法(HPLC)和纸色谱法（一）薄层色谱法（TCL）重点1、TCL作为目前中药制剂鉴别的主要方法，是目前应用频率最高的中药鉴别方法。2、特点：适用于成分复杂的中药制剂的鉴别，设备简单、操作快捷、专属性强、分离和分析同步，缺点是影响因素多、重现性差。3、操作流程：铺板点样展开显色与检视记录，活化的条件为：在110活化30min4、影响薄层色谱鉴别的主要因素（1）供试品溶液的制备（2）薄层板的选择

13、 ：不同生产厂家或不同批次的商品预制板质量不可能完全相同，常常影响分析结果的重现性（3）展开剂的选择：理想的Rf在0.2-0.8之间，对于吸附色谱，展开剂的极性愈大，对同一化合物Rf愈大，注意此Rf指待鉴别成分的。（4）展开剂蒸气的饱和：作用为减少边缘效应，可采取的办法如下：选择较小体积的展开缸；将点好样的薄层板在缸内预饱和15-30min；在展开缸内壁贴上浸有展开剂的滤纸。（了解：在薄层色谱展开过程中，时常出现边缘效应，即同样的组分，靠薄层板边缘处斑点的Rf 值与中心区域斑点的Rf 值存在差异）。（5）对照物的选择：TLC鉴别用的对照物有对照品、对照药材和对照提取物。（6）温度和湿度5、阴性

14、对照试验的概念和作用：指从制剂处方中去除待鉴别的药味，余下各药按供试品溶液制法同法制备，得阴性对照溶液，然后将其与供试品溶液同板展开、检视、比较，考察条件的专属性。目的：为了考察制剂中其他药味对欲鉴别药味TLC的干扰。（二）GC和HPLC的定性依据：在同样条件下，供试品呈现与对照物保留时间相同的色谱峰；定量依据为峰面积三、光谱法（一）紫外光谱法：主要是用于鉴别含有芳香族或不饱和共轭结构的化学成分，此法简单，但特征性不强。（二）荧光法（三）红外光谱法和近红外光谱法：专属性强，即特征性强。第三章 中药制剂检查了解：中药制剂的检查一般包括制剂通则检查、杂质检查、安全性检查和有效性检查等。第二节 杂质

15、检查一、杂质概念、来源途径、分类：1. 概念：杂质主要是指在中药制剂中不具有治疗作用，但当超过一定限度时，有可能对人体造成危害或影响制剂稳定性的物质。2. 杂质主要来源：1、原料中带入的杂质；2、生产过程中引入的杂质；3、贮藏过程中产生的杂质3. 中药制剂的杂质可分为：一般杂质和特殊杂质。4. 一般杂质和特殊杂质概念：1 一般杂质是指在自然界中分布较广，在大部分原药材的采收、加工以及制剂的生产或贮藏过程中容易引人的杂质，如酸、碱、水分、重金属、砷盐、铁盐、氯化物、硫酸盐等。2 特殊杂质是指某些个别中药制剂中存在的杂质，往往是在制剂的制备或贮藏过程中，因制备工艺的特殊性或药物本身性质的特殊性而产

16、生的一类杂质，如土大黄苷、阿胶中挥发性碱性物质、乌头酯型生物碱、马兜铃酸、有机溶剂残留、大孔吸附树脂有机残留。2、 杂质限量检查1. 杂质限量的概念：药物中所含杂质的最大允许量被称为杂质限量。2. 中国药典的杂质检查方法多为限量检查。3. 中药制剂的杂质只进行限量检查，一般不测定其准确含量的原因：（1）从中药制剂中杂质的来源考虑，完全去除其中的杂质，目前尚存在一定难度。（2）只要杂质含量控制在一定范围内，不致对人体造成危害，也不会影响制剂的稳定性，仍然能够保证用药的安全、有效。4. 杂质限量通常用百分之几或百万分之几来表示第3节 一般杂质检查1、 氯化物检查1. 基本原理：供试品中的氯化物与硝

17、酸银试液作用，生成氯化银的白色浑浊液，在相同条件下，通过与一定量标准氯化钠溶液生成的氯化银浑浊液比较，检查供试品中氯化物的限量。2. 加稀硝酸的作用：可避免碳酸银、磷酸银、亚硫酸银及氧化银沉淀的形成，消除干扰；硝酸可加速氯化银沉淀的生成，并使氯化银沉淀形成最好的乳光浑浊。3. 要在暗处反应的原因：光线可使单质银析出。4. 若供试品不澄明，可用预先用含有硝酸的酸性水溶液洗净其中的氯化物滤过二、重金属检查1、重金属是指在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用而显色的金属。如Pb2+ 、Cu2+等，由于药品生产中受铅污染的机会最多，且铅易蓄积中毒，故中药制剂的重金属检查通常一通常以铅为代表。2、检

18、查方法及适用范围：（1）硫代乙酰胺法，适用于供试品不可经有机破坏，在酸性溶液中显色的重金属限量检查。基本原理及条件：在弱酸性（PH33.5，最佳为3.5）条件下，硫代乙酰胺发生水解，产生硫化氢，可与重金属离子生成不溶性的有色硫化物。（2）炽灼后硫代乙酰胺法，适用于供试品需要炽灼破坏，在酸性溶液中显色的重金属限量检查。（3）硫化钠法，适用于供试品能溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的重金属限量检查。（4）微孔滤膜过法，适用于有色溶液或重金属限量较低(检测限度为25g ）的样品。3、中药材和中药制剂中的铅等重金属常处于有机状态，必须采用适当的方法进行有机破坏，破坏的目的：使有机铅转变为无机铅后方

19、能进行检查或使重金属游离。常用的破坏方法为湿法消化和干法消化（或称湿法破坏和干法破坏）两种。4、干法消化的反应条件及注意事项：1) 在用干法消化样品时，需要注意炽灼温度须控制在500600C，超过700度，多数重金属盐都有不同程度的损失。2) 为使有机物破坏完全，炽灼残渣中需要加硝酸加热处理，此时必须将硝酸蒸干，除尽亚硝酸，否则亚硝酸会氧化硫代乙酰胺水解生成的硫化氢，析出乳硫；3) 灰化完全与否，直接影响测定结果，可将灰分冷后，加入烧过量的稀盐酸水或硝酸水溶液，振摇，若呈色或有不溶性有机物，可于水浴上将溶液蒸干，并小火炭化后，在行炽灼至完全灰化。4) 按相同条件进行空白试验的目的：排除其他试剂

20、含有干扰成分。3、 砷盐检查 有古蔡氏法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（AgDDC法），与古蔡氏法相较，可以进行定量测定，因为红色胶态银在510nm处有吸收。（一）古蔡氏法1、（1）古蔡氏法的基本原理：金属锌和酸作用，产生的初生态氢与供试品中微量砷盐反应，生成挥发性砷化氢，砷化氢再与溴化汞试纸作用，在溴化汞试纸上形成有色砷斑，比较供试品与标准砷溶液在同一条件下所形成的砷斑的颜色深浅，检查供试品中砷盐的限量。（2）AgDDC法的基本原理：金属锌和酸作用，产生的初生态氢与供试品中微量砷盐反应，生成挥发性砷化氢，被二乙基二硫代氨基甲酸银溶液吸收，使之还原生成红色胶态银。比较供试品与标准砷溶液在同一条件下

21、生成的红色胶态银颜色深浅，检查供试品中砷盐的限量。2、（1）加入KI和Sncl2的作用：将五价砷还原为三价砷，以维持反应过程中碘化钾还原剂的存在；溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子形成配合物，使生成对的砷化氢的反应不断进行；可抑制锑化氢的生成；促使新生态氢的产生，使砷化氢气体产生；其中氯化亚锡还能与锌作用，起去极化作用，使产生砷化氢气体速度均匀。（2）醋酸铅棉花合适的松紧度和作用：用醋酸铅棉花60mg，装管高度为60-80mm；可去除硫化物气体（硫化物会产生黑色斑点）；又可使砷化氢气体以适宜的速度通过导气管。3、注意点（反应的最佳条件）：A、加入的锌粒一般选用2mm左右粒径；B、反应溶液的酸

22、度一般相当于2molL的盐酸溶液；C、反应温度一般控制在25-40之间，反应时间约为45min；D、标准砷的量取量：2ml（mgml）。E、在光照下，砷斑会被氧化，所以加完锌粒后应避光反应；F、中药材、中药制剂和一些有机药物中的砷常为有机砷，需经有机破坏。G、供试品中若含有磷、锑化物或硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等无机化合物，则能与氢作用产生H3P、H3Sb、SO2 等气体，使溴化汞试纸变色，干扰检查，必须先行除去加入浓硝酸。四、铁盐检查1、基本原理：在酸性溶液中，硫氰酸盐与三价铁生成可溶性红色硫氰酸铁的配离子，比较供试品与标准铁溶液在同一条件所显硫氰酸铁的颜色深浅，检查供试品中铁盐的限量。2

23、、检查中加入过硫酸铵的目的：可将供试品中的Fe2氧化成+Fe3+，同时可防止由于光线等作用使硫氰酸铁配离子被还原而分解褪色。第四章 中药制剂含量测定第一节 样品处理一、（了解）样品处理：粉碎提取分离净化 溶液提取法的关键是提取溶剂的选择按照“相似相溶”的原则进行二、样品的提取的方法适用范围及优缺点-主要知道优缺点（课上）方法适用范围优点缺点浸泡提取法热不稳定的样品操作简单，提取杂质少单独使用时一般都较费时，浪费溶剂，不易提取完全。回流提取法适热稳定性的成分，对热不稳定或挥发性的成分不宜使用提取效率高于冷浸法，可缩短提取时间提取杂质较多连续回流提取法热稳定性成分，受热易分解的成分不适用操作简便，

24、提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少由于提取液长时间在烧瓶内保持沸腾状态，对热不稳定的化合物不宜使用超声提取法较广，原理（了解）为超声空化作用对细胞膜的破坏，有助于有效成分的溶出与解释放，溶质扩散。操作简便，提取效率高，提取速度快，节能，有助溶的作用提取的杂质比连续回流提取法高三、样品的分离净化（分离成分净度与测定方法的专属性有关）（一）方法有沉淀法、蒸馏法、液-液萃取法（LLE）、经典柱色谱法，较常用的为LLE和经典柱色谱法也常称固相萃取法或液固萃取法（LSE）（二）液液萃取法（LLE）1、LLE有直接萃取法和离子对萃取法两种方法2、离子对萃取法的原理、适用范围和影响因素：1) 原理：是在适当

25、的PH介质（水相）中，某些有机酸（碱）性物质形成的离子与带相反电荷的离子（也称离子对试剂）定量地结合成弱性的离子对，而易溶于有机溶剂，达到萃取分离的目的。2) 适用范围：通常适用于高度电离的有机酸、有机碱化合物的萃取，这些化合物难于通过调节水相的PH值而用直接法萃取。在中药制剂分析中主要用于生物碱（B）的分析，其离子对试剂常为酸性染料（In-），如溴百里酚蓝（BTB)、溴甲酚绿(BCG)等。3) 影响因素：水相PH的和离子对试剂的选择，最关键的影响因素为水相PH例子：总生物碱的含量测定：酸性染料比色法：（掌握原理和影响因素）1) 原理：在适当的PH介质中，生物碱B可与氢离子结合成阳离子BH+,

26、而酸性染料在此条件下解离为阴离子In-,生物碱阳离子与染料阴离子定量地结合成有色离子对。 此离子对可定量地溶于某些有机溶剂，测定有机溶剂的吸光度，即可测定生物碱的含量。2) 应用本法的关键在于介质的PH、酸性染料的种类和有机溶剂的选择，其中尤以PH的选择更为重要（影响离子对的形成）。因为（了解）：1、如果偏低，虽然可使生物碱以阳离子的形式存在，但染料仍以酸的形式存在；如果偏高，染料以阴离子形式存在，而生物碱却以游离状态存在，这两种情况均不能使阴阳离子定量结合。a. 常用的染料：常用的为溴百里酚蓝、溴甲酚绿，酸性染料易溶于水，在有机相中不溶或溶解度较小，与其形成离子对易溶于有机溶剂定量完全反应；

27、b. 有机溶剂：常用三氯甲烷、二氯甲烷，选择的原则是根据离子对与有机溶剂能否形成氢键以及形成氢键能力的强弱而定。c. 有机相中混入水分对结果有影响，以为微量水分可使三氯甲烷发生浑浊，且由于带入了水相中的过量染料而影响测定结果。有机溶剂提取液可加入脱水剂（如无水硫酸钠）或经滤纸滤过除去微量的水分。（3） 经典柱色谱法常用的净化剂（填料）及其适用范围（主要知道是那些成分）：（1） 氧化铝：吸收酸性成分，能将黄酮类吸附在柱上，所以不用于黄酮类；用于生物碱、苷类的测定；适用于中性、碱性的测定。（2） 硅胶：强烈保留碱性化合物，适合中性或酸性化合物，如醌类（2）大孔吸附树脂：适用范围比较广，对于非极性的

28、有机化合物，普遍吸附能力强，特别对皂苷类的分离纯化效果尤佳，对黄酮类也很适宜。（了解：先水洗流量1.5ml/min除去水溶性杂质，再用乙醇洗脱，进行净化处理）。(3)聚酰胺（原理：氢键吸附作用）：常用于含黄酮、酚、酸、醌类药物样品液的分离净化。第2节 常用含量的测定方法结果用%、标示量%、mg/g、mg/丸、片表示；方法有化学分析法、紫外可见分光光度法（UVVis）、薄层扫描法（TLCS)、气相色谱法(GC、高效液相色谱法(HPLC)、原子吸收分光光度法（对金属原子适用较多）、荧光分析法、毛细管电泳法（画线为重点讲的方法）一、化学分析法(主要是滴定度的概念及含量计算公式)（一）重量分析法：分为

29、挥发法、萃取法和沉淀法（二）滴定分析法：1、滴定度计算滴定度(TT/A)指每1ml某浓液的滴定液所含相当的被测药物成分的重量，中国药典用毫克作质量单位。样品中被测成分的含量计算，当用直接滴定法测定药物含量时，含量（%）=VTTT/AF100% MS1000式中F=实际摩尔浓度/规定摩尔浓度，供试品取样质量MS（g）消耗滴定液的体积VT二、紫外-可见分光光度法（UVVis）（紫外：200-400nm，可见：400-760nm）（一）特点（课上）：其灵敏度高用于稀溶液时，准确度高，应用广，专属性较，仪器价格低、操作简单。（二）适用范围：对200760nm波长范围的电磁波有吸收的物质，常用于黄酮、蒽

30、醌、多糖等各类成分的含量测定。2、对溶剂的要求：当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。3、以吸收度最大的波长作为测定波长。且测定波长溶剂的截止波长，一般供试品溶液的吸光度读数，以在0.3-0.7之间的误差较小。4、用于含量测定的方法一般有对照品比较法、吸收系数法和标准曲线法（GC也有），前两种要求会计算。(2) 标准曲线法：原理（了解）：先配置一系列不同浓度的对照品溶液，在相同条件下分别测定吸光度，绘制A-c曲线或求出其回归直线方程，即得标准曲线。在相同条件下测定供试品溶液的吸光度，即可求得供试品中被测成分的浓度或含量。使用时注意：1、标准系列一般要求5-7个点；2、回归直线方

31、程的相关系数（r）不得小于0.999，注意GC和HPLC的相关系数（r）不得小于0.9999；3、供试品溶液的吸光度应在标准曲线的线性范围内（最好在中间位置）三、薄层扫描法（TLCS）（一）作用：可用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定（二）定量分析方法1、TLCS最常用的定量方法是外标法，包括外标一点法和外标二点法。由于薄层板间差异较大，为克服这种差异，应采用随行标准法，即供试品与对照品溶液应交叉点于同一薄层板上，供试品点样不得少于2个，对照品每一浓度不得少于2个。2、外标一点法：标准曲线过原点时（或截距为零）可用外标一点法定量。只需点一种浓度的对照品溶液，与供试液同板展开，分别测定峰面积积分值

32、A，以A=Km，按比例法计算组分含量。3、外标二点法：标准曲线不通过原点时，只能用该法定量。了解：至少需要6个点，样2对4.测出峰面积积分值A，用对照品求出直线方程：A=Km+B，然后代入供试液峰面积积分值，计算组分含量，即得。（三）操作要点1、包括(了解)：线性、分离度、重复性、稳定性和规范操作。2、分离度：分离度应大于1.03、重复性：要求为不需要显色直接测定的RSD3.0%，需显色后测定的RSD5.0%.（系统适用性试验中要求RSD2.0%，回收率RSD3.0%）四、气相色谱法(GC)比较项目气相色谱法（GC）高效液相色谱法HPLC仪器构造载气系统、进样系统、柱系统、检测系统、数据处理系

33、统输液系统、进样系统、柱系统、检测系统、数据处理系统最常用的定量方法内标法外标法（同TLCS）相关系数（r）不得小于0.9999系统适用性试验（要求掌握包涵的项目及各项的要求）色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、拖尾因子和重复性等四个指标。1、 色谱柱的理论板数（n）：测得的理论板数不得低于各种项下规定的最小理论板数，若超过应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、柱填充等），使理论板数达到要求。2、分离度（R）：要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度，一般R1.5 。3、重复性：取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，RSD2.0%4、拖尾因子：除另有规定外，T应在0.95-

34、1.05之间。（一）气相色谱法采用气体为流动相，适用于有挥发性、热稳定的成分，主要是用于测定制剂中挥发油及其他挥发性组分的含量。（二）固定液的选择遵循极性相似原则，即待分析成分的极性（官能团）与所选固定相相似。（三）、温度的要求：进样系统中气化室的温度：大于等于样品的沸点，但要考虑样品的稳定性柱温的选择选择的基本原则：在使最难分离的组分有符合要求的分离度的前提下，尽可能采用较低柱温，但以保留时间适宜及不拖尾为度。实际工作中，首先柱温要低于固定液的最高使用温度，以免固定液流失；然后再根据样品的沸点选择柱温。对于宽沸程样品，需采用程序升温方法进行分析。检测器的温度：使用时检测器温度一般应高于柱温，

35、并不得低于150度，以免水汽凝结，损坏检测器。（四）、检测器的种类及其适用范围常用的有热导检测器（TCD）、氢火焰离子化测器（FID）、氮磷检测器（NPD）和电子捕获检测器（ECD），FID是应用最广泛的检测器，且用于含有碳有机物的测定。NPD对含有N、P有机化合物特别敏感，在有机磷农药应用广。ECD适用于痕量电负性有机物如含卤素、硫等化合物，也常用于有机氯农药残留检测的分析。（五）定量分析方法（还包括内加法）及其优缺点优点缺点其他内标法可减少仪器稳定性差、进样量不够准确等因素所带来的分析误差样品的配制较麻烦，有些内标物不易寻找概念：内标法的关键是选择合适的内标物。所选的内标物应为样品中所不含

36、有的组分，内标物的保留时间应与待测组分的保留时间相近，但彼此能完全分离（R1.5）外标法简便，定量结果与进样量重复性无关，操作条件略有变化对结果影响较小要求所有组分均要产生色谱峰，不适用微量杂质的含量测定。分为标准曲线法及外标一点法，外标一点法要求会计算归一化法 简便，定量结果与进样量重复性无关，操作条件略有变化对结果影响较小要求所有组分均要产生色谱峰，不适用微量杂质的含量测定。五、高效液相色谱法高效液相色谱法已经称为中药制剂定量分析最重要的分析方法，反相键合相色谱（RpHPLC）在中药制剂分析中最为常用。特点（课上）：流动相流速快（高压输液泵），分析较快；柱效高，填加的填料不一定，分离能力比

37、较高；检测灵敏度高色谱柱的选择（实际上为柱填料固定相的选择）：大多药物可用非极性键合相十八烷基（ODS）反相柱加以分离，不行可改用硅胶吸附色谱柱或正相分配色谱柱。2、 （课上）流动相 （1）可采用等度洗脱和梯度洗脱；等度洗脱：溶剂组成在一个分析期间里保持恒定（样品组分较少，性质较近）梯度洗脱：在一个分析周期内，程序控制流动相的组成改变，使每个组分都在适宜条件下分离（组分数目多，性质相差大）；（2）正相键合相色谱的流动相通常采用饱和烃中加入一种极性较大的溶剂为极性调节剂，通过调节极性调节剂的浓度来改变溶剂强度。3、检测器紫外检测器（UV）-是HPLC应用最普遍的检测器；荧光检测器（FD）；蒸发光

38、散射检测器（ELSD）；电化学检测器ECD ；示差折光检测器RID4、流动相的处理（1）溶剂的纯化：选择专供色谱分析用的“色谱纯”溶剂，分析纯。水一般采用石英系统二次蒸馏或纯净水。（2）流动相脱气，超声脱气为目前用得最多的脱气方法。（3）滤过第三节 含量测定方法验证（课上）目的是为了证明采用的分析方法是否适用于相应的检测要求，包括准确度、精密度、专属性、线性、范围和耐用性。一、准确度准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。 A为供试品所含被测成分量 B为加入对照品量 C为实测值 中药制剂含量的回收率一般要求在95%105%，回收率RSD一般在3%以内。二

39、、精密度精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用偏差、标准偏差（s）或相对标准偏差(RSD);精密度包含重复性、中间精密度、重现性、。三、专属性四、检测限检测限是指供试品中被测物能被检出的最低量。一般以信噪比为3:1或2:1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。五、定量限定量限是指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。常用信噪比法确定定量限量。一般以信噪比为10:1时相应浓度或注入仪器的量进行测定。第6章 中药制剂中各类化学成分分析问单体生物碱的含量测定方法问单体黄酮含量测定方法可采用微量升华法进行鉴别的：游离

40、醌类、个人液体或小分子生物碱如麻黄碱、挥发油类成分生物碱黄酮醌类皂苷提取碱化+CHCl3酸水碱水提取，再酸化（碱提酸沉）游离：有机溶剂苷：甲醇、乙醇；碱提酸沉；水蒸气蒸馏（苯、萘醌）；纯化离子对萃取；LSE：氧化铝；PH梯度萃取；LSE：聚酰胺（最适）硅胶PH梯度萃取（具酸性，同于黄酮）；LSE：硅胶，不可用氧化铝；鉴别一般化学反应：沉淀反应；色谱：TLC、HPLC、GC；UV；化学反应：盐酸-镁粉反应（黄酮最常用的鉴别）和与金属盐类试剂的络合反应色谱：TLC、HPLC；化学反应：与碱液或醋酸镁的显色反应微量升华：游离醌TLC、HPLC、GC泡沫试验；溶血试验；TLC（硅胶、硅藻土）；显色反应

41、；总成分测定化学分析：酸碱滴定法分光光度法UV：分为直接测定离子对萃取比色分光光度法：分直接测定和显色测定混合碱性比色法游离蒽醌也一样比色法；重量法；单一成分测定TLCSHPLCGC、毛细管电泳法TLCS：TLCUVHPLCTLCSHPLCUV（较成熟）TLCS：薄层洗脱-比色 薄层扫描；HPLC：HPLCUV，ELSD；显色剂改良碘化铋钾试剂。三氯化铝 紫外光下呈黄色荧光醋酸镁甲醇溶液或碱性试剂10%硫酸乙醇液提取溶剂三氯甲烷黄酮苷易溶于甲醇，难溶于三氯甲烷苷易溶甲醇、乙醇皂苷：水饱和正丁醇皂苷元：石油醚第一节 生物碱类成分分析一、鉴别（一）化学反应法：1、条件：一般在酸性水溶液或稀醇中进行

42、。2、注意假阴性和假阳性反应的干扰：如麻黄碱与生物碱沉淀试剂反应呈阴性；中药的酸水浸出液中的蛋白质、黏液质、鞣质等水溶性杂质成分，可与生物碱沉淀试剂生产沉淀，产生假阳性。（二）色谱法 问用硅胶易拖尾的原因和改善措施目前最多采用硅胶吸附色谱，一般以三氯甲烷为基本溶剂。由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成盐，使Rf值很小或拖尾，形成复斑等。因此在硅胶吸附薄层色谱中，常用碱性展开系统或碱性环境下进行，可采取的措施是加乙胺、氨水或用氢氧化钠代替水。用紫外光下检视所喷的试剂一般是改良碘化铋钾试剂。二、含量测定（一）总生物碱的含量测定 除（2），其他讲述特点的为课上的1、化学分析法:一般要

43、求供试品溶液中总生物碱成分纯度较高，因此常用于处方药味较少、所含成分较简单的中药制剂。2、分光光度法:单波长光谱法测定时要求干扰成分在测定基本无吸收。(1)直接测定法：是指不经过化学反应，利用生物碱成分自身的吸收波长直接进行比色测定的方法。该法一般用于药味较少、干扰不大的中药制剂中总生物碱的含量测定。（2）离子对萃取比色法 分为酸性染料比色法;苦味酸盐比色法;雷氏盐比色法（二）HPLC测单体生物碱的含量 1. 问题及原因：当使用液液分配谱法时，以反相高效液相色谱应用较多。由于ODS上硅醇基酸性较大，生物碱类成分可与其牢固地键合，从而影响色谱行为，使保留时间延长、峰形变宽、拖尾。2. 措施：为了

44、克服游离硅醇基的影响，可采取以下措施：（1）改进流动相A、在流动相中加入硅醇基抑制剂（或称改良剂），常用的有二乙胺、三乙胺等B、在适合的PH下，流动相中加入低溶度离子对试剂。C、在流动相中加入季铵盐试剂，与硅醇基形成复合物。D、在流动相中加入一定浓度的电解质缓冲盐。（2）改进固定相：封尾技术可以使填料的键合更彻底。一般是在键合反应结束后，用三甲基氯硅烷等进行后续处理，尽量减少残余羟基，增加单体覆盖度。第二节 黄酮类成分分析（一）总黄酮含量测定1、总黄酮量高，纯度高，杂质小时用直接测定法；由于其他组分吸收干扰影响直接测定的正确性时用显色测定法，但这种方法一般显色产物的稳定性较差2、分光光度法测总

45、黄酮成分的含量加入各种试剂的作用：亚硝酸：作为还原剂，还原被氧化的酚羟基；提供碱性环境硝酸铝：络合作用，作为显色剂氢氧化钠：使最大吸收波长位移改变（红/紫移）-移到干扰较少的地方。第三节 醌类成分分析1、主要包括苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四类型。2、酸性:（1）蒽醌类化合物其酸性有强到弱的一般规律为：-COOH2-OH1-OH2a-OH1a-OH,据此可用PH梯度法进行蒽醌类成分的分离纯化。（2）用文字描述为：含有羧基的醌类酸性大于不含羧基的醌类；酚羟基数目越多，酸性越强；位取代的羟基酸性大于a位取代的。3、显色反应 ： 知道（1）（4） （1）与碱性溶液的反应：羟基蒽醌以及具有游离酚羟基的蒽醌苷

46、均可显色，而蒽酚、蒽酮类则需经过氧化成蒽醌后方可进行显色反应。（2）与金属离子的反应（3）Feigl反应:在碱性条件下（4）无色亚甲蓝显色反应：蒽醌类及萘醌类成分与无色亚甲蓝试剂反应产生蓝色斑点，可与蒽醌类化合物相区别。4、鉴别中TLC的检识方法：日光灯下显黄色；喷碱性试剂或醋酸镁甲醇；氨气熏蒸；紫外灯下观察荧光。5、游离蒽醌和总黄酮类的含量测定（简单了解）中药中游离蒽醌极性较弱，故常用弱极性溶剂提取后加碱比色测定。特点为：专属性强，比色后产物稳定性差，操作较繁琐。 第四节 三萜皂苷类成分分析1、泡沫试验1) 专属性（同溶血试验），最常用于检测含皂苷的原料药2) 假阳性和假阴性：滤液振摇后能产生持久性的泡沫，含蛋白质和黏液质的水溶液在剧烈振摇时也能产生泡沫（假阳性），但不持久或加热可消失；甘草皂苷是假阴性2、薄层色谱法：常用的展开剂为三氯甲烷甲醇水（下层）、正丁醇冰醋酸水（上层）3、高效液相色谱法：有紫外吸收时用UV；无紫外吸收或有紫外末端吸收，且要提高灵敏度的用蒸发光