中药分析学(第2章)

1、 1 1 1 第二章第二章 中药杂质及有害物质分析中药杂质及有害物质分析 2 2 2 主 要 内 容 v1.1.中药杂质及有害物质检查的一般要求中药杂质及有害物质检查的一般要求 v2.2.中药杂质及常规检查方法中药杂质及常规检查方法 v3.3.重金属及有害残留物分析重金属及有害残留物分析 v4.4.内源性有害物质分析内源性有害物质分析 v5.5.黄曲霉毒素及微生物学检查黄曲霉毒素及微生物学检查 3 3 3 本章学习要求本章学习要求要求 3 4 4 4 杂质：杂质：无治疗作用，影响药物疗效和稳定性，甚至 对人体健康有害。 杂质检查：杂质检查：保证药物的安全、有效、均一和纯度 杂质来源：杂质来源：

2、主要来源于药物的加工、生产和贮藏三 个环节。 内源性有害物质：内源性有害物质：中药本身含具有毒副作用的化学成 分，如马兜铃酸、乌头碱、吡咯里西啶类生物碱。 外源性有害物质：外源性有害物质：残留农药、有机溶剂、大孔树脂， 重金属及有害元素，微生物和黄曲霉毒素等。 第一节中药杂质及有害物质检查的一般要求第一节中药杂质及有害物质检查的一般要求 5 5 5 限量 检查 杂质 限量 不影响疗效和不发生毒性的 前提下，药物中可能存在的 杂质，允许还有一定量，最 大允许量为杂质限量。 药物中杂质的检查一般只检查 是否超过限量，这种方法称杂 质的限量检查。通常用百分之 几（%）或百万分之几（ppm） 或mg/

3、kg来表示。 杂质限量= 杂质 限量 杂质最大允许量 样品量 杂质及有害物质的限量检查杂质及有害物质的限量检查 6 6 6 检查 方法 对照法对照法灵敏度法灵敏度法 含量测定法含量测定法 比较法比较法 最大限度量待检杂质或待检物 对照品（或标准品）溶液，与 供试品溶液，在相同条件下实 验，比较结果，以确定是否超 过限量。 在供试品溶液中加入试剂， 在一定条件下反应，观察有 无阳性结果出现，以判断杂 质是否超限。 取供试品一定量，依法检查， 测定待测品的某些特征参数， 与规定的限量比较，以判断是 否超限。 用规定的方法测定杂质的 含量，与规定的限量比较， 以判断杂质是否超限。 限量检查方法限量检

4、查方法 7 7 7 v1.1.杂质检查杂质检查 v2.2.干燥失重（详见药典）干燥失重（详见药典） v3.3.水分测定水分测定 v4.4.灰分测定灰分测定 v5.5.色度检查（详见药典）色度检查（详见药典） v6.6.酸败度测定（详见药典）酸败度测定（详见药典） 第二节中药杂质及常规检查方法第二节中药杂质及常规检查方法 8 8 8 筛选 称重 Your text Your text 取规定量样品，摊开，用肉眼或放大镜 （5-10倍）观察，将杂质检出。 将各类杂质分别称重，计算其在供试品 中的含量（%），如丁香中杂质不得过 2%，女贞子中杂质不得过3% 1.外观难以鉴别时，可进行显微或理化鉴别试

5、验， 证明其为杂质后，计入杂质重量中。 2.杂质检查所用的供试品量，除另有规定外，按 药材和饮片取样法称取。 3.需采用特殊方法进行检查的杂质，应给出具体 方法。 注意 事项 一、药材中混存杂质检查法一、药材中混存杂质检查法 9 9 9 烘干法 二、水分测定法二、水分测定法 甲苯法 减压干燥法 气相色谱法 甲苯法水分测定装置甲苯法水分测定装置 适用于含挥发性成分的药品，不适用于微 量水分的测定。因200ml甲苯可吸水0.1ml， 故需预处理。甲苯先加少量水，充分振摇 后放置，将水层弃去，甲苯经蒸馏后使用。 10 1010 总灰分：中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化所遗留的无机物。 酸不溶性灰分：

6、中药经高温炽灼得到的总灰分加盐酸处理，得 到不溶于盐酸的灰分。 三、灰分测定及炽灼残渣检查三、灰分测定及炽灼残渣检查 11 1111 1 总灰分测定法 取适量供试品于炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热， 避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500-600，使 完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算总灰分的含量（%）。 2 酸不溶性灰 分测定法 取总灰分，先用稀盐酸加热溶解，无灰滤纸滤过， 再洗涤至洗液不显氯化物反应为止。干燥，炽灼至 恒重，计算酸不溶性灰分的含量（%）。 3 注意事项 供试品需适量粉碎，使其能通过2 号筛，将粉末混合均匀后再取样。 如供试品不易灰化，可将坩锅放冷， 加热水或

7、10硝酸铵溶液2ml，使 残渣湿润，然后置水浴上蒸干，得 到的残渣再按前法炽灼至坩锅内。 ( (一一) )灰分测定法灰分测定法 12 1212 取供试品适量，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼 至完全炭化，放冷至室温；除另有规定外，加硫酸0.51ml使润湿， 低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700800炽灼使完全灰化，移 置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700800炽热至 恒重，即可。如需将残渣留作重金属检查，则炽热温度必须控制 在500600。 ( (二二) )炽灼残渣检查法炽灼残渣检查法 中药经炽灼炭化，再加硫酸湿润，加热使硫酸蒸气除尽后，于高 温炽灼至完全灰化，使有机物破坏分

8、解变为挥发性物质逸出，残 留的非挥发性无机杂质（多为金属的氧化物或无机盐类）成为硫 酸盐，称为炽灼残渣。 13 1313 重金属及有害元素包括铅（Pb)、镉（Cd)、砷（As）、 汞（Hg）、铜（Cu）等。 其毒性作用主要是由于与体内酶蛋白上的-SH和-S-S- 键牢固结合，从而使蛋白质变性，酶失去活性，组织 细胞出现结构和功能上的损害。 1.重金属总量用硫代乙酰胺或硫化钠显色反应比色法 测定。 2.砷盐的检测用古蔡法或二乙基二硫代氨基甲酸银法 3.单个铅（Pb)、镉（Cd)、砷（As）、汞（Hg）、铜 （Cu）元素的测定使用原子吸收光谱法和电感耦合 等离子体质谱法进行测定。 第三节重金属及有

9、害残留物分析第三节重金属及有害残留物分析 14 1414 一、重金属及砷盐总量检查法一、重金属及砷盐总量检查法 pH3.5 CH3CSNH2H2O CH3CONH2H2S Pb2 H2S PbS（黑色）（黑色）2H 原理原理 方法方法 第一法第一法硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法 取纳氏比色管两支，甲、乙两管中按照规定分 别制成对照品、供试品溶液；同置白纸上，自 上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较， 不得更深。 15 1515 1 供试品如有色供试品如有色 应在加硫代乙酰胺试液以前在对照溶液管中滴加少量稀焦糖液， 使之与供试品溶液管的颜色一致，然后再加硫代乙酰胺试液比 色。如仍不能使两管颜色一致时

10、，可取两倍量供试品加水溶解 后，分成两等份，在一份中加入硫代乙酰胺试液，经滤膜滤过 （除去金属硫化物沉淀），加入规定量的标准铅溶液作为对照 溶液，再与另一份供试溶液按规定方法处理后比较。 2 供试品如含高铁盐供试品如含高铁盐 影响重金属检查时，可先加抗坏血酸0.5- 1.0g，并在对照液中加入相同量的抗坏血 酸，再照上述方法检查。 3 供试品为铁盐供试品为铁盐 可在相对密度1.103-1.105的盐酸（盐酸9ml加水6ml） 中，使大部分Fe3+生成HFeCl62（六氯合铁离子）,用 乙醚提取除去；再加氨试液使溶液呈碱性，用氰化钾 掩蔽残留的微量铁盐后，加硫化钠试液检查铅盐。 4 药物本身也能

11、生药物本身也能生 成不溶性硫化物成不溶性硫化物 干扰重金属的检查时，应作特殊处理。 供试品的处理供试品的处理 16 1616 将供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理， 使有机物分解破坏完全后，再按一法进行 检查。 原理原理 方法方法 取炽灼残渣项下遗留的残渣，按照规定分别 制成对照品、供试品溶液；照一法检查，即 得。 第二法第二法炽灼后硫代乙酰胺法炽灼后硫代乙酰胺法 17 1717 炽灼温度对重金属检查影响较大，温度越高，重金属损失越大， 应控制在500600炽灼使完全炭化。 炽灼残渣加硝酸加热处理后，必须蒸干除尽氧化氮，否则亚硝酸 可氧化硫化氢析出硫，影响比色。如使用盐酸超过1ml（或与盐酸 1

12、ml相当的稀盐酸），或氨试液超过2ml，以及用硫酸与硝酸进行 有机破坏或其他试剂处理者，除另有规定外，对照品溶液应取同 样量试剂在磁皿中蒸干。 含钠盐或有氟的有机药物在炽灼时能腐蚀瓷坩锅而引入重金属， 应改用铂坩锅或硬质玻璃蒸发皿。 注意事项注意事项 18 1818 二、农药残留量测定方法二、农药残留量测定方法 农药分类农药分类( (从化学成分角度从化学成分角度) ) 杀虫剂可分成有机氯化合物、有机磷化合物、氨基甲酸酯、有机 氮化合物、拟除虫菊酯、有机氟化合物、有机锡化合物、特异性 杀虫剂等。 杀菌剂又可分成有机氯杀菌剂、有机磷杀菌剂、有机硫杀菌剂、 有机汞杀菌剂、无机杀菌剂、抗菌素等。 19

13、 1919 1.1.有机氯类农药有机氯类农药：易在脂肪中蓄积，造成慢性中毒。 2.2.有机磷类农药有机磷类农药：抑制生物体内胆碱脂酶的酶活性， 从而引发中毒。 3.3.氨基甲酸酯类农药氨基甲酸酯类农药：使胆碱酯酶丧失对乙酰胆碱的 水解能力，造成一系列中毒症状。 4.4.拟除虫菊酯类农药拟除虫菊酯类农药：影响细胞色素C和电子传递系 统，可直接作用于神经末梢和肾上腺髓质。 1.环境对药材的污染 2.中药栽培中农药的污染 3.采收、加工、贮存、运输过程中的污染。 20 2020 常用的方法有漂洗法、振荡法、组织捣碎法、 冷浸法、索氏提取法、超声法、固相萃取法、 超临界萃取法等。 提取溶剂的选择 考虑

14、提取溶剂的纯度、极性 提取提取 检测检测 常用气相色谱法对残留农药进行定性和定量。 测定有机氯农药时，使用电子捕获检测器（ECD） 测定有机磷农药时，使用火焰光度检测器（FPD） 中药中残留农药的提取和纯化中药中残留农药的提取和纯化 21 2121 毛细管柱顶空进样 程序升温法 第二法 有机溶剂残留量的检查常 采用气相色谱法，现行中 国药典收载有3种方法。 第一法 第三法 毛细管柱顶空进样等温法 溶液直接进样法溶液直接进样法 三、有机溶剂残留物测定法三、有机溶剂残留物测定法 22 2222 一类不带离子交换基团的多孔交联聚合物,可通过物理吸 附从溶液中选择性吸附有机物质，在中药的分离纯化中被

15、广泛应用。 其制备过程中使用了苯乙烯和二乙烯苯等作为原料, 并加入了一定比例的致孔剂,残留物有正己烷、苯、正己烷、苯、 甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1 1，2-2-二乙二乙 基苯和二乙烯苯基苯和二乙烯苯 气相色谱法，采用聚乙二醇为固定相的弹性石 英毛细管柱，氢火焰离子化检测器，外标法。 四、大孔树脂残留物测定法四、大孔树脂残留物测定法 23 2323 23 第四节、黄曲霉毒素及微生物学检查第四节、黄曲霉毒素及微生物学检查 一、一、 黄曲霉毒素测定黄曲霉毒素测定 黄曲霉毒素（aflatoxin）是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，是 一类结构相似的化合物，基本结

16、构都有二呋喃和香豆素二呋喃和香豆素（氧杂 萘邻酮），有较强毒性。 24 2424 第四节、黄曲霉毒素及微生物学检查第四节、黄曲霉毒素及微生物学检查 黄曲霉素性质黄曲霉素性质 耐热，在280时可发生裂解。低浓度毒素B1易受紫外线破坏。遇氧化 性物质、氢氧化钠和氨水等均可被破坏。在水中溶解度很低，易溶于油 及一些有机溶剂，如氯仿、丙酮、甲醇等，但不溶于乙醚、石油醚和己烷 中。 25 2525 黄曲霉毒素的测定方法黄曲霉毒素的测定方法 1.1.微柱法微柱法 本法做中成药中黄曲霉毒素筛选用，不能分辨黄曲霉毒素B1、 B2、G1、G2等。测得结果为黄曲霉毒素的总量。 将样品提取液通过氧化铝-硅镁型吸附剂

17、填充的微柱，样品 中的杂质被氧化铝吸附，黄曲霉毒素则被硅镁型吸附剂吸 附。在紫外光灯下观察荧光环与标准比较定量。 26 2626 黄曲霉毒素的测定方法黄曲霉毒素的测定方法 样品中的黄曲霉毒素B1经提取、浓缩和用单向 展开法在薄层上分离后，在365nm紫外光灯下产 生蓝紫色荧光。根据在薄层上显示荧光的最低 检出量定量。 单向展开单向展开 2.2.薄层色谱法薄层色谱法 单向展开后，若黄曲霉毒素B1含量低，无法 观察到荧光时，需改用双向展开法。先用无 水乙醚对薄层做横向展开，再用氯仿-丙酮 （98：2）混合液做纵向展开。 双向展开双向展开 27 2727 黄曲霉毒素的测定方法黄曲霉毒素的测定方法 3

18、.3.高效液相色谱法高效液相色谱法 黄曲霉毒素都具有紫外吸收，但荧光较弱，常通过衍生使荧光 增强。可用柱前三氟乙酸衍生、柱后碘衍生和柱后过溴化溴化 吡啶（PBPB）衍生，用荧光监测器进行检测。 1.配制黄曲霉B1、B2、G1、G2的混标溶液及黄曲霉素衍生标样 2.样品提取及净化：样品粉末先后用石油醚（或正己烷）、甲醇 -水提取、氯仿萃取后，加无水硫酸钠、弗罗里硅土除杂，收集 氯仿-己烷、氯仿-甲醇、丙酮-水的淋洗液，回收溶剂至干。 3.制备衍生物：加衍生试剂后，水浴反应 4.测定：流动相为甲醇-0.01mol/L KH2PO4，荧光检测器，激发波 长360nm，发射波长425nm。 28 2828 中药的微生物学检查中