实验一_普通光学显微镜以及显微标本制作

1、普通光学显微镜以及显微标本制作普通光学显微镜以及显微标本制作 一 实验目的 二 实验原理 三 实验仪器、材料和试剂 四 实验内容与方法 五 实验报告 实验目的实验目的 1.熟悉普通光学显微镜的主要结构和基本性能。 2.掌握低倍镜、高倍镜和油镜的正确使用方法。 3.初步了解光学显微镜的维护方法。 4.了解并掌握简单的显微标本制作技术 实验原理 普通光学显微镜是最通用的一种光学显微镜。 利用光线照明，标本中各点依照其光吸收的不同而 在明亮的背景中成像。它由物镜、目镜、聚光镜、 光源、载物台和支架等部件组成。其中聚光镜用于 调节显微镜的照明，物镜和目镜是放大微小物体成 像的主要部件。其基本成像原理是

2、：物镜、目镜、 聚光镜各自相当于一个凸透镜，被检标本置于聚光 器与物镜之间，物镜可使标本在物镜上方形成一个 倒立的放大实像。目镜将此倒像进一步放大成像， 该虚像看起来好像在离眼睛250mm处。 实验原理 显微标本制作技术是组织学、胚胎学、生理学及细胞 学等学科研究观察细胞、组织的生理、病理形态变化的一 种主要方法。大多数的生物材料，在自然状态下是不适合 显微观察的，也无法看到其内部结构。因为材料较厚，光 线不易透过，以致不易看清其结构，另外细胞内的各个结 构，由于其折射率相差很小，即使光线可透过，也难以辨 明。但在经过固定、脱水、透明、包埋等手续后就可把材 料切成较薄的片，再用不同的染色方法就

3、可以显示不同细 胞组织的形态及其中某些化学成份含量的变化，就可以在 显微镜下清楚地看到其中不同的区域组分状态，切片也便 于保存，所以是教学和科研中常用的方法。 实验仪器、材料和试剂 普通光学显微镜、擦镜纸、吸水纸、蒸馏水、 载玻片、盖玻片、香柏油、二甲苯、刀片等 实验内容与方法 (一)普通光学显微镜的主要结构 1.机械部分：镜座、镜柱、镜臂、镜筒、转换 器、载物台 2.照明部分：反光镜或者光源灯、聚光器、光 圈 3.光学部分：目镜、物镜(物镜上的标志：放大 倍数、数值孔径、机械筒长、盖片厚度) 实验内容与方法 (二)普通光学显微镜的性能和质量 1.数值孔径 2.分辨力 3.放大率 4.焦点深度

4、 (三)普通光学显微镜的使用方法 1.用前的准备工作 2.低倍镜的使用 3.高倍镜的使用 4.油镜的使用方法 实验内容与方法 (四)本实验室内使用普通光学显微镜的主要注意事项 1.取显微镜时，请尽量小心，防止震动损坏镜头 2.观察带有液体的临时标本时，请务必加盖玻片，以免镜头 受污染 3.镜头污染时，请用专业擦镜纸及时擦拭，注意单方向擦拭 4.非观察时候，请将物镜镜头偏离光轴，避免镜头受损 5.非教师授课需要及实验室管理员允许，请勿擅自拆卸零件 6.每位同学本学期固定使用一台显微镜，并做好登记工作； 如有问题请及时报告管理员老师 实验内容与方法 (五)显微标本制作 1.非切片法 (1)涂片法：

5、将材料均匀地涂布在载玻片上的一种制片方法； 常用的涂片材料有单细胞生物、小型藻类、血液、细菌培养液、 动植物的疏松组织、精巢、花药等。 (2)铺片法：主要用于动、植物组织的表皮层观察，可活体取 待观察动、植物组织，用尖镊子撕去一层表皮，迅速平铺在载 玻片上。 (3)压片法：压片法是将一些较幼嫩，柔软的生物材料如植物 根尖、花粉粒等置于载玻片和盖片之间，施加一定压力，将组 织细胞压散的一种制片方法。 实验内容与方法 (4)磨片法：用于很坚硬的组织，如骨和牙。 (5)离析法：利用化学试剂使组织的细胞间质溶解，使细胞能 分散成单个个体；适用于肌肉、叶片、茎等部位。 (6)整装片法等：装片法是将生物材料采取整体封固制成玻片 标本的方法，常用材料有：微小生物如衣藻、水绵、变形虫、 水螅，植物的叶表皮；昆虫的翅、足、口器，人的口腔上皮 细胞等。 2.切片法 包括徒手切片法、石蜡切片法、火棉胶切法、冰冻切片 法等类型。 实验内容与方法 3.常用固定剂 (1)包音氏固定液：由苦味酸饱和水溶液、甲醛、冰醋 酸配制。 (2)海利氏液：由重铬酸钾、氯化汞、蒸馏水100毫升、 甲醛液配制。 (3)卡诺固定液：由纯酒精、冰醋酸配制。 (4)约翰森固定液：由福尔马林、丙酸、50% 酒精配制。 实验内容与方法 4.常用染剂 (1)代氏染液 (2)伊红水溶液 (3)番红-固绿对染 (4