高中生物选修一DNA的粗提取与鉴定

1、 本课题使用的洗涤剂是多组分的混合物，在严格的 科学实验中很少使用。实验室提取高纯度的DNA时， 通常使用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷 基硫酸钠（SDS）或吐温等化学试剂。 提取提取DNA的的第一步是材料的选取第一步是材料的选取，其目的是一，其目的是一 定要选取定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由于实含量较高的生物材料，否则会由于实 验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二第二 步是步是DNA的释放和溶解，的释放和溶解，这一步是实验成功与否的这一步是实验成功与否的 关键，要尽可能使细胞内的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；全部

2、溶解；第三步第三步 是是DNA的纯化，的纯化，即根据即根据DNA的溶解特性、对酶及的溶解特性、对酶及 高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与与 杂质分开；杂质分开；最后一步是对最后一步是对DNA进行鉴定进行鉴定，这是对整，这是对整 个实验的结果的检测。个实验的结果的检测。 1 1、请解释提取、请解释提取DNA的实验操作主要步骤的目的的实验操作主要步骤的目的 练习练习 2 2、你认为从细胞中提取某种特定的蛋、你认为从细胞中提取某种特定的蛋 白质与提取白质与提取DNADNA一样容易吗？一样容易吗？ 答：提取蛋白质比提取答：提取蛋白质比提取DNA的的难度

3、大难度大。这是因为，。这是因为， 与与DNA相比，相比，蛋白质对温度、盐浓度、蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件等条件 要敏感得多要敏感得多，很容易失活；并且，很容易失活；并且蛋白质的空间结构蛋白质的空间结构 多种多样，理化性质各不相同多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取，使得蛋白质的提取 没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性 摸索提取的条件，设计特定的方法。摸索提取的条件，设计特定的方法。 2.实验中实验中NaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为2 molL和和 0.14 molL对对DNA有何影响有何影响? 1.在在DNA的粗提取实

4、验过程中，两次向烧杯的粗提取实验过程中，两次向烧杯 中加入蒸馏水的作用是中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaCl浓度使浓度使DNA析出析出 C.使血细胞破裂、增大使血细胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 答：答：B 答：前者是溶解答：前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出 3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )会染成会染成( ) ( ) A. A.砖红色砖红色 B.B.橘黄色橘黄色 C.C.紫色紫色 D.D.蓝色蓝

5、色 4.提取鸡血中的提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液时，为什么要除去血液 中的上清液中的上清液? 答：答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于的提取，关键是对杂质的去除，由于 上清液是血液中的血浆部分，不含上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以，所以 要除去上清液要除去上清液(含有蛋白质含有蛋白质)。 答：答：D 为什么反复地溶解与析出为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？，能够去除杂质？ 1 1、用高盐浓度的溶液溶解、用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除，能除 去去在高盐中不能溶解的杂质在高盐中不能溶解的杂质； 2 2、用低盐浓度使、用低盐浓度使DNA析出，能除去析出，能除去溶

6、溶 解在低盐溶液中的杂质。解在低盐溶液中的杂质。 因此，通过反复溶解与析出因此，通过反复溶解与析出DNA，就能，就能 够除去与够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。溶解度不同的多种杂质。 过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 目的目的: :获得含核物质的滤液获得含核物质的滤液 过滤含粘稠物的过滤含粘稠物的0.140.14mol/LNaCl溶液溶液 目的目的: :获取纱布上的粘稠物获取纱布上的粘稠物 过滤溶解有过滤溶解有DNA的的2 2mol/LNaCl溶液溶液 目的目的: :得到含得到含DNA的滤液的滤液 本实验中有三次过滤本实验中有三次过滤 , ,分别有什么作用分别有什

7、么作用? ? 第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液 加速细胞的破裂加速细胞的破裂 第二次搅拌加第二次搅拌加2 2mol/LNaCl溶液的滤液溶液的滤液 使使DNA与溶液混合均匀与溶液混合均匀 第三次搅拌加蒸馏水至第三次搅拌加蒸馏水至0.140.14mol/LNaCl溶液溶液 稀释稀释NaCl溶液溶液, ,析出析出DNA 第四次搅拌放入第四次搅拌放入2 2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘稠物溶液中纱布上的粘稠物 使使DNADNA尽可能多的溶于溶液中尽可能多的溶于溶液中 第五次搅拌体积分数为第五次搅拌体积分数为95%95%的酒精的酒精 提取含杂质较少的提取含杂质较少的DN

8、A 实验中有五次用玻璃棒搅拌实验中有五次用玻璃棒搅拌? ?分别有什么作用分别有什么作用? ? 方法步骤方法步骤 加入物质加入物质 目的目的 1 1.制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 2 2.提取鸡血细胞细胞核物质提取鸡血细胞细胞核物质 20 m120 m1蒸馏水蒸馏水 幻灯片 18 3 3.溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA 2 m12 m1L L 的的NaCINaCI溶液溶液4040mLmL 幻灯片 18 4 4.析出含析出含DNADNA的黏稠物的黏稠物 蒸馏水蒸馏水 5 5.滤取含滤取含DNADNA的黏稠物的黏稠物 6 6.将将DNADNA的黏稠物再溶解的黏稠物

9、再溶解 2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液20 mL20 mL 7 7.过滤含过滤含DNADNA的的NaCNaCl l 溶液溶液 8 8.提取含有杂质较少的提取含有杂质较少的 DNADNA 冷却的冷却的9595的酒精的酒精50 mL50 mL 幻灯片 18 A A:(1)1)向试管中加入向试管中加入0 0.015 mol015 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)2)加入加入DNADNA (3)43)4 mLmL二苯胺试剂二苯胺试剂 9 9.DNADNA的鉴定的鉴定 B B:(1)(1)向试管中加入向试管中加入0 0.015mol015molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)4 m2)4 mL 二苯胺试剂二苯胺试剂 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 加速血细胞破裂加速血细胞破裂 溶解溶解DNA 使使2mol/L的的NaCl溶液稀释至溶液稀释