戊己水煎液对幽门螺杆菌诱导SGC-7901细胞分泌白细胞介素-8的作用讲解

1、戊己水煎液对幽门螺杆菌诱导 SGC-7901细胞分泌白 细胞介素-8的作用【摘要】目的 观察戊己水煎液(太平惠民和剂局方)对幽门螺杆菌(H pylori)感染的SGC-7901细胞分泌白细胞介素-8(IL-8)的作用。方法 将H pylori接种于SGC-7901细胞,然后加入不同浓度的戊己水煎液,采用酶联免 疫吸附测定法(ELISA)检测SGC-7901细胞分泌细胞因子IL-8的含量。结果戊 己水煎液对H- pylori感染的SGC-7901细胞分泌的IL-8含量明显低于对照组 差异有显著性意义(P0.01)。结论戊己水煎液对Hpylori感染的SGC-7901 细胞分泌IL-8有抑制作用。

2、【关键词】幽门螺杆菌；戊己水煎液；SGC-7901细胞；白细胞介素-8Effect of Wuji Soluti on on Excreti ng In terleuk in-8 ofSGC-7901 Cells In fected with Helicobacter Pylori in VitroTANG Xiao-mei, WU Can-rong1.Gua ngdo ng Medical College, Don gwan 523808,China ； 2.Hunan University of TCM, Changsha 410007,ChinaAbstract : Objective

3、To explore the effect of WujiSolution (He Ji Ju Fang) on excret ing IL-8 of SGC-7901 cells in fected with Helicobacter pylori (H pylori) in vitro. Methods Hpylori wasino culated to SGC-7901 cells. ELISA was applied to exam ine the product ion of in terleuk in-8 (IL-8)of cells in fected with Hpylori.

4、Results The product ion of IL-8 of in fected cells was lower tha n that of control group (P0.01). Co nclution Wuji Solution can in hibit the production of IL-8 of SGC- 7901 cells in fected with H pylori.Key words : Helicobacter pylori ； Wuji Solution ； SGC-7901 cell ； in terleuk in-8自1983年澳大利亚学者分离和培

5、养 H pylori以来,人类对H pylori 与胃黏膜疾病的关系进行了广泛深入的研究。一系列研究结果表明,H pylori是慢性活动性胃炎的主要致病因素1-2,其引起的炎症反应是致病机制之一 3。我国属H- pylori的高感染区，由于化学药物和抗生素的应用，产生了大量的耐药菌株。因此，许多学者从中药中寻求解决的办法。近几年研究显示，运用中药体内外抗H- pylori均有明显的优势,存在很大的潜力。）是传统治疗胃部疾患的良好方 ,其疗效早有报道，但是治疗机理尚不十分清楚。本实验欲从体外探讨戊己丸对H - pylori感染性胃部疾患的中药经方戊己丸（太平惠民和剂局方 剂。在治疗慢性胃炎、消化

6、性溃疡的临床观察中 作用机理。现报道如下。1 实验材料1.1菌株和细胞H - pylori采用国际标准菌株SS1 （sydney strain 1）,该菌株含有细胞空泡毒素（VacA）和细胞毒素相关基因（CagA）。人胃上皮细胞系SGC-7901细胞引自 中南大学湘雅医学院细胞实验中心。1.2 药物戊己水煎液成分取自戊己丸（由黄连、吴茱萸、白芍等比例组成）,湖南 中医药大学药学院植物药化学分析研究室与药物制剂研究室制备（浓度1 g/mL）。抗生素混合液（万古霉素10 mg/L,两性酶素B 2 mg/L,多粘菌素B 0.25 mg/L）自配。1.3 试剂空肠弯曲菌琼脂基础（上海腹泻病控制上海试剂

7、供应研究中心）,RPMI 1640培养液（美国GIBCO司）,小牛血清（杭州四季青生物制品有限公司），白细 胞介素-8（IL-8）试剂盒（上海森雄科技实业有限公司）。胰蛋白酶、DMSC美国 Difco公司）,蛋白质试剂盒（美国Sigma公司）。1.4 仪器WMZK-02型厌氧培养箱，浙江义乌冷冻机总厂；X-SB-1A型倒置显微镜， 广西梧州光学仪器厂；3111型CO2水套培养箱，美国FORM公司；TECAN SUNRIS型酶标分析仪，奥地利。2实验方法2.1 H- pylori 的活化取0.1 mL冻融的Hpylori菌置于改良Skirrow琼脂培养基平板上，涂 布均匀，于37 C微需氧环境（

8、N2 85%,CO2 10%, O2 5%）培养72 h。2.2 细胞培养SGC-7901细胞用含20%小牛血清的RPMI 1640培养液进行培养,转种时 调整细胞的密度（1 X 105个/mL）。2.3 白细胞介素-8的测定利用Hua ng等4-5方法进行。将 SGC-7901细胞（1 X 105/mL）加入24 孔培养板中，用RPMI 1640完全培基培养（含20%、牛血清，加双抗）,48 h后用 Hank s液清洗细胞2次；感染Hpylori :调整Hpylori的浓度,使细胞孔 中细菌浓度分别为1X 104、1X 105、1X 106、1X 107 CFU/mL,加入细胞培养 孔,4

9、mL/孑L。37 C ,微需氧环境培养24 h。取出细胞离心，收集上清,用ELISA 法测IL-8（按照说明书严格操作）,492 nm处测得0D值,按照标准曲线得出IL-8 的浓度。最后确定H- pylori对SGC-7901细胞的最佳感染浓度。测出感染 H- pylori的SGC-7901细胞中IL-8的含量,选择IL-8含量最高的Hpylori 浓度作为感染培养细胞的浓度,然后观察药物在不同浓度（1 ： 160、1 : 320、1 : 640、1 : 1280）下对Hpylori的抑制作用及对IL-8含量的影响。2.4 统计学方法测得指标均用xs表示,采用SPSS11.0进行统计分析。3

10、结果（见表1、表2）表1 不同浓度Hpylo ri对IL-8含量的影响（略）注：与 1X 104组比较,*P0.01,*P0.001 表2 戊己水煎液对 Hpylori诱导SGC- 7901 细胞分泌IL-8含量的影响（略）注：与阳性对照组比较， P0.01 ;与1:160 组比较,#P0.05,#P0.014 讨论本实验用的H- pylori为标准菌株SS1,结果证实,该菌可以刺激SGC- 7901 细胞分泌IL-8 ;将中药戊己水煎液加入感染 H- pylori的细胞中,发现该 药对Hpylori感染的SGC-7901细胞所分泌IL-8的含量明显降低。目前H- pylori的作用机制尚不十

11、分清楚,但炎症反应是H- pylori感 染致病过程中的一个重要环节。其中IL-8显著增加,在黏膜炎症中起着重要作 用6-7。目前认为，胃上皮作为与H- pylori相互作用的主要部位是IL-8的 一个主要来源。IL-8是Hpylori相关性胃炎发生发展中的一个重要调节因子 8-10 。 Martin Guerrero 等11和 Kim 等12发现,H - pylori 感染者胃黏膜 IL-8 mRNA及蛋白产生显著增加，其增加程度与H- pylori数量等相关。 Suzuki13的研究结果与上述研究结果相仿,同时,用IL-8抗体处理黏膜组织后 发现有Hpylori感染黏膜对中性粒细胞的趋化能

12、力明显下降,提示IL-8在 H- pylori相关性胃肠疾病发病中的作用。张氏等14的研究结果与上述结果 相符。同时显示胃窦活动性炎症程度随着胃黏膜内IL-8含量增加而加重，它们之间有显著的相关性。这进一步表明，H - pylori感染诱导IL-8表达增加,加重 局部炎症；提示H- pylori在致胃细胞因子表达、炎症迁延中起关键作用。陈 氏等15检测Hpylori阳性患儿血清IL-8水平,结果显示,H pylori患儿组 较阴性组血清IL-8水平明显升高,差异有显著性（PvO.01）。该结果证实细胞因 子IL-8参与了 H- pylori感染后的致病过程；H- pylori感染胃黏膜产生的炎

13、 症反应损伤与IL-8的过量产生有关。IL-8是一种促炎症因子,能选择性诱导中性粒细胞,T淋巴细胞及嗜碱性 粒细胞趋化，属一种C-X-C趋化因子。有资料报道,IL-8的增多与幽门螺杆菌感 染具有时间-剂量依赖关系，根除幽门螺杆菌后胃液中IL-8含量急剧下降，胃黏 膜中性粒细胞浸润的平均密度也明显降低16。本实验的结果与此报道一致。 H- pylori感染引起胃黏膜大量炎性细胞浸润,由多种趋化因子介导,IL-8能将 血液循环中的中性粒细胞聚集到炎症局部，从而导致胃黏膜炎症，引起一系列胃 肠道症状。本实验的结果表明,戊己水煎液具有减少因Hpylori导致IL-8增加的 作用。这可能是戊己水煎液抑杀

14、 H - pylori,减少细胞炎症，使IL-8含量减少 （因为所用SS1标准菌株含又细菌毒力岛-CagA,它诱导IL-8的分泌）；也可能是 戊己水煎液刺激胃上皮细胞的抗炎症细胞因子分泌，抑制IL-8生成的结果，进而通过抑制胃黏膜细胞IL-8生成，减轻Hpylori对胃黏膜细胞的损伤程度，从而 达到治疗H- pylori相关性胃部疾患的目的。H- pylori可以抑制细胞的生长 繁殖,而戊己水煎液通过抑杀Hpylori,保护感染细胞不坏死；通过调节感染 细胞IL-8分泌量,减少细胞炎症；可能通过保护胃细胞内的脱氢酶等，而使细胞存活率提高。以上实验表明，中药复方戊己水煎液治疗Hpylori相关性

15、胃病有一定 的价值,值得进一步探讨。【参考文献】1 Dooley CP, Cohen H, Fitzgibbo ns PL,et al. Prevale nee of Helicobacter pylori infection and histologic gastritis in asymptomatic pers on sJ. N Engl J Med, 1998,321: 1562 1566.2 Blaser MJ. Gastric Campylobacter-like orga ni sms, gastritisand peptic ulcer diseaseJ. Gastroente

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