梯度洗脱法同时测定双黄连口服液中绿原酸和黄芩苷含量HPLC.

1、安徽医药 AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal 20050ct;9（10）? 749?梯度洗脱HPLC法同时测定双黄连口服液中绿原酸和黄苓苷含量 陈长水，杨志芬,桑旭峰22（1.浙江省宁波市中心血站，浙江宁波 315040;2浙江省宁波市药品检验所，浙江宁 波 315040）摘要：目的 建立梯度洗脱HPLC法同时测定双黄连口服液（金银花,黄苓）中绿原酸和黄苓苷含量的方法。方法采用LUNAC18（2）色谱柱，乙腈20.4%磷酸溶液为流动相（梯度洗脱）,流速为 0.9ml? min-1，检测波长为318nm。结果 绿原酸线性范围为0.86.4g? L-1,平均回

2、收率为 99.3%,RSD=1.3%;黄苓苷线性范围为 9.1673.33g? L-1，平均回收率为99.6%,RSD=1.5%。结论 该方法简便、可靠、准确，可用于该制剂 的质量控制。关键词:双黄连口服液；绿原酸;黄苓苷;HPLC双黄连口服液由金银花、黄苓、连翘提取物制备而成，具有抗菌、抗病毒、退热的功效。中国药典2000年版采用高效液相色谱法仅测定黄苓苷的含量1,为了 更好地控制产品质量，我们借鉴其他制剂中测定绿原酸和黄苓苷含量的高效液相色 谱法2,摸索建立了对该产品同时测定绿原酸和黄苓苷含量的高效液相色谱法。1仪器与试药HP1100高效液相色谱系统：在线脱气机，四元泵，二极管阵列检测器,

3、HP1100化学工 作站;乙腈为色谱纯，水为二次重蒸水，其他试剂均为分析纯；双黄连口服液（批号 021011,021217,021229黑龙江庆安制药股份有限公司 録原酸，黄苓苷的对照品均由 中国药品生物检定所提供。2方法与结果2.1色谱条件 色谱柱:LUNAC18（2）,4.6mmX 150mm,5卩m检测波长为318nm;柱温35C;流速0.9ml? min-1;进样量:10诃梯度洗脱条件 见表1。表1流动相的梯度洗脱时间/min0.4%磷酸溶液乙腈0 98713910877513 25102075252021758725132.2线性关系考察精密称取绿原酸对照品约4mg黄苓 苷对照品约4

4、6mg置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，作为贮备液。精密吸取贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml,分别置5ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶 液至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定。以进样浓度 X(g? L-1)2峰面积丫(mAU)进 行线性回归，得标准曲线回归方程：绿原酸:丫=16246.87X+172.63,r=0.9993(0.86.4g? L-1)；黄苓苷:Y=16134.01X+706.21,r=0.9994(9.16- 73.33g? L-1)。2.3供试品溶液和对照品溶液制备精密吸取双黄连口服液1.0ml,置50ml棕色量瓶中，超声震荡20min后加50%甲醇

5、溶液稀释至刻度，用0.45 yn滤膜过滤，作 为供试品溶液。精密吸取贮备液 2.0ml,置5ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度， 摇匀,即得对照品溶液。2.4干扰性考察按处方量分别取缺味黄苓和缺味金银花的其它药材，参照本品的制备工艺依法制成阴性对照品，按2.3项下供试品溶液制备 的方法制成缺黄苓的阴性对照品溶液和缺金银花的阴性对照品溶液。分别取缺黄 苓的阴性对照品溶液和缺金银花的阴性对照品溶液，按2.1项色谱条件进样，结果分别在黄苓苷色谱峰和绿原酸色谱峰的相应位置上均无吸收峰出现。表明阴性对照 无干扰。2.5样品测定 取供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样，结果以外标法 计算见表2。表2双

6、黄连口服液中绿原酸和黄苓苷含量(n=3)批号 绿原酸黄苓苷含量/mg? ml-1RSD/%含量 /mg? ml-1RSD/% 0210111.3790.915.2121.00212171.2611.312.8311.5021229 1.2851.212.7931.22.6精密度试验精密称取贮备液1.0ml,置5ml棕色量瓶中,加50%甲醇溶液至刻度，摇匀，连续进样6次。绿原酸RSD=1.6%,黄苓苷 RSD=1.3%。2.7回收率试验精密吸取已知含量的样品1ml3份，置250ml棕色量瓶中，分别精密加入贮备液1.0、1.5、2.0ml,加50%甲醇溶液适量，超声20min 后，加50%甲醇溶液

7、稀释至刻度,用0.45 yn滤膜过滤，收集续滤液。照样品测定项下测定,结果见表3。平均回收率：绿原酸=99.3%,RSD=1.3%黄苓苷 =99.6%,RSD=1.5%。2.8 稳定性试验对同一样品，在1、2、3、4、5、6h进样，测得绿原酸峰面积RSD=1.6%;黄苓苷峰面积RSD=1.5%。3讨论 对照品 中绿原酸和黄苓苷色谱峰用二极管阵列检测器对其进行紫外扫描，分析紫外吸收图 谱见图1,可知:绿原酸在318nm有较强吸收，黄苓苷在276、318nm处有较强吸 收。为便于检测，选择检测波长为318nm。表3回收率试验序号样品量/卩g卩入量/卩测得值/卩g收率/%绿原酸黄苓苷绿原酸黄苓苷绿原

8、酸黄苓苷绿原酸黄苓苷232366.660.34686.3101.3102.34、/jKIM3iriil30144图1黄苓苷(A)和绿原酸(B)色谱峰紫外扫描图谱? 750?安徽医药AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal 20050ct;9(10)差示旋光法测定琥乙红霉素片的含量胡德放，黄泽兰,殷美兰1(1.安徽省东至县血防站专科医院，安徽东至 247230;2.安徽省池州市药品检验所 安徽池州 247000)关键词:差示旋光法；琥乙红霉素；含量测定琥乙红霉素(erythromycinethylsuccinate)为红霉素衍生物，广泛用于治疗各种感 染性疾病。琥

9、乙红霉素及其制剂的含量测定在中华人民共和国药典中采用抗 生素生物检定法，操作繁琐，费时,且专属性差，HPLC法1测定琥乙红霉素的含量国 内已有报道，尚未见有差示旋光法测定其片剂的报道。本文利用琥乙红霉素分别在 乙醇和乙醇：盐酸0.1-1mol? L(2 : 1)溶液中的旋光度发生变化的特征，采用差示旋光法，通过测定差示旋光 度差(咪直接测定琥乙红霉素的含量。该法操作简便、快速、准确、重现性好，并与微生物检定法比较，结果满意。1仪器与试药WZZ-2型自动旋光仪(上海物理光学仪器厂);琥乙红霉素对照品(安徽省合肥第六 制药厂提供，每mg相当于770卩)琥乙红霉素片(市售);乙醇、盐酸均为分析纯。2

10、 方法和结果2.1方法与标准曲线的建立精密称取105C干燥至恒重的琥乙红霉素标准品1.7230g置50.0ml量瓶中,加乙醇溶液并稀释至刻度。精密量取上述溶液 1.0、2.0、2.5、3.0、4.0ml各2份,分别置25ml量瓶中，每组分别用乙醇和乙 醇：0.1-1mol? L盐酸(2 : 1)溶液稀释至刻度，摇匀。测定两者的旋光度，计算，以效价浓度对 a作线性回归，求得回归方程:c( 0 ml-1)=19434 a+195.5,r=0.9994表明琥乙红霉 素效价浓度在10614264 0? ml-1范围内与&的线性关系良好。2.2辅料干扰 试验按琥乙红霉素片处方，称取相应的辅料置50.0m

11、l量瓶中,加乙醇稀释至刻度, 摇匀,滤过。取续滤液1.0、2.0、2.5、3.0、4.0ml各2份,分别置25.0ml量瓶中,-1每组分别用乙醇和乙醇：0.1mol? L盐酸(2 : 1)溶液稀释至刻度，摇匀。测得两者 旋光度，计算 a均为零。结果表明辅料对测定结果无干扰。2.3稳定性试验将标准曲线下琥乙红霉素效价浓度为-12653 0 ml的测定溶液在室温下放置2、4、6h后，测定 吉果表明,6h内差示旋 光度稳定。曾选择乙腈20.4%磷酸溶液(20 : 80)的色谱条件，但黄苓苷保留时间过长，一次 检测完成约需40多分钟，经摸索后采用梯度洗脱，极大地缩短了检测时间，并且系统 分离及色谱稳定

12、性均较好。比较其它高效液相色谱法对含绿原酸和黄苓苷制剂的 含量测定3,4,有的色谱条件仅能满足测定黄苓苷含量，而有的虽能同时测定绿原 酸和黄苓苷含量，但仍不能完全排除金银花和黄苓两者成分相互干扰。采用本法，从供试品的HPLC图谱上可以清楚的看到两者成分完全分离，达到了满意的测定条 件。中药复方的成分复杂性，往往难以对多个成分进行分离及检测，采用梯度洗脱进行 分离,运用高效液相法同时测定，不失为中药多成分的分离并同时检测的一种好途 径。本法准2.4回收率试验精密称取琥乙红霉素适量，按处方量加入淀粉,硬脂肪酸镁赋形剂，研细，混匀。精密称取适量，置5010ml量瓶中,加乙醇溶液, 稀释至刻度,摇匀，

13、过滤。配成不同浓度的溶液4份，测定旋光度，计算 a弋入回归 方程计算回收率，结果见表1。X为99.7%,RSD为0.6%。表1回收率试验(n=4)编号123 样品 / 卩 2247.2809.337-1.对照品 / 卩 2261.2790.33521.测得总量/屛4535.5561.6684.853905回收率 /%100.699.399.48770972.5样品测定 取琥乙红霉素片40片，研细，精密称取片粉适 量(约相当于琥乙红霉素100万u),置50.0ml量瓶中，加乙醇溶液并稀释至刻度，摇匀过滤。精密移取续滤液2份，每份3.0ml,各置25.0ml 量瓶中，分别用乙醇和乙醇：0.1ml-

14、1? L盐酸(2 : 1)溶液稀释至刻度，摇匀,按上述方法制三份样品。同时测定两者旋光 度，计算 a弋入回归方程计算含量，同时与生物测定法比较，结果基本一致，见表2。 表2琥乙红霉素片的含量样品12差示分光度法平均含量/%96.397.5RSD/%0.81.3对照品平均含量/%96.797.13 讨论采用差示旋光法测定琥乙红霉素片的含量，可以完全排除辅料对测定结果的影响， 方法准确，可靠。采用差示旋光法测定琥乙红霉素片的含量与生物检测所得结果基 本一致，且操作简便，快速,适合于对产品的快速分析。参考文献：1 项竞佐.HPLC法测定琥乙红霉素口服混悬剂J.药物分析杂志,1994,14(1):54.(收稿日期:2005-04-12)确、可靠、快捷，可应用于实际生产及检验中。参考文献：1 国家药典委员会.中