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文档简介

1、大蒜细胞SOD酶的提取分离与活性测定目的1 掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤。2了解酶在提取过程中的两个参数：回收率、纯化倍数。试剂大蒜， 磷酸缓冲液（ , l） ， 氯仿乙醇混合液冷丙酮， 邻苯三酚， 浓盐酸方法1. SOD提取：称取5g大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞，加入、L的磷酸缓冲 液，研磨搅拌20分钟，使SOD充分溶解，6000rpm离心，弃去沉淀，得上清液。（留出 1ml 备用, 准确量取剩余上清液体积 , 记录）2. 除杂蛋白 ：提取液加入 1/4 体积的氯仿乙醇混合液搅拌 10 分钟， 6000rpm离心15min去沉淀，得粗酶液。（取1ml粗酶液备用，精确测量剩余粗酶

2、液体积） 酶的沉淀分离：剩余的粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min, 6000rpm离心15min,得到SODB沉淀。将沉淀先加2ml磷酸缓冲液，溶解后在加3ml混匀。6000rpm离心15min,取上清得到SOD酶液。取1ml备用，其余量取体积。2.大蒜SOD的提取液活性测定提取液、粗酶液、酶液中SOD舌力检测，1）溶液中可溶性蛋白含量测定：分别从1ml备用的提取液、粗酶液、酶液各取按以下倍数稀释 ，260nm/280nm测 定吸光值 , 按公式计算蛋白质浓度 .提取液稀释:50 X粗酶液稀释:20 X酶液稀释 :10 XX稀释倍数蛋白质浓度（mg/ml）=-计算酶活力单位 U/ml=

3、2 （0D1-0D） X 51（1ml反应液中,每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达到 80%寸的酶量） 总活力U=g力单位X总体积比活力U/mg=S力单位/蛋白质浓度纯化倍数=粗酶液（酶液）比活力/提取液比活力 回收率=粗酶液（酶液）总活力/提取液总活力试验结果记录：1）试剂管OD1OD2空白管对照管提取液粗酶液酶液光吸收值（A）02）蛋白质含量的测定:提取液粗酶液酶液光吸收值（A）（260nm光吸收值(A)(280nm)3）提取液：酶活力单位U/ml =总活力U =蛋白质浓度（mg/ml）=比活力U/mg =粗酶液：酶活力单位U/ml = 总活力U =蛋白质浓度（mg/ml）=比活力U/mg =酶液：酶活力单位U/ml =总活力 U =蛋白质浓度（ mg/ml）=比活力 U/mg =4）粗酶液 : 纯化倍数 =回收率 =酶液 : 纯化倍数 =回收率 =实验结果讨论：粗酶液的实验结果较为正确，操作较为得当，试剂添加较为合理。但是酶液的 纯化倍数较大，而且，回收率好像不太正确，值偏大，可能是添加试剂时的量 不太准确，或可能与添加了过多的石英砂

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