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文档简介
1、.茶多酚的含量测定实验组员:赵龙飞 赵奇慧 刘芳 陈小丽一、实验原理茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯,微溶于油脂。对热、酸较稳定,在碱 性条件下易氧化变质。酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物,络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正 比,络合物在 540nm 处有最佳吸收。因此可以用比色方法测定。二、仪器与试剂仪器:分光光度计、天平、1ml 移液枪、100ml 容量瓶*6、100ml 量筒、100ml 烧杯*310ml ep 管试剂:(1)feso47h2o 1.000g,含 4 个结晶水的酒石酸钾钠 5.000g(2) na2hpo412h2o 6.02g ,nah2po4 2h2o
2、 0.50g(2) 儿茶素标准品 10mg三、操作步骤(1) 酒石酸钾铁溶液:称取 feso47h2o 0.100g ,含 4 个结晶水的酒石酸钾钠 0.500g,加蒸馏水溶解后,用蒸馏水稀释至 100ml。(2) ph7.5 的磷酸缓冲液:6.020g na2hpo412h2o ,0.500g nah2po42h2o, 加蒸馏水溶解后,用蒸馏水稀释至 100ml。(1) 儿茶素标准液:称取 10mg 儿茶素,用蒸馏水定容至 10ml,浓度为 1000g/ml。 分别稀释到 200、400、600、800g/ml,得 5 个浓度标准品溶液。(2) 标准曲线:分别吸取 1ml 标准液,磷酸缓冲液
3、 3ml,酒石酸钾铁 1ml 混匀,3000可编辑.转离心 10min。吸取上清液 3ml 加入玻璃比色皿,用分光光度计测定 540nm 处的 od 值三次求平均值,并绘制浓度-od 标准曲线。以蒸馏水代替标准品溶液加入同样的试剂作空 白对照。(5) 取提取物 10mg,用蒸馏水定容至 10ml。取 1ml,按上述同样方法测定 540nm 处的 od 值 3 次求平均值。以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白对照。四、计算茶多酚含量 w=c/1000100%c : 所测吸光度带入标准曲线得到样品中茶多酚浓度 g/ml1000: 样品浓度 g/ml五、实验结果可编辑.吸光度样品1 23平均浓度
4、含量(%)有机溶剂402.630380.450.449 0.45 0.44966666740.26%萃取法金属离子330.4490.449 0.449 0.449 402.07015 40.21%沉淀法打孔树脂466.2168630%醇洗 0.5250.526 0.525 0.52533333346.62%67脱打孔树脂317.7550350%醇洗 0.3490.349 0.348 0.34866666731.78%33脱打孔树脂0.1110.111 0.111 0.111 118.03185 11.80%80%醇洗可编辑.脱六、实验分析由实验结果看出, 30%的乙醇提取大孔树脂法提取的茶多酚的含量是最高的,而其余的溶剂提取法、金属离子沉淀法,都相对较低。本实验数据不能代表各个提取分离方法的绝 对优略,要视各组在实验过程中的实际操作是否规准确。实验中存在以下问题:1、 标准品溶液浓度过低,吸光值存在负数,仪器不够精密,无法准确测出对应的 od 值。最后修改方案,浓度提高了 20 倍。2、 样品测定时,同样浓度,吸光度却高于标准品,也就是含量超过 100%。经过
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