9-2免疫毒理试验中常用的方法

1、第二节 免疫毒理试验中常用的方法为鉴定外来化合物对免疫系统的毒性，必须建立一系列灵敏、特异、简便、快速 的检测方法，大多数免疫毒理学家认为，要建立一组实验方法来评价免疫毒性。一、病理学常规检查病理学检查对于评价外来化合物对免疫功能的影响十分有用。 外来化合物接触实 验动物后， 对免疫系统的毒性作用可表现为淋巴器官重量或组织学的变化、 淋巴 组织及骨髓的细胞量或质的变化和外周血淋巴细胞数改变。 因此为了观察化学物 质对免疫功能的影响， 首先可对免疫器官进行大体解剖观察， 如果发现胸腺重量 下降和胸腺发生萎缩， 就应着重检查细胞免疫功能； 有人观察到动物接触已烯雌 酚、 TCDD或环磷酰胺，胸腺重

2、量与细胞免疫功能状况呈很好的正相关。二、淋巴细胞增殖反应试验淋巴细胞增殖反应试验是测定 T 细胞和 B细胞功能活性的简便方法， 重复性也较 好。检测方法有形态学方法、 同位素掺入法和颜色反应法。 颜色反应法测定活细胞及 增殖细胞转化程度简单、 快速，在对一定数量细胞测定时， 具有与同位素掺入法 同样的灵敏度，是一种常用的方法。三、体液免疫功能检测 有许多方法可用来检测体液免疫功能，包括抗体滴度、抗体形成细胞（PFC）及B 细胞受体试验等。抗体形成细胞试验是一种敏感而且常用的方法。通常用的抗原有绵羊红细胞 （SRBC）、牛血清白蛋白（ BSA）、卵白蛋白（ 0valbumin ）、脂多糖（ LP

3、S）等。用琼脂单向扩散法测定人血清免疫球蛋白的含量， 虽不很敏感， 但却是很常用的 方法。四、细胞免疫功能检测细胞免疫功能主要由 T 细胞完成，细胞免疫担负着迟发型变态反应、移植排斥、 肿瘤免疫等。用来测定细胞免疫功能的方法有体内法（迟发型变态反应、移植物抗宿主反应、 皮肤移植排斥反应） 和体外法（淋巴细胞增殖、 T 细胞毒性及淋巴因子的产生） 体内检测迟发型变态反应的方法应用较广， 在一般情况下迟发型变态反应可以反 映机体细胞免疫状况。 原理是当致敏的 T 细胞再次接触相应的抗原后， 就能引起 局部的致敏淋巴细胞释放出多种淋巴因子，导致以单核细胞浸润为主的炎症反 应，表现为皮肤红肿硬结。这种

4、反应一般在抗原注射后 2448 小时可以见到。在人体检测迟发型变态反应可采用皮试法。 皮试法中所用的抗原有特异性病原微 生物性抗原，如结核菌素（OT）、白喉病毒、腮腺炎病毒等； 还有非特异性抗原， 如二硝基氯苯、 二硝基氟苯及植物血凝素等。 结果判定是根据硬结的纵横直径平 均值，一般在 5mm以上为阳性反应。动物迟发型变态反应检测常用绵羊红细胞（ SRBC）、牛血清白蛋白（ BSA）、卵 白蛋白（ 0valbumin ）等。在用绵羊红细胞作为抗原时，一般致敏剂量为 l x 108 个细胞，致敏注射部位可在背部皮下注射或腹腔注射，经过 5天后用 l x 108 个 20ul 的 SRBC注射一侧

5、足掌， 另一侧足掌注射生理盐水。 24小时后用精密卡 尺测量双侧足垫的厚度，并以双侧足垫厚度的差值来表示。五、巨噬细胞功能试验 巨噬细胞在免疫反应中具有很重要的作用， 它不仅有非特异性吞噬功能， 还参与 细胞免疫和体液免疫。巨噬细胞有多种功能，例如吞噬作用、胞内杀伤、抗原摄 取和处理、产生干扰素以及对感染细胞或恶变细胞的杀死和溶解作用等。可通过测定体内对异物的清除率、 体内和体外对细菌及细胞的吞噬作用、 对肿瘤 细胞的生长抑制能力来评价巨噬细胞的功能。六、宿主抵抗力试验机体在接触化学物质后， 可改变其对细菌、 病毒、 寄生虫及可移植肿瘤和自发肿 瘤的抵抗力。一般认为， B细胞缺损，机体对细菌敏

6、感性升高； T 细胞缺损，则 对病毒、寄生虫、肿瘤敏感性增高。这种试验是在动物身上进行的整体试验。1肿瘤细胞攻击试验本试验用纯系小鼠观察机体对同系基因的肿瘤细胞的抵抗 力。攻击所用的肿瘤细胞量是使 10%20%正常动物发生肿瘤的量。观察指标为 肿瘤发生率、死亡率、发生肿瘤的平均潜伏期、肿瘤大小、结节数目以及平均死 亡时间等。2对传染源的抵抗试验在免疫毒性试验中常用的传染源有病毒、 细菌、 寄生虫。 实验选用传染源时需考虑以下方面， 它对人类或其它动物的危险性； 动物是否易 感；产生的病变是否有重复性； 机体防御机制中是否需要 T或 B细胞参与；感染 过程是否易于观察。 最常用的指标是死亡率。 接种剂量应相当于在正常小鼠产生 死亡率为 10