嗜水气单胞菌CphA酶与碳青霉烯类抗生素之间的分子识别和相互作用_第1页
嗜水气单胞菌CphA酶与碳青霉烯类抗生素之间的分子识别和相互作用_第2页
嗜水气单胞菌CphA酶与碳青霉烯类抗生素之间的分子识别和相互作用_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、嗜水气单胞菌 cpha 酶与碳青霉烯类抗生素之间的分子识别和相互作用金属 -内酰胺酶(metallo-beta lactamase,m ls)通过水解 -内酰胺抗生素的 -内酰胺环而阻止抗生素对抗细菌感染的有益行为。来自于嗜水气单胞菌的 cpha 酶是 m ls 亚群的一员,其在活性位点只有一个 zn2+,并只特异性水解 碳青霉烯类抗生素。然而对于 cpha 酶与碳青霉烯类抗生素之间的分子识别和相互作用知之甚少。本研究将在重组菌中表达并分离纯化得到 cpha 酶的基础上,采用荧光光谱法和分子对接模拟法相结合,以亚胺培南(imipenem,imp)和比阿培南(biapenem,bia)为研究对象

2、,研究它们在结合过程中,酶的构象变化、抗生素分子的空间分布取向、 形成络合物的本质以及它们之间的作用力类型和作用位点数等。(1)将含有 pet28b-cpha 的大肠杆菌 bl21(de3)进行诱导表达,通过阳离子交换层析分离纯化,然后用 sds-page 鉴定和 bradford 测蛋白含量,最后对其进行荧光表征。结果表明:得到有活性的纯度较高的样品,其分子量约为 28 kda,纯化后产量约为 0.180.21 mg/ml,当激发波长为 278 nm 时,发现在 336.2 nm 处荧光 明显。(2)在 277 k、ph 7.4 pbs 中,测得 cpha 酶对 imp 与 bia 的 km

3、 分别为356 m 和 286 m;通过荧光发射光谱测得 cpha 酶与 imp 和 bia 的分子饱和比分别为 0.95 和 0.98;同步荧光光谱结果表明:它们相互作用且 tyr 残基附近的微环境发生微弱的变化;测定 277 k、281 k 和 285 k 三个温度下 cpha 酶分别对 imp和 bia 结合过程的猝灭光谱,结果表明:它们之间发生的猝灭均为静态猝灭;它们之间是依靠单一的结合位点结合,且均为自发的放热过程。(3)分子对接结果显示cpha 酶与 imp 和 bia 在结合过程中存在一些相同之处:两种抗生素-内酰胺环的 c3 羧基氧直接与 zn2+形成金属配位键,促进相互作用,且均使 cpha 酶 loop 环 发生局部的构象变化。不同之处为:imp 因侧链空间位阻较小,使其全部进入口袋,在相互作用过程中,共有 3 组静电力和 5 组氢键形成;bia 因侧链双环三唑的位阻比较大,留部分侧链位于口袋外侧,在相互作用过程中,共有 4 组静电力和 2 组氢键,进而使得cpha 酶对 bia 的亲和力大于对 imp 的,以及形成 cpha-bia 复合物的稳定性也大于 cpha-imp 复合物的稳定性。荧光光谱结果中 cpha-bia 复合物体系的 ksv 和 ka 高于 cpha-imp 复合物体系的,

人人文库> 全部分类> 生活休闲 > 科普知识

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论