盐酸普萘洛尔含量的HPLC测定研究

1、毕 业 论 文 题 目 盐酸普萘洛尔含量的HPLC测定研究 专 业 应用化学 班 级 091班 姓 名 吴XX 指导教师 李成平(教授) 所在学院 生物与环境工程学院 完成时间：20XX年 6月承 诺 书我谨此郑重承诺：本毕业设计（论文）是本人在指导老师指导下独立撰写完成的。凡涉及他人观点和材料，均依据著作规范作了注释。如有抄袭或其它违反知识产权的情况，本人愿接受学校处分。 承诺人（签名）： 年 月 日盐酸普萘洛尔含量的HPLC测定研究生物与环境工程学院应用化学专业 吴XX摘 要 ：本文采用高校液相测定了盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘洛尔的含量，固定相为：安捷伦c18(46 mill X 250 m

2、m，5urn)，甲醇一醋酸钠缓冲溶液pH=5.51(70：30)为流动相，检测波长为290nm；结果盐酸普萘洛尔在25125ug/ml范围内呈现良好的线性关系，r=0.9998盐酸普萘洛尔的平均回收率为94.05，RSD为0.14(n=9)；此方法简便、准确、重现性好，可用于盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘 洛尔的含量测定。 关键词 高效液相色谱法；盐酸普萘洛尔；含量Determination ofPropranolol Hydrochloride Tablets by HPLCwu hanyu, Major in Chemistry Speciality , College of Biology a

3、nd Environmental EngineeringAbstract: To establish a HPLC method for determination the content of propranolol hydrochloride tablets .Method :Diamonsil C18 column (4.6mm 150mm ,5 um), was used,the methanol-Sodium acetate solution pH=5.51(70:30) as mobile phase, the flow rate was 1.0 ml min-1 , the de

4、tection wave length was 290 nm. Result :The method showed a good linear relationship within the range of 25125ug/mL,r=0.9998,the average recovery was 94.05%with RSD0.14(=9).Conclusion :the method is simple ,rapid ,reliable . Key words: HPLC ; Propranolol hydrochloride ;Determination 目 录1 引 言11.1 本课题

5、研究的背景12 研究内容22.1 仪器和药品22.2 实验过程22.2.1 流动相的选择试验52.2.2 色谱条件52.2.3 溶液配制52.2.1 流动相的选择试验52.3 方法与结论32.3.1 标准曲线的制备52.3.2 精密度和重复性试验52.3.3 稳定性试验52.3.4 加样回收率试验52.3.5 样品含量测定52.3.6 有关物质的检查方法52.3.7 分离专属性53 试验结果与讨论3.1 试验结果43.2 讨论4致谢10参考文献111 引 言1.1 本课题研究的背景一项有关亚洲心血管疾病治疗的研究结果显示，亚洲一半以上的心血管疾病患者，因不能按时定量服药而未实现疗效。2009年

6、亚太心血管峰会19日在北京召开，会上首次公布了泛亚高胆固醇血症治疗情况研究（CEPHEUS）的研究结果。CEPHEUS是由亚洲顶级心血管专家进行的一项科学研究，旨在调查高胆固醇血症（血液胆固醇含量高）的治疗情况。而血液胆固醇含量升高是导致心血管疾病的主要危险因素。研究人员对逾7千名心血管疾病患者和医生进行调查，结果显示患者当中441%偶有忘记吃药的情况，四分之一的患者认为忘记吃药并不会影响治疗。而参与研究的医学教授则表示，治疗心血管疾病最好的方法就是遵医嘱服药，而患者没有认识到这一点。研究还指出，改变生活方式也是降低胆固醇，治疗心血管疾病行之有效的方法。医学专家认为，亚太地区生活方式最严重的问

7、题是吸烟，中国尤其如此。中国卫生部发布的2007年中国控制吸烟报告指出，中国约有35亿吸烟者，每年死于吸烟相关疾病的人数近100万。世界卫生组织2004年全球疾病负担报告指出，心血管疾病是全球头号杀手，2004年全球有17000万人死于心血管疾病，到2030年之前，死亡人数预计超过两千三百万。普酸普萘洛尔是B-受体阻断药，应用于心绞痛、高血压、心律失常等的治疗。盐酸普萘洛尔片含量测定方法有紫外分光光度法、二阶导数分光光度法、高效液相色谱法，本文采用高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔片的含量，方法简单、快速，结果可靠。盐酸普蔡洛尔，其化学名称为异丙氨基萘氧基丙醇盐酸盐。分子式：C16H21NO2HC

8、l ，分子量：295.81。盐酸普萘洛尔的主要药理作用：1 用于治疗心绞痛；2 用于治疗高血压；3 竞争性拮抗异丙肾上腺素和去甲肾上腺素的作用，阻断2受体，降低血浆肾素活性。抑制胰岛素分泌，使血糖升高，掩盖低血糖症状，延迟低血糖的恢复。4 有明显的抗血小板聚集作用，这主要与药物的膜稳定作用及抑制血小板膜Ca2+ 转运有关。2 研究内容2.1 仪器和药品高效液相色谱系统：Varian9012三元泵、9050紫外可见检测器、Star5.31数据处理工作站、Varian Cary100 紫外可见分光光度计、盐酸普萘洛尔对照品由食品药品监督局提供（含量为99.9%）；盐酸普萘洛尔片为市售药品；甲醇为色

9、谱纯；醋酸钠为分析纯。2.2 实验过程2.2.1 流动相的选择试验运用不同比例的流动相：(1)、甲醇-水；(2)、乙腈-水；(3)、丙酮-水；(4)、甲醇-0.05 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调pH为4.0；(5)、甲醇-0.05 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调pH为6.0；(6)、甲醇-0.05 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调pH为7.0；(7)、甲醇-0.02 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调pH为6.01；(8)、甲醇-0.02 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调pH为6.48；(9)、甲醇-0.02 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调pH为5.51；进行峰型、保留时间、理论塔板数、拖尾因子等因数的比较，结

10、果表明，甲醇-0.02 mol/L醋酸钠溶液pH为5.51（70:30）为佳，分离度好，分析时间不长，出峰时间约为8 min。但在其他的流动相比例时：有的峰型出现拖尾的现象比较严重，有的出峰时间太早的情况，使得甲醇-0.02mol/L醋酸钠比例在（70:30）最为合适。2.2.2 色谱条件色谱柱：C18（250mm4.6mm）；流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸钠溶液用醋酸调pH为5.51（70:30）；流速：1.0mL/min；检测波长：290nm；进样量：20ul。盐酸普萘洛尔峰与相邻杂质峰的分离度符合要求。A对照品B样品图1HPLC色谱图2.2.3 溶液配制对照品溶液的配制：取盐酸普

11、萘洛尔片对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中约含盐酸普萘洛尔100ug的溶液，溶液经0.45um滤膜滤过。供试品溶液的配制：精密量取样品适量，加甲醇稀释制成每1ml中约含盐酸普萘洛尔100ug的溶液，溶液经0.45um滤膜滤过。2.3 方法与结论2.3.1 标准曲线的制备取盐酸普萘洛尔对照品10mg，精密称定置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液0.25ml,0.5ml,0.75ml,1.0ml,1.25ml置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45um滤膜滤过，进样。结果表明，盐酸普萘洛尔在25125ug/ml浓度范围内峰面

12、积与浓度呈良好的线性关系，回归方程为y=24.994x+25.412 ，R2=09996，结果见图1。图2盐酸普萘洛尔标准曲线2.3.2 精密度和重复性试验取盐酸普萘洛尔对照品储备液1ml置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用0.45um滤膜滤过连续进样3次，测得峰面积，计算RSD为0.03%。取盐酸普萘洛尔供试品100ug/ml的溶液，连续进样3次按外标法计算，其平均含量为93.44%，RSD为1.33%。2.3.3 稳定性试验取盐酸普萘洛尔片1片（约相当于盐酸普萘洛尔10mg），置于50ml烧杯中，加甲醇溶解完全后转移到100ml容量瓶中，淋洗烧杯3次，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45um

13、滤膜滤过。分别在1,4,8,12,24小时测定，记录峰面积，RSD为0.53%。 组分名 保留时间(min) 峰高(mV) 峰面积(mV.sec) 浓 度 样品含量(%) Unknown 7.73000 84.19 2722.04 0.0000 0.0000 图3-1小时后 组分名 保留时间(min) 峰高(mV) 峰面积(mV.sec) 浓 度 样品含量(%) Unknown 7.79667 84.61 2722.27 0.0000 0.0000 图4-4小时后 组分名 保留时间(min) 峰高(mV) 峰面积(mV.sec) 浓 度 样品含量(%) Unknown 7.79750 85.2

14、6 2720.27 0.0000 100.0000 图5-8小时后组分名 保留时间(min) 峰高(mV) 峰面积(mV.sec) 浓 度 样品含量(%) Unknown 7.70000 88.41 2721.63 0.0000 0.0000图6-12小时后组分名 保留时间(min) 峰高(mV) 峰面积(mV.sec) 浓 度 样品含量(%) Unknown 7.70083 88.36 2721.74 0.0000 0.0000图7-24小时后2.3.4 加样回收率试验取盐酸普萘洛尔供试品储备液0.5ml至10ml容量瓶中，分别加入0.2ml，0.4ml，0.6ml盐酸普萘洛尔对照品储备液，

15、再加入甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45um滤膜滤过，再进样。用外标法测定计算平均回收率为94.05%，RSD为0.14%。结果见表一。表一回收率测定结果样品浓度标样浓度测得浓度回收率平均回收率RSD（ug/ml）（ug/ml）（ug/ml）（%）（%）（%） 502065.81 94.01 94.050.1465.85 94.07 65.79 93.99 504084.51 93.90 84.70 94.11 84.73 94.15 5060103.36 93.96 103.78 94.34 103.35 93.95 2.3.5 样品含量测定精密量取样品适量，加流动相甲醇稀释制成每1ml中约含

16、盐酸普萘洛尔100ug的溶液，溶液经0.45um滤膜滤过，滤液作样品溶液。另取盐酸普萘洛尔对照品，加流动相甲醇制成100ug/ml的溶液作对照溶液，按上述色谱条件，分别进样20uL。结果见表二。表二样品含量测定盐酸普萘洛尔对照品溶液123浓度（ug/ml）100100100峰面积2722.042722.272720.73平均峰面积2721.68RSD0.03%盐酸普萘洛尔供试品溶液123峰面积2582.47 2525.33 2522.00 浓度（ug/ml）94.89 92.79 92.66 平均浓度（ug/ml）93.44 RSD1.33%2.3.6 有关物质的检查方法分别精密量取对照品和供

17、试品的储备液适量，加流动相制成每1mL约相当于盐酸普萘洛尔100ug的溶液。溶液经0.45um滤膜滤过，再取供试品溶液和对照溶液各20uL,分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍。供试品溶液如显杂质峰，则各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积。图8-对照品图9-供试品2.3.7 分离专属性精密量取对照品储备液适量，加流动相制成100ug/mL的溶液，共3份，分别经0.1mol/L的酸、碱和1%（体积分数）的过氧化氢溶液经过60恒温处理2小时。再取样测定，记录色谱图。图10-酸破坏图11-碱破坏图12-过氧化氢破坏2.3.8 最低检测限和定量限最低检测限和定量限分别是基线噪音的3倍

18、峰高和10倍峰高。通过电脑软件计算出基线噪声为86.21uv，再经过一遍一遍的降低盐酸普萘洛尔的浓度，进样，获得色谱峰，计算，最后得出最低检测限为0.1ug/mL浓度的盐酸普萘洛尔溶液而最低定量限位0.3ug/mL浓度的盐酸普萘洛尔溶液。3 试验结果与讨论3.1 试验结果在有关物质的检测中，对比供试品的色谱峰和对照品的色谱峰可以发现两者的峰型较好，没有明显的杂质峰，说明了供试品盐酸普萘洛尔片内的杂质较少。在分离专属性的过程中，在酸破坏、碱破坏和过氧化氢破坏的环境下，盐酸普萘洛尔的峰型依旧没有改变。通过这一测试，说明盐酸普萘洛尔的化学成分很稳定。3.2 讨论在实验的过程中，走过不少的弯路。最初，

19、盐酸普萘洛尔溶液的配制选择的溶剂是水，由于在文献上看到学者在配制盐酸普萘洛尔溶液时有人选择水做溶剂，也有人选择流动相作为溶剂。经过考虑，在最开始的时候选择了水溶解盐酸普萘洛尔片，但是，发现峰型非常不好，后来经过老师的提醒，用流动相配制盐酸普萘洛尔溶液，最终得到较好的峰型。在流动相的选择上，用了不同比例的甲醇-醋酸钠溶液，以及不同pH值的醋酸钠溶液，比较了各自的保留时间和理论塔板数等因数，最终选择甲醇-0.02 mol/L醋酸钠溶液pH为5.51（70:30）作流动相。致谢 在本次论文的撰写中，我得到了李成平教授的精心指导，不管是从开始定方向还是在查资料准备的过程中，一直都耐心地给予我指导和意见

20、，使我在总结学业及撰写论文方面都有了较大提高；同时也显示了老师高度的敬业精神和责任感。在此，我对李成平教授表示诚挚的感谢以及真心的祝福。 四年大学生活即将结束，回顾几年的历程，老师们给了我们很多指导和帮助。他们严谨的治学，优良的作风和敬业的态度，为我们树立了为人师表的典范。在此，我对所有的生环学院的老师表示感谢，祝你们身体健康，工作顺利！最后，对即将参加论文评议、评阅和对本论文提出宝贵意见的所有专家和老师表示诚挚的感谢。吴寒雨2012年5月姓名与序号间空一个西方字符。中文参考文献两个作者中用逗号分隔，三个以上作者只写三个，后面加“，等”。作者、文献名、期刊（出版地）间以全角小圆点“”分隔。英文

21、参考文献标点符号用半角，字体用Times New Roman，小五号，三个以上作者只写三个后面加“et a.l”（斜体）参考文献序号必须与正文中对应，Times New Roman，小5号，左顶格。参考文献1 沈耀良，王宝贞废水生物处理新技术理论与应用M北京：中国环境科学出版社，1999，(04)：33-372 李科林啤酒工业废水处理与利用技术研究进展J中南林学院学报，1999，(01)：71-723 孙金融啤酒生产废水综合治理和探讨J环境保护，1995，(11)：8-104 何增耀，叶兆杰农业环境科学概论M上海：上海科学技术出版社，1991，(03)：20-23用“M”等在文章标题后标识各参考文献的类型。专著“M”，论文集“C”，期刊文章“J”，学位论文“D”，报告“R”，报纸“N”标准“S”；网上资料，如引用的是数据库，用“DB/OL”表示；如引用的是电子文献，用“E