实验4放线菌、酵母菌、霉菌形态观察.

1、实验四 放线菌、酵母菌、霉菌形态观察（一）放线菌的形态观察1 目的观察放线菌的基本形态特征 掌握培养放线菌的几种方法2 原理 放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝（营养菌丝 ）、气生菌丝或有孢子丝三种。 放线菌生长到一定阶段， 大部分气生菌丝分化成孢子丝， 通过横割分列的方式产生成 串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。孢子也有 球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。 放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似， 后期形成孢子菌落呈粉状、 干燥， 有各种颜 色呈同心圆放射状。3 材料3.1 菌种灰色链霉菌 （S

2、tr. griseus）, 天蓝色链霉菌 （Str. coelicolor）, 细黄链霉菌（ Str.microflavus ）。Q O Z推甘3.2 培养基 高氏 1 号培养基。3.3 器皿培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀（或刀片 ）、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。4 流程4.1插片法：倒平板t插片t接种t培养t镜检t记录绘图4.2压印法：倒平板T划线接种T挑取菌落T加盖玻片T镜检T记录绘图4.3埋片法：倒琼脂T切槽T接种T培养T镜检T记录绘图5 步骤5.1 插片法5.1.1 倒平板将高氏 1 号培养基熔化后，倒 1012 毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用 .

3、5.1.2 插片将灭菌的盖玻片以 45 度角插入培养皿内的培养基中，插入深约为 1/2 或 1/3（图 5-1）。5.1.3 接种与培养用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线，放置28 C培养37天。5.1.4 观察培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上， 小心用镊子将盖玻片抽出， 轻轻擦去生长较差的一 面的菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压放于载玻片上。直接在显微镜下观察。5.2 压印法5.2.1 制备放线菌平板同 5.1.1 。在凝固的高氏 1 号培养基平板上用划线分离法得到单一的放线菌菌落。5.2.2 挑取菌落用灭菌的小刀 （或刀片 ）挑取有单一菌落的培养基一小块，放在洁净的载玻

4、片上。5.2.3 加盖玻片用镊子取一洁净盖玻片，在火馅上稍微加热（注意：别将盖玻片烤碎），然后把玻片盖放在带菌落的培养基小块上，再用小镊子轻轻压几下，使菌落的部分菌丝体印压在盖玻片上。5.2.4 观察将印压好的盖玻片放在洁净的载玻片上(菌体朝向载玻片 )，然后放置在显微镜下观察。5.3 埋片法5.3.1 倒琼脂平板将已配制、灭菌的高氏 l 号琼脂培养基熔化，通过无菌操作倒入灭菌的培养皿底，倒均，将整个培养皿盖住使凝固。一般 f=9cm 的培养皿约倒入 15mL 培养基。5.3.2 接种与培养在已凝固的琼脂平板上用灭菌小刀切开两条小槽， 宽度小于 1.5cm 。把放线菌接种在小槽 边上，盖上已灭

5、菌的盖玻片，盖好培养盖。将制作好的平板放在28 C恒温箱培养3-4天。5.3.3 观察取出培养皿， 可以打开皿盖， 将培养皿直接置于显微镜下观察； 也可以取下盖玻片， 将其 放在洁净载波片上，？放在显微镜下观察。6 结果6.1 观察并绘制放线菌的孢子丝形态，并指明其着生方式。6.2 绘图和描述自然生长状态下观察到的放线菌形态6.3 比较不同放线菌形态特征的异同7 思考1 在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？2 比较实验中采用的几种观察方法的优缺点。(二) 酵母菌的形态观察1 目的1.1 观察啤酒酵母的个体形态及其无性繁殖。1.2 观察假丝酵母的菌体结构、假菌丝以及繁殖特点。2

6、原理真菌是具有真正细胞核的真核生物， 包括酵母菌、 霉菌和大型？真菌三大类型。本部分主要介绍如何观察酵母菌的显微形态结构。酵母菌是单细胞的真核微生物， 细胞核和细胞质有明且分化， 个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖 和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母细胞在一系列的芽殖后， 如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。3 材料3.1 器械 接种针、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸管、显微镜、镊子、恒温培养箱。3.2 培养基与染液配制麦芽汁培养基、肉汤蛋白胨培养基、孔雀绿染液、 0.1

7、？美蓝液、3.3 菌种啤酒酵母( Saccharomyces cerevisiae )，假丝酵母( Candida.spp. )的试管斜面菌种。4 流程啤酒酵母镜检t假丝酵母镜检t酵母菌死活细胞镜检t子囊孢子镜检5 步骤5.1 啤酒酵母形态观察取一洁净载玻片， 在载玻片上滴一滴无菌水， 用接种环挑取少许啤酒酵母菌苔置于无菌水 中，用接种环轻轻划动，使其分散成云雾状薄层；另取一盖玻片，小心覆盖菌液。在显微镜 下观察酵母细胞的形状、大小及出芽方式。5.2 假丝酵母观察用划线法将假丝酵母接种在麦芽汁平板上，在划线部分加无菌盖玻片，于28 30 C培养3 天，取下盖玻片， 放到洁净载波片上， 在显微镜

8、下观察呈树枝状分枝的假菌丝细胞的形状， 或打开皿盖，在显微镜下直接观察。5.3 酵母菌死活细胞的检查载片上加一滴 0.1 的美蓝， 用接种环挑取少许酵母菌苔置于美兰液滴中， 用接种环划动， 使其分散均匀，加盖玻片，在显微镜下观察，死细胞为兰色，活细胞无色。5.4 子囊孢子的观察将啤酒酵母接种于麦芽汁液体培养基中，于2830 C恒温箱中培养 24小时，连续转接培养34次；再转接到肉汁蛋白胨培养基中，在 2528 C的恒温箱中培养 3天左右，最 后经过涂片染色后 (按芽孢染色法 )，观察子囊孢子形状和特点， 以及每个子囊内的孢子数等。 6 结果把观察到的各种酵母绘图，并注明各部分名称。7 思考7.

9、1 在酵母菌死活细胞的观察中，使用美兰液有何作用？7.2 比较假丝酵母与啤酒酵母形态的异同。(三) 霉菌的形态观察1 目的1.1 观察霉菌的菌丝以及菌丝体。1.2 观察霉菌营养和气生菌丝体的特化形态1.3 学会用水浸法观察霉菌的技术。2 原理霉菌形态比细菌、 酵母菌复杂，个体比较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。 霉菌 营养体的基本形态单位是菌丝， 包括有隔菌丝和无隔菌丝。 营养菌丝分布在营养基质的内部， 气生菌丝伸展到空气中。 营养菌丝体除基本结构以外， 有的霉菌还有一些特化形态，例如假根、匍匐菌丝、吸器等。霉菌的繁殖体不仅包括无性繁殖体，例如分生孢子，孢子囊等，包 裹其内或附着其上的有

10、各类无性孢子； 还包括有性繁殖结构， 例如子囊果， 其内形成有性孢 子。在观察时要注意细胞的大小，菌丝构造和繁殖方式。3 材料3.1 器械接种针、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸管3.2 药品乳酸一石炭酸液、 PDA 培 养基 (配方见附录 )3.3 菌种黑 根 霉 ( Rhizopus nigricans )、 总 状 毛 霉 ( Mucor racemosus )、 产 黄 青 霉 ( Penicillum chrysogenum )、木霉( Trichoderma spp. )、黑曲霉( Aspergillus nigricans )、 犁头霉( Absidia spp. )等斜面菌种

11、。4 流程倒平板t接种t制片t镜检t描述绘图5 步骤5.1 倒平板将 PDA 培养基熔化后，倒 1012 毫升左右于灭菌培养皿内，凝固后使用。5.2 接种与培养将青霉、木霉、毛霉、曲霉、根霉等接种在不同的平皿中。置于28 30 C的恒温箱中培养 3-7 天。5.3 制水浸片分别置于不同的观察菌丝体。取洁净的载玻片， 滴加一滴乳酸一石炭酸液， 挑取不同菌株的一团菌丝， 载玻片上（用记号笔标记菌株名称） ，加盖玻片。5.4 观察5.4.1 观察青霉、木霉、毛霉、曲霉形态选取标记青霉、 木霉、毛霉、 曲霉的载玻片， 观察霉菌的菌丝及其分隔情况。 观察分生孢子着生情况 （要求辨认分生孢子梗、顶囊、小梗及分生孢子）。5.4.2 观察根霉形态选取标记