人S100 β解读

1、人S100- p蛋白ELISA 检测试剂盒说明书最近更新时间：2010-08-14提 供商：研域（上海）化学试剂有限公司 资料大小：0K文件类型：下载次数:资料类型：浏览次数:532次相关产品:详细介绍:人S100- p蛋白ELISA 检测试剂盒用途:液及各种体液中的 S100- p。本试剂盒可以检测天然和重组的 科研、而非用于临床诊断。S100-人S100- p ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清 p 。本试剂盒专用于试验原理:（ELISA ）S100- p已知S100- p浓度的和生物素标记的抗体人S100- p试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验 标准品、未

2、知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将 同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B,和酶结合物同时作用。 产生颜色。颜色的深浅和样品中 S100- p的 浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8 C保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：40n g/ml1 瓶（0.6ml ）1 瓶（ 0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1 瓶（1.0ml ）1 瓶（ 0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1 瓶（5ml）1 瓶（ 2.5ml）即用型生物素标记

3、的抗S100- p抗体1 瓶（6ml）1 瓶（ 3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1 瓶（10ml）1 瓶（ 5.0ml）即用型洗涤缓冲液1 瓶（60ml）1 瓶（30ml）按说明书进行稀释底物A1 瓶（6.0ml ）1 瓶（ 3.0ml）即用型底物B1 瓶（6.0ml ）1 瓶（ 3.0ml）即用型终止液1 瓶（6.0ml ）1 瓶（ 3.0ml）即用型自备材料蒸馏水。加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。 振荡器及磁力搅拌器等。安全性此试剂盒的人血制品中的 HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可完全保证此血制 品不会传染肝炎、AI

4、DS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及 血清和血浆等样品。避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 不用的其它试剂应包装好或盖好。 使用一次性的吸头以免交叉污染， 的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应

5、充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取0D值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、血清-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000 X g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 X g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液-1000 X g离心10分钟去除颗粒和聚合物。保存-如果样品不立即使

6、用，应将其分成小部分-70 C保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒， 检测前先离心或过滤。不要在37 C或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1.标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀 释比例按下表中进行：40 ng/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。20 ng/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液10 ng/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液5.0 n g/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入10

7、0ul的标准品稀释液2.5 n g/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液1.25 ng/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0 ng/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。2.洗涤缓冲液（20 X）的稀释：蒸馏水 20倍稀释。操作步骤使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气 泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。加入稀释好后的标准品 50ul于反应孔、加入待测样品 50

8、ul于反应孔内。立即加入 50ul 的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37 C温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37 C温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物 A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37 C温育15分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的 OD值。建议使

9、用的实验方案A4040样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B2020样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C1010标准品浓度（ng/ml ）样品样品E2.52.5样品样品F1.251.25样品样品G00样品样品H样品样品样品样品样品样品D5.05.0样品 样品 样品 样品 样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品 样品 样品 样品 样品样品 样品 样品 样品 样品样品 样品 样品 样品 样品样品 样品 样品 样品 样品结果分析以吸光度0D值为纵坐标（丫），相应的S100- 3标准品浓度为横坐标（X），做得相应的 曲线，样品的S

10、100- 3含量可根据其 0D值由标准曲线换算出相应的浓度。局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。试剂盒性能灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。特异性：不与人其它细胞因子反应。重复性：板内、板间变异系数均小于10% 。3.人（Human ） S100- p ELISA检测试剂盒说明书点击次数：199发布时间：2011-6-20人（Human ） S100- p ELISA检测试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 试验原理:S100- p试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ ELISA ）.

11、已知S100- p浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将S100- p和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入S100- p的浓度呈比例底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中 关系。试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8 C保存）96孔配置48孔配置 配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T ）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型按说明书进行稀稀标准品：40ng/ml 1 瓶（0.6ml ）1 瓶（0.3ml ）空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml ）即用型标准品稀释

12、缓冲液 1瓶（5ml）1 瓶（2.5ml ）即用型生物素标记的抗 S100- p抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml） 即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml ）1瓶（5.0ml ）即用型（10ml ）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml ）1 瓶（3.0ml ）即用型底物B 1瓶（6.0ml ）1 瓶（3.0ml ）即用型终止液1瓶（6.0ml）1 瓶（3.0ml ）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶自备材料蒸馏水。加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振荡器及磁力搅拌器等。安全性避免直接接触终止液和底物 A、B。一旦接触到这些液体，请尽

13、快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。12操作注意事项 试剂应按标签说明书储存， 使用前恢复到室温。 稀稀过后的标准品应丢弃， 不可保存。3不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B 液时，避免使用带金属部分实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。的加样器。5使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。67免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD 值。8. 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9 按照说明书中标明的

14、时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1 、 血清 操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000 Xg离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆 EDTA 、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000Xg 离心 30 分钟去除颗粒。3、细胞上清液 -1000 Xg 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。4、保存-如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 C保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37 C或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1 . 标

15、准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。40 ng/ml（ 6 号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul 。20 ng/ml（ 5 号标准品）100ul 的原倍标准品加入100ul 的标准品稀释液10 ng/ml（ 4 号标准品）100ul 的 5 号标准品加入100ul 的标准品稀释液5.0 ng/ml（ 3 号标准品）100ul 的 4 号标准品加入100ul 的标准品稀释液2.5 ng/ml（ 2 号标准品）100ul 的 3 号标准品加入100ul 的标准品稀释液稀释比例按下表中进行：1 号标准品）100ul 的 2 号标准品加入 100ul 的标准品

16、稀释液1.25 ng/ml0 ng/ml （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul 。2.洗涤缓冲液（50 X）的稀释：蒸馏水 50倍稀释。操作步骤1 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物 A 应挥发，避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。避气泡，产生加样上的误差。2 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做 复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3 加入稀释好后的标准品 50ul 于反应孔、 加入待测样品

17、50ul 于反应孔内。 立即加入 50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37 C温育1小时。4 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操 作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37 C温育30分钟。6 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操 作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。78每孔加入底物 A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37 C温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入 50ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果

18、。9在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。建议使用的实验方案标准品浓度（ ng/ml ）A 40 40样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B 20 20样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C 10 10样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品D 5.0 5.0E 2.5 2.5样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品F 1.25 1.25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品局限6 号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关