临床基因检测实验室建设要求

1、临检实验室建设标准与要求一、面通量测序（NGS）实验室简介1. 1NGS实验室乂叫高通量测序检测实验室。NGS就是下一代测序技术（NexT Generation Se QUEXCING）即高通量测序技术得简称髙通量测序技术就是对传统S A、GER测序（称为一代测序技术）革命性得改变，可同时对儿十万到儿百万条核酸分子进行序列测定，同时高通量测序使得对一个物种得转录组与基因组进行细致全貌得分析成为可能，也称为深度测序 (Deep sequencing) o1. 2山于XGS技术对所检测得核酸模板进行大量扩增，容易出现实验室污染导致检测结果准确性下降；另外XGS技术要求高.影响因素多，实验过程处理不

2、当易导致检测结果准确性下降或检测失败。因此临床基因扩增检验实验室技术验收与规范化管理就是XGS技术本身需要，也就是在临床上顺利应用该技术前提.二、NGS实验室临床应用得基本条件2. 1必须拥有符合临检中心相关规定得标准N G S实验室。2. 2检测设备必须符合标准NGS实验室设置要求：高通量测序仪及配套服务器；高通量测序检测试剂盒；通用电脑；自动分析软件，实验室样本信息管理系统等。2. 3检测人员必须通过专门得技能培训，并获得省级以上卫生计生行政部门颁发得临床基因扩增检验技术上岗证书。NGS实验室必须建立严格得实验室管理制度、建立标准化操作程丿了：（SOP）、建立系列质量管理文件等，确保实验室

3、日常运行符合国家卫生部得要求，确保检测结果准确、确保实验室卫生安全，确保实验室长期稳定运行。2. 4NGS临床应用必须在无菌无尘环境下进行操作。三、NGS实验室建设基本要求3. 1主体结构主体为彩钢板、铝合金型材室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污染、积尘、不易清扫等问题。结构牢固，线条简明,美观大方，密封性好。3. 2标准得各区分隔与气压调节将检测过程分成试剂准备、样本制备、PCR扩增与高通量测序四个独立得实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个独立实验区设置有缓冲区，同时各区通过气压调节，使整个检测实验过程中试剂与标本免受气溶胶得污染并降低扩增产物对人员与环境得污染.

4、可打开缓冲区与PCR扩增区得排风扇往外排气，在实验区得外墙上与各扇门上都安装有风量可调得回风口，空气通过回风口向室内换气。3. 3消毒在每个实验区与缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供消毒用在各区还设置移动紫外线灯，对实验桌进行局部消毒。3. 4机械连锁不锈钢传递窗试剂与标本通过机械连锁不锈钢（不建议使用电子连锁方式）传递窗传递,保证试剂与标本在传递过程中不受污染（人物分流）3. 5地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面，整体性好。便于进行清扫，耐腐蚀。没有条件得也可采用水磨石地面，或大块得瓷砖（至少800mmX800mm）接缝需要小于2mMo3. 6照明灯具要选用净化灯具，能达到便于

5、清洗、不积尘得特点。3. 7平面布局NGS实验室应根据自己得检验项目、所采用得检测技术平台与丄作量来决定分区得多少及各区域得空间大小，至少具体需要多少个区，同样就是“个体化“得，以工作有序、互不干扰、防止污染、报告及时作为基本原则。四、各项U实验室建设标准产前筛査与产前诊断（全基因组低拷贝测序技术）1.实验室平面图测序区文库扩増标本与文与检测区库制备区试剂准备区标本与文障制备区文犀扩增与检测区7 测序ElaI|I JKffK |IcHittPct血发II UJ a文库扩增与检测区5Pa测序区-I OPa备区4.分区功能4. 1试剂准备室0%其余房间200、3 00 LX主要功能:在NGS过程中

6、使用到得试剂得配制.分装与保存。4. 2标本与文库制备区主要功能:血液处理、血浆制备、DM提取、DNA片段化、DNA样品得纯化、DNA浓度检测、末端修复、接头连接、构建样本得测序文库.4. 3文库扩增与检测区主要功能：文库构建后得PCR扩增与纯化、文库浓度检测、文库得混合及混 合后得质检分析。4. 4测序区主要功能:测序模板制备（乳液PCR与磁珠富集回收）、上机测序、数据分析、 报告审核及发放.5. 仪器配置5. 1试剂准备室主要仪器设备:加样器、冰箱、分析天平、微量台式离心机、涡旋掘荡器、 移液器、可移动紫外灯与超净工作台等。5. 2标本与文库制备区主要仪器设备:冷冻离心机、微量台式离心机、

7、掌上三管离心机、涡旋震荡 器、垂直混合仪.移液器、可移动紫外灯、生物安全柜、冰箱、托盘天平、Qubit 2、0核酸定量仪、电脑（可连接互联网）、条形码打印机、普通打印机、扫描枪、磁力架等。5. 3文库扩增与检测区主要仪器设备：PCR仪、QPCR仪、Qubit2. 0核酸定量仪、可移动紫外灯、超净工作台、冰箱、微量台式离心机、涡旋摭荡器、UPS、冰箱、移液器、 磁力架等.5. 4测序区主要仪器设备：高通量测序仪、PC电脑.打印机、UPS、恒温金属浴、纯水 仪、冰箱、微量台式离心机、涡旋摭荡器、移液器、超净工作台、可移动紫 外灯、磁力架、PCR仪等。胚胎植入前遗传学诊断（全基因组低拷贝测序）1.实

8、验室平面图WGA制备区全SSfi扩M J_dnaITK头逹41化10 -A-号鶯化pOOltDSpOOltDS未廉ttSA算化序仪上机扩pcRjta 珠)pcRjtaT告发敖4. 分区功能 4.1试剂准备室主要功能:在NGS过程中使用到得试剂得配制、分装与保存.4.2WGA制备区主要功能：基因组DM释放、全基因组DNA扩增。4. 3电泳区主要功能：DNA电泳检测及结果反馈、DM打断等4. 4扩增一区主要功能：DNA片段得末端修复与纯化、接头连接与纯化、文库混合、缺口平移。4. 5文库检测区主要功能：文库浓度质检分析。4. 6测序区主要功能：测序模板制备（乳液PCR与磁珠富集回收）、上机测序、数

9、据分析、报告审核及发放。5. 仪器配置5. 1试剂准备区主要仪器设备：冰箱、分析天平、微量台式离心机、涡旋摭荡器、移液器、可移动紫外灯与超净工作台等。5. 2电泳区主要仪器设备：电泳仪、微波炉、凝胶成像仪、冰箱、掌式离心机、涡旋振荡器、移液器、可移动紫外灯等。5. 3WGA制备区主要仪器设备：PCR仪、超净工作台、冰箱、掌式离心机、涡旋振荡器、移液器、可移动紫外灯等。5. 4扩增一区主要仪器设备:PCR仪、可移动紫外灯、超净工作台、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、UPS、移液器、磁力架等.5. 5文库检测区主要仪器设备：QPCR仪、Qubit2、0核酸定量仪、可移动紫外灯、超净工作台、冰箱、

10、微量台式离心机、涡旋摭荡器、冰箱、移液器等。5. 6测序区主要仪器设备:高通量测序仪、PC电脑、打印机、UPS、恒温金属浴、纯水仪、冰箱、微量台式离心机、涡旋振荡器、移液器、超净工作台、可移动紫外灯、磁力架、PCR仪等。 遗传病诊断+肿瘤诊断与治疗（朵交捕获测序技术+SANGER测序验证）1.实验室平面图电泳区空H*ft A攵*扩tt区 （r 二 B）空气呼级冲fsj刁Z空FC专馬逢（r-K；空代向DNA打R区空p更-VON*与文KM标本与文库制备区Sanger测序滾程3间 200300LX实验流程 b IT；T*r BDNA打断区+ 1 OPa杂交捕获区5Pa制备区（扩增一区）文库扩增区（扩

11、增二区）1 OPa文库检测区一 1 0 P a测序区-15 Pa电泳区0 Pa4.分区功能 4. 1试剂准备区主要功能:在NGS过程中使用到得试剂得配制、分装与保存。4. 2标本与文库制备区主要功能：样本接收、样本前处理、全基因组DM提取以及各种样本DM或 者RN A得提取、臥A片段化、DA纯化、DNA浓度测定、DNA片段得末端修复与纯化、接头连接与纯化.4.3 DNA打断区主要功能：DNA打断（片段化）。4.4电泳区主要功能：片段化D A电泳检测及结果反馈。4. 5朵交捕获区（扩增一区）主要功能：U得DNA片段得杂交捕获与纯化，Sa n ger测序U得片段扩增与纯化Sanger测序PCR前准

12、备。主要功能:杂交捕获后扩增与纯化、文库浓度质检分析、及Sanger测序得PC R扩增反应与纯化。4. 7测序区主要功能：测序模板制备（乳液PCR与磁珠富集回收）、上机测序.及San ge r测序。5.仪器配置 5. 1试剂准备区主要仪器设备：加样器、冰箱、分析天平、微量台式离心机、涡旋振荡器、 移液器、可移动紫外灯与超净工作台等.5. 2标本与文库制备区主要仪器设备：微量台式离心机、掌上三管离心机、恒温金属浴、移液器、 可移动紫外灯、生物安全柜、冰箱、托盘天平、Qu bit 2、0核酸定量仪、PCR仪、电脑（可连接互联网）、条形码打印机、普通打印机、扫描枪等。5. 3DNA打断区主要仪器设备：Co V arisS 2 20超声波打断仪、冰箱.掌式离心机、涡旋振荡器、移液器、可移动紫外灯等.5.4电泳区主要仪器设备：电泳仪、微波炉、凝胶成像仪、冰箱、掌式离心机、涡旋振 荡器、移液器、可移动紫外灯等。5. 5杂交捕获区（扩增一区）主要仪器设备：P CR仪、可移动紫外灯、超净工作台、冰箱.微量台武离心机