烟草野火病病原菌对农用链霉素的抗药性测定

1、烟草野火病病原菌对农用链霉素的抗药性测定?328?chineseagriculturalsciencebulletinvo1.23no.122007december烟草野火病病原茵对农用链霉素的抗药性测定李梅云(云南省烟草科学研究所,玉溪653100)摘要:为合理防治烟草野火病,减少抗药性产生,减少农药残留.从云南省8个地州分离烟草野火病茵茵株43个,并就分离茵株对农用链霉素的抗药性进行了测定,结果表明,供试43个茵株中高抗茵株8个,中抗茵株比例较高17个,低抗茵株18个.不同来源的烟草野火病原茵株的抗药性存在差异,文山,昆明的茵株抗药性最高,红河茵株抗药性最低,抗性倍数最高达2000多倍,其

2、余地州抗药性居中.不同地州分离菌株高,中,低抗茵株的比例存在明显差另l】.分离自文山邱北县双龙营镇的25#茵株抗药性最强.抗性倍数达45907.75,来自文山砚山县阿猛镇租白村的34#茵株抗药性最低.43株烟草野火病茵茵株对农用链霉素的ec50值平均为4.65,范围在0.004183.631.高,中,低抗茵株的平均抗性倍数分别为6124.69,49.72,6.40.关键词:烟草野火病;农用链霉素;抗药性中图分类号:$572文献标识码:adeterminationofpseudomonassyngaepv.tabaciresistancetoagriculturalstreptomycinlim

3、eiyun(tobaccoscienceresearchinstitute,yunnanyuxi653100)abstract:tocontroltobaccowildfirediseaserationally,reduceresistanceandreducepesticidepollution,43strainsofpseudomonassyringaepv.tabaciwereisolatedfrom8regionofyunnanprovinceandalli8olatesweredeterminedtheirresistancetoagriculturalstreptomycin.th

4、eresultsindicatedthatofalltestedisolates,therewere8highresistance,17middleresistanceand18lowresistanceisolatesrespectively.ileis1).-latesfungicideresistancefromdifferentregionwasdifferentobviously,thehighestresistantisolatecomefromwenshanandkunmingregion.hongheisolateshadthelowestresistanceamongallt

5、estedisolates.i1leevi-dentdisparityofhighresistance.midresistanceandlowresistanceisolatesratiowasexistatdifferentregion.25#fromwenshanqiubeiwasthehighestagriculturalstreptomycinresistantisolate,itsresistancemultiplearrivedto45908comparedtothelowestresistanceisolate34#,whichfromyanshanofwenshan.i1lee

6、c50of43pseudomonassyringaepv.tabaciisolatesagainstagriculturalstreptomycinwas4.65inaver-age.wasintherangeofo.004-183.631.,i1leaverageresistancemultipleofhighresistance,midresistanceandlow-resistanceisolateswas6124.69,49.72,6.40respectively.keywords:tobaccowildfirediseases,agriculturalstreptomycin,fu

7、ngicideresistance烟草野火病是由烟草假单胞杆菌(pseudomonassyringaepv.tabaci)起的细菌性病害,是一种世界普遍发生的爆发性,毁灭性病害m,wolf和foser首次报道报道在美国北卡罗来纳州【.该病害于2o世纪4o年代末期在中国云南烟区零星发生,以后随着烟草栽培面积逐渐扩大而渐趋严重【3.烟草主要病害的综合治理一直以来是烟草生产中的重要问题之一,而化学防治在烟草主要病害防治中长期占据重要地位.由于基金项目:云南省烟草公司计划资助项目”烟草主要病害抗药性调查及治理技术研究”(04a17).第一作者简介:李梅云,女,1971年出生,硕士学历,助理研究员,从事

8、烟草病害与微生物研究,发表论文20余篇.通信地址:653100云南省玉溪市聂耳路47号云南省烟草科学研究所.tel:08772075027,e-maihmyli2008yahoo,collkcn收稿日期:200707-24,修回日期:2007-0820.中国雇学通报第23卷第12期2007年12月?329?烟草生产上化学农药的长期大量使用以及使用技术的不合理,使一些烟草主要病害产生了抗药性.它们在生产上直接表现为防效降低,病害防治困难.由于生产上缺乏对这些主要病害抗药性状况的了解,一味增加用药量及用药次数,造成更加有利于病原菌抗药性产生的现状,导致烟叶生产成本提高,对环境污染加重,特别是烟叶农

9、药残留偏高,对烟叶出口和卷烟安全性带来不利影响.烟草野火病是烟草生产上一类常见的细菌性病害,危害严重,其病原对农用链霉素的抗药性至目前尚未见报道,笔者就云南省不同地区烟草野火病病菌对农用链霉素的抗药性进行了研究.1材料与方法1.1供试药剂1000万单位农用链霉素可溶性粉剂,由山东鲁抗生物农药有限责任公司生产.1.2供试培养基牛肉蛋白胨培养基【】1.3试验时间与地点该试验于2005年在云南省烟草科学研究所实验室完成.1.4烟草野火病病原茵的分离,纯化与鉴定参照方中达41,葛莘5】等的方法.从云南省各州市收集烟草野火病病株,经平板划线法分离,纯化,致病性测定,染色反应,形态特征,培养性状,生理生化

10、测定及营养利用等测定后得到43个菌株.1.5农用链霉素对烟草野火病菌的室内毒力测定采用抑菌圈法,将细菌稀释液与焙化冷却至50左右的牛肉蛋白胨培养基混匀后倒平板.用d-.=6nm-的滤纸圆片蘸取不同浓度(分别为2xlo.,1xlo.,5x10,2.510,110,5x10”smg/m1)的药液及无菌水,贴在培养基平板中央,24-28c下翻转培养3d,测抑菌圈直径.每一浓度设三次重复,计算抑菌圈平均直径.1.6数据处理与分析试验数据用浙江大学唐启义,冯明光61编的实用统计分析及其dps数据处理系统进行分析.2结果与分析2.1病原的分离鉴定2004年在云南省8个主产烟区,成功分离到43个烟草野火病菌

11、株,其中文山州23个,昆明2个,玉溪2个,楚雄2个,昭通5个,曲靖7个,红河1个,临沧1个.表1各地州菌株数及其平均抗性地州菌株个数平均ec(mg/m1)平均抗性倍数高抗中抗敏感文山昆明玉溪临沧昭通曲靖楚雄红河总计2.2各地州分离菌株的抗药性水平抗性表型划分:以菌株在农用链霉素浓度平板上菌落生长致死中浓度(ec50)为标准,划分为3类:ec500.05为敏感;0.05<ec5o<0.5为中抗;ec卯t>0.5为高抗.云南省8个地州分离菌株的抗药性测定结果表明(表1),不同来源的烟草野火病原菌株的抗药性存在差异,以文山,昆明的菌株抗药性最高,红河菌株抗药性最低,抗性倍数最高达2

12、000多倍,其余地州抗药性居中.不同来源的菌株高,中,低抗菌株的比例差异较大,文山23个菌株高,中,低抗比例分别为26.1%,30.4%,43.5%,曲靖7个菌株中高,中,低抗菌株分别占0%,28.6%,71,4%,昭通5个菌株中0%为高抗,80%为中抗,20%低抗,而玉溪仅2个菌株中就有1株高抗,1株低抗,临沧,昭通,曲靖,楚雄,红河未检测到高抗菌株,这说明不同地区由于用药程度上存在差别,其抗药性就存在明显差别.按照上述划分标准,43个菌株中高,中,低抗比例为8:17:18.2,3不同抗性菌株的地理分布通过对所有分离纯化的烟草野火病菌菌株的抑菌率测定发现(表2一表4),供试菌株对农用链霉素均

13、有不同程度的抗药性,菌株间抗药性差异较大.分离自mlool5lo7oll42ll”6llooooo8瑚0埽;隗孤/嬲m,8ooooooo22l572l?330?chineseagriculturalsciencebulletin”9o1.23no.131150#文i西畴县兴街镇多依坪y=o.513x+5.69469#167#55#67#文山广南县珠琳镇上寨y=o.242x+5.334曲靖师宗大同乡y=o.652x+5.915文山广南县珠琳镇y=o.479x+5.679曲靖市陆良城外y=o.7o7x+6.02860#文山西畴县兴街镇多依坪y=o.489x+5.

14、71532#52#76撑文山邱北普者黑水沟坝y=o.741x+6.084文山邱北县锦屏镇y=o.885x+6.412昆明石林县路美邑y=o.487x+5.809o.87o.965o.897o.982o.929中高抗,敏感菌株的划分标准不同.文山邱北县双龙营镇的25#菌株抗药性最强,抗性倍素对烟草野火病病菌最高抗性菌株25#与最敏感菌数达45907.75,来自文山砚山县阿猛镇租白村的34#株34#的生长抑制情况,不同菌株在不同浓度范围菌株抗药性最低.43株烟草野火病菌菌株对农用链霉增大幅度有所不同,25#菌株在5个浓度下抑菌率分素的ec5o值平均为4.65mg/ml,范围在别为8.56%,9.7

15、8%,10.89%,11.33%,13%,15.56%,0.004183.631.高,中,低抗菌株的平均抗性倍数分别而34#菌株的抑菌率分别为1o.56%,30.78%为6124.69,49.72,2%,37.56%,38.11%,43%.实验过程中还发现不2.4农用链霉素对烟草野火病病菌的抑茵率同菌株在不同浓度时反映出抗药性强弱有差异,但通过对所有分离纯化的烟草野火病病菌的抑菌差异不大(表5),在11042103mg/ml浓度范围内率测定,结果说明所有菌株随着农药链霉素浓度的某一浓度下抑菌率测定值可基本反映该菌株的整体逐渐增大抑制率也明显增大.图1反应了农用链霉抗药程度.加

16、坫o?332chineseagriculturalsciencebulletinvo1.23no.122007decemberhttp:3讨论虽然此实验中有些地州样品量少,很难反映该地州的整体水平,但是如果每个地州都采很多样,工作量太大,可以从个别地州如文山,曲靖,昭通入手详细分析,也能反映各地州抗药性可能存在的情况,各地州用药情况有待进一步调查,旨在分析和研究烟草野火病抗药性治理措施,为生产农药低残留烟叶奠定良好的基础.对烟草野火病菌菌株的抑菌率测定发现,不同菌株对农用链霉素有不同程度的抗药性,来自不同地域的菌株抗药性不同.来自不同地州的菌株中高抗,中抗和低抗菌株的比例有很大差异,这说明不同地区由于用药程度上存在差别,其抗药性就存在明显差别.实验过程中还发现不同菌株在不同浓度时反映出抗药性强弱有差异,但差异不大,这说明在农药一定浓度范围内,不用测菌株的ec卯,而直接用某一浓度的抑菌率反映菌株的抗药性,这样即可以大大减少工作量,又可以在较短的时间内监测出某地区菌株的抗药性水平,更快地提出抗药性治理解决方案,尽快减少农药残留对人类的危害,减少环境污染.参考文献11袁美丽,高洁,张佳环,等.烟草野火病药剂防治研究【j1.吉林农业大学,1994,16(4):18.23.2】lucasgb.