原料药中杂质的控制与案例分析

1、抗生素室 纯度控制纯度控制 杂质控制杂质控制 杂质谱杂质谱 控制控制 第一次飞跃第一次飞跃 第二次飞跃第二次飞跃 抗生素室 头孢泊肟酯有关物质分析的头孢泊肟酯有关物质分析的HPLC色谱图色谱图 1=头孢泊肟，2=去甲氧基头孢泊肟酯异构体A，3=头孢泊肟酯异构体A， 4=去甲氧基头孢泊肟酯异构体B+3异构体，5=头孢泊肟酯异构体B+反式头孢 泊肟酯A，6=反式头孢泊肟酯B，7=N-甲酰基头孢泊肟酯异构体A，8=NAC- CPOD-PRX异构体A，9=N-甲酰基头孢泊肟酯异构体B，10=N-乙酰基头孢泊肟 酯异构体B，11=头孢泊肟酯开环二聚体A，12=头孢泊肟酯开环二聚体B 抗生素室 杂质谱控制

2、的整体解决方案杂质谱控制的整体解决方案 抗生素室 uQ3A： 新原料药中的杂质新原料药中的杂质 uQ3B： 新药制剂中的杂质新药制剂中的杂质 uQ3C： 残留溶剂残留溶剂 化学药品杂质研究的技术指导原则化学药品杂质研究的技术指导原则 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 （以原料药的响应因子计） 抗生素室 抗生素室 抗生素室 N S O HH O H N N S N O H2N CH3 O CH3 O CO2Na 抗生素室 HN O R1 N S O COOH R2 HN O R1 HN S O COOH R2 HN O R1 H2 C HN S R2 COOH OH N S COOH R2

3、 O R1CONH N S COOH R2 O R1CONH H H B: 抗生素室 N S COOH R2 O R1CONH HH N S COOH R2 O R1CONH H N S COOH R2 R1CONH H N S COOH R2 O R1CONH HH O- 抗生素室 HNC O HC NH2 R1 N S O COOH R2 R1 N H H N O O 分子结构中7位碳侧链上有-氨基的头孢菌素，如头孢氨苄、 头孢羟氨苄、头孢拉定、头孢来星、头孢克罗等药物，还 可发生分子内亲核反应，生成哌嗪二酮衍生物的降解物 抗生素室 N S COOH R NH NH 2 O O 6NH N

4、H 2 O 6 O H N 6 NHO 具有苯苷氨酸侧链的-内酰胺抗生素可以降解为2-羟 基-3-苯基吡嗪衍生物，这种化合物具有荧光特性，头 孢克洛、氯碳头孢均会产生这种降解产物。 抗生素室 HN O R1 N S O COOH CH2OCOCH 3 HN O R1 N S O COOH CH2OH HN O R1 N S O CH2 O O 当3位碳上的取代基为乙酰氧甲基时，易脱去乙酰基，形成 脱乙酰基降解物。在加热、酸性等条件下，可进一步进行分 子内部环和，此时生成的主要降解产物为内酯。 抗生素室 头孢曲松、头孢噻肟、头孢它啶、头孢地尼等有甲氧亚 氨键的头孢菌素均会产生E-异构体，多数在光

5、照的情况 易发生此类反应。 抗生素室 HN O R1 N S O COOH CH2OCOCH3 HN O R1 N S O COOH CH2OH HN O R1 N S O CH2 O O 当3位碳上的取代基为乙酰氧甲基时，易脱去乙酰基，形成 脱乙酰基降解物。在加热、酸性等条件下，可进一步进 行分子内部环和，此时生成的主要降解产物为内酯。 1. 杂质杂质B、杂质、杂质E可以源于头孢噻肟的降解可以源于头孢噻肟的降解 抗生素室 抗生素室 抗生素室 2. 杂质杂质E可以源于起始原料可以源于起始原料 3. 杂质杂质E可以源于合成中的可以源于合成中的 任一中间过程任一中间过程 抗生素室 抗生素室 抗生素

6、室 抗生素室 抗生素室 加替沙星及其十种杂质对照品的色谱图加替沙星及其十种杂质对照品的色谱图 加替沙星注射液杂质谱分析加替沙星注射液杂质谱分析 色谱条件：以三乙胺磷酸溶液 三乙胺溶液（1100），用磷酸调节pH值 至4.30.05-乙腈（87：13）为流动相，检测波长为325nm，柱温为 30，流速为每分钟1ml。 色谱柱:SHISEIDO CAPCELL PAK C18 抗生素室 加替沙星及加替沙星及10个已知杂质的结构式个已知杂质的结构式 抗生素室 主要杂质是杂质主要杂质是杂质3和杂质和杂质8 生产工艺杂质生产工艺杂质 原料的杂质谱分析原料的杂质谱分析 抗生素室 光照稳定性评价光照稳定性评

7、价 比较光照前后各杂质含量的变化比较光照前后各杂质含量的变化 按随机取按随机取19批样品批样品 UV灯下照射灯下照射10天天 杂质杂质2、杂质杂质4是与光照稳定性密切相关的杂质是与光照稳定性密切相关的杂质 大多数喹喏酮类抗生素对光不稳定，什么是光降解杂质？大多数喹喏酮类抗生素对光不稳定，什么是光降解杂质？ 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 如何验证？如何验证？ 抗生素室 JCPS，2010，19（4）：285292 抗生素室 抗生素室 抗生素室 药物分析杂志，待发表 抗生素室 抗生素室 抗生素室 JPBA，2009, 49(5): 11921202 抗生素室

8、 抗生素室 抗生素室 抗生素室 JPBA，2008, 46(3):431-441 抗生素室 药物杂质的可能来源药物杂质的可能来源 抗生素室 抗生素室 1.原料：原料：红霉素 A、红霉素 B、红霉素 C、红霉素D、红霉素 E、红霉素 F、 阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F 2.中间体：中间体：红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、 红霉素 C肟（E）、9，11-亚胺醚、红霉素C 6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺 3.副产物：副产物：红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、 氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-

9、苯磺酰基阿奇 霉素、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）- 3,4-去氢阿奇霉素、 O-甲苯 磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去 二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基-酮 基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯 4.降解产物：降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8， 9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮 阿奇霉素中可能存在的杂质：阿奇霉素中可能存在的杂质：37种种 抗生素室 模拟色谱图色谱图 实际色谱图实际色谱图 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 样品样品

10、对照对照 Kav=0 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 头孢地嗪钠头孢地嗪钠 头孢呋辛酯头孢呋辛酯 TSKgel G2000HHR 头孢丙烯头孢丙烯 TSKgel G2500PWXL 法罗培南法罗培南 TSKgel G2000HHR TSKgel G2000SWXL TSKgel G2000SWXL 抗生素室 Sephadex G10 与TSK柱比较 61 G10柱结果与TSK柱 结果的相关性 13.700 14.678 15.546 17.334 20.110 22.260 26.973 AU 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 分钟 0.0

11、02.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.00 Sephadex G10 TSK 聚合物 其他聚合物 二聚物 抗生素室 抗生素室 头孢泊肟酯有关物质分析的头孢泊肟酯有关物质分析的HPLC色谱图色谱图 1=头孢泊肟，2=去甲氧基头孢泊肟酯异构体A，3=头孢泊肟酯异构体A， 4=去甲氧基头孢泊肟酯异构体B+3异构体，5=头孢泊肟酯异构体B+反式头孢 泊肟酯A，6=反式头孢泊肟酯B，7=N-甲酰基头孢泊肟酯异构体A，8=NAC- CPOD-PRX异构体A，9=N-甲酰基头孢泊肟酯异构体B，10=N-乙酰基头孢泊肟

12、 酯异构体B，11=头孢泊肟酯开环二聚体头孢泊肟酯开环二聚体A，12=头孢泊肟酯开环二聚体头孢泊肟酯开环二聚体B 抗生素室 中国新药杂志 ,2008,17(24):23 抗生素室 中国药学杂志, 2009，44（23）：1821 抗生素室 抗生素室 Sephadex G-10系统系统 TSK-Gel G2000swxl系统系统 柱切换技术柱切换技术 0.8ml/min TSK系统系统 0.5ml/min C18系统系统 抗生素室 抗生素室 抗生素室 批次及批量批次及批量 生产日期生产日期 生产地点生产地点 生产工艺生产工艺 产品中单个杂质含量及杂质总量产品中单个杂质含量及杂质总量 批次用途批次

13、用途 使用的分析方法使用的分析方法 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 利用色谱相关光谱法追踪色利用色谱相关光谱法追踪色 谱峰不同色谱系统中的位置谱峰不同色谱系统中的位置 抗生素室 抗生素室 抗生素室 u根据杂质来源，产生条件，结合根据杂质来源，产生条件，结合母核母核 的质谱裂解规律的质谱裂解规律推断杂质的可能结构推断杂质的可能结构 抗生素室 头孢菌素类抗生素质谱裂解的一头孢菌素类抗生素质谱裂解的一 般规律般规律 青霉素类抗生素质谱裂解的一青霉素类抗生素质谱裂解的一 般规律般规律 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 ACA，535：89-99, 2005 抗生素室 抗生素室

14、抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 抗生素室 Figure 4. Effects of MMTD and TDA on the zebrafish embryonic development (3-dpf). A- D: The embryos treated with MMTD at 10 g/ml (A), 100 g/ml (B), 300 g/ml (C) and at 500 g/ml (D). E-H: the embryos treated with TDA at 100 g/ml (E,F), 300 g/ml (G) and at 500 g

15、/ml (H); I,J: normal embryos as controls at a lateral view (I) and a dorsal view (J). Hemorrhage of brain areas is indicated by white arrow, opaque yolk and YE by red arrow, deficient eyes are by slight- blue arrows, colorless and cord-like hearts and enlarged pericardial sacs by yellow arrows, ripp

16、le-like notochords by orange arrows. 抗生素室 抗生素室 抗生素室 (A) 5dpf 幼体头部侧面，示 眼窝 上 (SO1 and SO2), 耳囊(O1) 和枕部 的 (OC1)的神经丘；(B) O1神经丘毛 细胞双染色FM 1-43(红) 和 Yo- Pro-1 (绿). (C) FM 1-43染色； (D). Yo-Pro-1 染色。 Scale bar = 50 um (A); 10 um (BD). Hearing Research 213 (2006) 2533 抗生素室 药物耳毒性检测药物耳毒性检测 利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛 细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。 下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色 圈示给药后1神经丘消失。 给药后给药后 系统对照组系统对照组 （正常幼体）（正常幼体） 抗生素室 抗生素室 抗生素室 对结构已知但含量大对结构已知但含量大 于界定限的杂质；于界定限的杂