参数实验指导

1、实验三 实验四 实验五发酵工业分析实验寸录样品中还原糖的测定（斐林试剂法）白酒中总酸的测定白酒中总酯的测定比重瓶、折光仪、旋光仪的使用大肠杆菌生长曲线测定实验、实验目的：样品中还原糖的测定（斐林试剂法）（3学时）掌握斐林试剂测定还原糖的方法。测定酿造酱油中还原糖的含量。二实验原理斐林试剂由甲、乙液组成。甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸 钾钠溶液。平时甲、乙液分别贮存，测定时甲、乙液等体积混合。混合时，硫酸 铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2hfaOH + CuSO4 =Cu（OH） a f + Na3SO4所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钾钠反应， 生成酒石酸钾钠铜络合物，使氢氧化 铜

2、溶解：Cu(OH)2 +COOKI CHOHCHOHICOO NaCOOK+ 2H3OCOO Na酒石酸钾钠铜络合物中二价铜是一个氧化剂， 能使还原糖中羰基氧化，而二价铜 被还原生成一价的氧化亚铜沉淀：COOK ICHOCHO/CuC OO NacxI+ (CHOH)4 + 2 Haoch2ohCOOKICHOHICHOHIC OO NaCOOHCchoh)4I .CHaOH反应终点用次甲基蓝指示刘显示。因次甲基蓝氧化能力较二价铜弱，故待二价铜 全部被还原后，过量一滴还原糖立即使次甲基蓝还原，溶液蓝色消失以示终点：zof+|l+ H20C HzOH(CFhh n/，W、/7n+(CH4C广欢甲

3、基蓝(蓝色)COOHICCHOHCHOH+ HCI（沁朋八/溢/、N(CH3)三、试剂1菲林甲液称取分析纯硫酸铜（CuSO4 5H2O）15g及四甲基蓝（次甲基蓝）0.05g,用蒸馏水 溶解，淀容至1000mL2菲林乙液称取分析纯酒石酸钾钠50g,分析纯氢氧化钠54g及分析纯亚铁氰化钾4g,用蒸馏 水溶解,定容至1000mL3 0.1%葡萄糖标准溶液精确称取在105C烘23h至恒重的分析纯无水葡萄糖1.000g,放入100mL烧杯 中，用蒸馏水溶解,定容至1000mL为防染菌,可加5mL浓盐酸后再定容。四测定步骤1. 样品处理及吸取精确吸取样品10mL,用蒸馏水稀释定容至100mL,摇匀吸取稀

4、释液1mL进行 测定。稀释度及吸取量根据含糖量可予增减。2菲林试剂的标定精确吸取费林甲、乙液各5mL放入150mL锥形瓶中，加蒸馏水10mL再用 滴定管加入0.1%葡萄糖标准液9mL摇匀在电炉上加热,使其在2min内沸腾,沸 腾30s后,匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点。 记录沸腾前后共耗 用葡萄糖液毫升数（A）。3预备滴定精确吸取费林甲、乙液各 5mL放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL再加 1mL10样品稀释液。根据样品含糖量的高低（估计数）,可用糖液滴定管先加入一 定量的0.1%葡萄糖液（空白滴定耗用葡萄糖液一般在 10mL以上）,摇匀加热,沸腾30S后,匀速滴入 0.

5、1%葡萄糖液，至蓝色消失即为终点，记下沸腾前后共耗用 0.1%葡萄糖标准液毫升数，作正 式滴定时参考用。4正式滴定精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶内,加蒸馏水10mL及1mL10样品稀释液,再用糖液滴定管加入比预备滴定耗用量少 0.5mL左右的0.1% 葡萄糖标准液,摇匀后加热,使其在12min内沸腾,沸腾30S后匀速滴入0.1%葡 萄糖标准液至蓝色消失即为终点 , 记下沸腾前后共耗用 0.1%葡萄糖标准液的毫 升数 (B) 。做平行测定 , 两次相差不得超过 0.1mL。1.3 计算(A -B)X C还原糖(以葡萄糖计，g/100mL或g)二X 100 (1)V式中: A

6、菲林试剂标定耗用 0.1%葡萄糖标准液数 , mL;B 正式滴定耗用 0.1%葡萄糖标准液数 , mL;C 1mL0.1%萄糖标准液含葡萄量(即0.001g);V 吸取样液相当样品量 ,mL注意事项1 每批试样测试前必须做空白滴定 , 二次平行测定误差不得超过 0.1mL。2 空白滴定、预备滴定及正式滴定操作条件应保持一致。滴定速度应以每秒12 滴为宜。热源要稳定 , 在正式滴定时 , 待试样沸腾后 , 标准糖液的滴定量必 须控 制在0.51mL之内,否则要重做。整个滴定过程必须始终保持沸腾状态。3 凡样品含糖量在 6%以上时, 应适当增加稀释倍数 ,否则会加大误差。4 酿造酱油在制品常含有非

7、糖还原物质 ,所以本法测定结果略为偏高。实验二白酒中总酸的测定（3学时）一原理白酒中总酸以中和法直接测定。挥发酸用水蒸汽蒸馏，馏出液以中和法测定， 总酸和挥发酸之差即为非挥发酸。二试剂1）0.1N 氢氧化钠溶液2）0.5 %酚酞指示剂 三测定步骤总酸的测定：吸取50毫升白酒，置入500毫升三角瓶中，加100毫升水和2 滴0 . 5%酸酞指示剂，用0 . 1N氢氧化钠溶液滴定至微红色。总酸以乙酸计克/100毫升=NV 0.06006 丄 100NaOH50式中N、V氢氧化钠溶液的当量浓度与消耗体积（毫升）0.06006乙酸的毫克当量（克）50吸取酒样体积（毫升）100换算成100毫升酒样中酸量若

8、以乳酸计，只需将乙酸的毫克当置换成乳酸的毫克当量（0. 09008）即可实验三 白酒中总酯的测定（3学时）酯为有机酸与醇类在酸性条件下经酯化作用而成。酒中香味在很大程度上与 酯类的组成及含量有关，它是酒的一个很重要的质量指标。白酒中酯类成分极为 复杂，其中有乙酸乙酸、已酸乙酯、丁酸乙酯、乳酸乙酯等。用化学分析法测得 的为总酯，常以乙酸乙醋计算。一、原理白酒中总酯的测定是先用碱中和游离酸。 再加入一定量的碱使酯皂化，过量 的碱用酸滴定。二、试剂1）0 . 1N氢氧化钠溶液2）0 . 1N盐酸溶液3）0 . 5%酚酞指示剂三、测定步骤：准确吸取50毫升酒样，置入500毫升三角瓶中，加2滴0. 5%

9、酚酞指示剂, 用0. 1N氢氧化钠溶液滴定至微红色（不可过量）。再准确加入25毫升0. 1N 氢氧化钠溶液，按上回流冷凝器，于沸水浴中回流皂化半小时，取了冷却，立即 用0. 1N盐酸溶液滴定至红色刚刚消失。四、计算总酯克/100毫升二 Ni 25-N2V2 0.08812 100式中N氢氧化钠溶液的当量浓度N2、V2盐酸溶液的当量浓度与消耗体积（毫升）0.08812乙酸乙酯的毫克当量（克）实验四比重瓶、折光仪、旋光仪的使用（4学时）一、比重瓶的使用（测白酒比重）1. 原理：比重瓶是测定液体比重最准确的仪器。比重瓶种类很多，形状与大小不一， 有的还附有温度计。常用的比重瓶体积为 25毫升与50毫

10、升两种。利用比重瓶测定液体比重时，先在已知重量的比重瓶内装满被测液体， 置入 恒温水浴中，待温度平衡后取出擦干，用滤纸吸去瓶内多余水分，称重得比重瓶 与被测液体重量之和。t比重瓶与被测液体重量之和比重瓶重dt二比重瓶与蒸馏水重量之 和一比重瓶重2. 实验步骤： 用清水、丙酮、乙醚依次清洗比重瓶及其附件，并在烘箱内烘干，在电子天平 上称重，计为G。 在比重瓶中装满蒸馏水，立即盖上小帽，用滤纸将外壁上的水吸干，待温度稳 定后读数ti，并在电子天平上称重，计为 G。同法测得白酒与比重瓶总重 G及 温度t2。 计算dt t=（G 2-Gl）/（G 3-Gi）二、阿贝（Abbe）折光计的使用（测蔗糖溶液

11、折光度和浓度）1 原理：当光线由光密介质（如棱镜）射入光疏介质（如被测溶液）时，使人射角逐 渐增大，则终必会到达一点，其折射线与法线成直角，此时折射线不再透入光疏 介质里，而是沿着两种物质的界面平行射出， 这种现象称为全反射，发生全反射 时的入射角称为临界角。1!11李一I。光疏f J f i t r 1 /r r f f*光密111V 1u图4-5 (b)图4 5 （b）中，当光线由光密介质U处射入光疏介质，其入 M角a 1为临 界角时，则折射光将从两介质的界面 OS射出，反射线0U显得格外明亮。反则 光线从SO位置逆向射入，则OT的右方就会完全黑暗，而左方仍然明亮（最亮的 地方是0U处），

12、形成黑白明显的分界。这种情况很容易从折光计中旋转棱镜的角 度来达到；于是入射角a 2为90C,即：1=rnsin 1 n2折光计就是根据这个原理制成的， 其中ni是棱镜的绝对折光率，为已知数，a 1可从棱镜的旋转角度读出，则被测试液的绝对折光率n2便可以求知。2. 实验步骤：纯水在20r的折光率为1.33299，可用以校正折光计刻度。 仪器放置在水平台上，取四射入散光或普通灯泡光源均可，如有恒温系统装 置，则应同时装好20C恒温系统。光源对准反射镜，使提过目镜能在视野中 看到虹彩和十字线，如看不清十字线，调整目镜至清晰为止。 放开棱镜，用纯水数滴并用擦镜纸清洗棱镜面，然后滴I2滴纯水于棱镜上，

13、 合拢。旋转到度旋钮，使明暗线恰在十字线天又点上，如有虹彩，则调节补偿 旋钮，消除包鼓干扰，此时即可记录刻度尺上读数。 经校正后的仪器，用按镜纸擦干，滴上 12滴样品，合拢，调节旋钮，使明 暗线清晰地在十字交叉点上，随即从刻度尺读出溶液折光率或百分浓度。三、旋光仪的使用（测味精的纯度）1. 原理：物质的旋光度a与入射光波长、温度有关.对于溶液而首，旋光度还与溶剂 性质、溶液浓度和溶液厚度有关。对一定溶剂的物质旋光度a可用下式表示：式 中L 溶液厚度，即旋光管长度（分米）C 溶液浓度（克/100毫升）? - L- J L X 100a 入t 波长为入、温度为t r时物质的比旋光度，其定义：L为1

14、分米、C 为100克/100毫升时物质的旋光度因此：C克/100毫升2. 测定步骤及计算准备工作味精为L-谷氨酸单钠盐，L-谷氨酸分子具有不对称碳原子，固有旋光性。 其水溶液中比旋光度为+12.1，在2N的盐酸溶液中为+32.经盐酸处理味精后，测 得某温度下比旋光度，即可求出味精中谷氨酸钠的百分含量。L-谷氨酸的比旋光度和温度的关系t20a =a +0.06（20-t）（1）取味精10.00g,加4050ml水溶解，搅拌加入浓盐酸16ml,使其全部溶解， 定容至100ml；（2）把预测溶液盛入试管待测。但应注意试管两端螺旋不能旋得太紧（一般以 随手旋紧不漏水为止），以免护玻片产生应力而引起视场

15、亮度发生变化，影响测 定准确度，并将两端残液揩拭干净；（3）接通电源，约点燃10min,待完全发出钠黄光后，才可观察使用；（4）检验度盘零度位置是否正确，如不正确，可旋松盘盖四只连接螺钉、转动 度盘壳进行校正（只能校正0.5o以下），或把误差值在测量过程中加减之。测定工作（1）打开镜盖，把试管放入镜筒中测定，并应把镜盖上和试管有圆泡一端朝上， 以便把气泡存入，不致影响观察和测定；（2）调节视度螺旋至视场中三分视界清 晰时止；（3）转动度盘手轮，至视场照度相一致（暗现场）时止；（4）从放大镜中读出度盘所旋转的角度；记录测定时温度（5）温度t时旋光物质的比旋光度1_ t _ :100丸 L汇CL为

16、旋光管长度（分米）；C为100ml样品溶液汉旋光物质的克数测量时是L-谷氨酸，故需将味精中的L-谷氨酸钠转为L-谷氨酸的CW味精样品重量；147.13L-谷氨酸式量；187.13为L-谷氨酸钠盐式量147.13187.13纯L-谷氨酸20摄氏度时比旋光度为+32,校正为t摄氏度时比旋光度为I=320.06（27） 味精纯度(%) 口 - 100%心纯100%- 100-147 1332 0.06(20 -t) L W187.13实验五 大肠杆菌生长曲线测定（ 3 学时）一、基本原理 一定量的微生物，接种在适合的新鲜液体培养基中，在适宜的温度下培养， 以菌数的对数作纵坐标， 生长时间作横坐标，

17、做出的曲线叫生长曲线。 一般可分 为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。 不同的微生物有不同的生长曲线， 同一种微生物在不同的培养条件下， 其生长曲线也不一样。 因此，测定微生物的 生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。测定微生物生长曲线的方法很多， 有血球计数法、平板菌落计数法、 称重法、 比浊法等。本实验采用比浊法测定， 由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比， 因此， 可利用光电比色计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度， 并将所测得的光密度 值（ODfi）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。现已有直接用试管就可以测定 OD值的光电比色计，只要接种一支试管，定期用 它测定，便可做出该菌的生长曲线。二、器材 培养1820小时的大肠杆菌培养液，盛有 5ml LB 培养基的大试管 12支； 分光光度计，自控水浴振荡器或摇床，无菌移液器等。三、操作步骤1编号取9支盛有LB培养基的大试管，标明培养时间，即 0、1.5、3、4、6、8、 10、 12、 14小时。2接种用 1ml 无菌移液器，每次准确地吸取 02ml 大肠杆菌培养液，分别接种到已编号的 9 支 LB 培养基大试管中，接种