常用缓冲液配置

1、实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCI (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCI配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。PH值浓HCI7.4约 70ml7.6约 60ml8.0约 42ml4. 将溶液定容至1 L。5. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。2)10 河E Buffer (pH7.4,

2、 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于 1 L烧杯中。1M Tris HCl Buffer (PH7.4, 7.6, 8.0)100ml500mM EDTA(PH8.0)20ml2. 向烧杯中加入约 800 ml的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。4. 室温保存。3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3、3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。4. 将溶液定容至1 L。5. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1称量40.8g NaAc 3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月 40ml的去离子水搅拌溶解2加入冰醋酸调节 pH值至5.23加去离子水将溶液定容至100ml4咼温咼压火菌后，室温保存。5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM

4、Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于 1 L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2. 向烧杯中加入约 800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 咼温咼压火菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCI2和0.5 mMMgCI2。6) 10 M醋酸铵组份浓度：10 M醋酸铵配制量：100 ml配制方法：1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30

5、ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7) 苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 : 1)混合均匀后，移入棕色 玻璃瓶中4C保存。8) 10% (W/V) SDS组份浓度：10% (W/V)SDS

6、配制量：100ml配制方法：1称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约 80ml的去离子水，68C加入溶解2. 滴加浓盐酸调节 pH 值至 7.23将溶液定容至100ml后，室温保存。9) 2 N NaOH组份浓度： 2 N NaOH配制量： 100 ml配制方法：1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能 使玻璃烧杯炸裂 ) 。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10) 2.5 N HCl

7、 组份浓度：2.5 N HCl 配制量： 100 ml 配制方法：1. 在78.4 ml的去离子水中加入 21.6 ml的浓盐酸(11.6 N)，均匀混合。2. 室温保存。11) 5 M NaCl组份浓度： 5 M NaCl配制量： 1 L配制方法：1. 称取 292.2 g NaCl 置于 1 L 烧杯中，加入约 800 ml 的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至 1 L 后，适量分成小份。3. 高温高压火菌后，4C保存。11) 20 (W/V) Glucose组份浓度： 20 (W/V) Glucose配制量： 100 ml配制方法：1. 称取 20 g Glucose 置于

8、 100200 ml 烧杯中，加入约 80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至 100 ml 。3. 高温高压火菌后，4C保存。12）Solution I（ 质粒提取用 ）组份浓度： 25 mM Tris-HCl （pH8.0）, 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量： 1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于 1 L烧杯中。1M Tris-HCl ( PH8.0)25ml0.5M EDTA ( PH8.0)20ml20% Glucose (1.11M)45mldH2O910ml2. 咼温咼压火菌后，4C保存。3. 使用前每 50 ml 的 Solu

9、tion I 中加入 2 ml 的 RNase A ( 20 mg/ml)。13) Solution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH , 1% (W/V)SDS 配制量：500ml配制方法：1量取下列溶液，置于 500ml烧杯中10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2加灭菌水定容至 500ml，充分混匀3室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月 注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌14) Solution III(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量：500 ml配制方法：1. 称量下列试剂，置于 500 ml烧杯中。KOAc1

10、47gCH3COOH57.5ml2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压火菌后，4C保存。15) 0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法：称取 186.1 g Na2EDTA - 2H2O，置于 1 L 烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3. 用 NaOH 调节 pH 值至 8.0 (约 20 g NaOH)。 注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至 1 L 。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16) 1 M DTT

11、组份浓度： 1 M DTT 配制量： 20 ml 配制方法：1. 称取 3.09 g DTT ，加入到 50 ml 塑料离心管内。2. 加 20 ml 的 0.01 M NaOAc (pH5.2) ，溶解后使用 0.22 mm 滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20 C保存。17) 10 mM ATP组份浓度： 10 mM ATP配制量： 20 ml配制方法：1. 称取121 mg Na2ATP 3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 力口 20 ml 的 25 mM Tris-HCl (pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，-20 C保存。一.常用贮液与溶液1mol/L亚精

12、胺(Spermidine):溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA ):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级， 无DNA 酶)于 9.5ml 水中(为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白) ，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

13、不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20Co1mol/L二硫苏糖醇(DTT )在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20 C。 或转移 100mg 的二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。1mol/L氯化钾(KCl)：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约 90ml水中，用冰乙酸调溶液 的 pH

14、至 5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L ),混合后形成 EDTA的三 钠盐。或称取 186.1g的Na2EDTA 2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES ：将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH (6.8-8.2)，然后用水 定容至100ml。1mol/L HCl :力口 8.6ml的浓盐酸至 91.4ml的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IPGT （异丙基硫代-0D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份 贮存于-2

15、0 C。1mol/LMgCI2:溶解20.3g MgCl2 6H2O于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟） 于足量的异丙醇中， 定容到10ml。 分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20Co20mg/ml蛋白酶 K （proteinase K）:将200mg的蛋白酶 L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直 至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于-20 C。10mg/mlRnase （无 DNase） （DNase free RNase）:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的

16、10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl调pH至7.5，于-20C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠（NaOH ）:溶解400g氢氧化钠颗粒于约 0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌）， 氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L o10% SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含 0.9L的水的烧杯中，用磁力搅 拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L o2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol ）:溶解36.

17、4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100%三氯乙酸（TCA ）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直 至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5% X gal （5-溴-4-氯-3-吲哚一3半乳糖苷）:溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰 胺（DMF ）,用铝箔包裹装液管，贮存于 -20 C。100 Benhardt 试剂（Denhardts regent ）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll , 400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2% BSA （组分 V）水2g2g2g加水至总体积为100ml依照

18、上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20 C贮存。10 标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选） 水5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液 200ul 100 mmol/L 贮液 50ul 1 mmol/L 贮液 0.5ml 10 mg/mL 贮液

19、 2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于 -20C。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions ）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80C可贮存至少 6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 贮液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20% PEG 8000/2.5

20、M NaCI成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L氯化钠水20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或14.6g固体氯化 钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20 SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二 水）3mol/L氯化钠水88.2g175.3g 补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为

21、0.1%。在37C温浴至少12h,然后 在15 psi条件下高压灭菌 20min，以使残余的 DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用 DEPC处理Tris缓冲液。甲酰胺（deionized formamide ）直接购买或加 Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需 pH的磷酸缓冲液。配制 1 m

22、ol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4 H2O）贮液： 溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4 ）贮液：溶解142g于足量水中使终体积为 1L。1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE （用于悬浮和贮存DNA ）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mm

23、ol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl ( pH7.4-8.0, 25 C)200ul 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0)98.8mlTris 缓冲液（Tris-HCI buffer ）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25C下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至 1L。浓盐酸的体积（ml ）pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2二电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50 XTris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用

24、量2mol/L Tris 碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA水242g57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 补足1L成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量5 XTris-硼酸（TBE ）缓冲液成分及终浓度|配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 补足1L染料1%溴酚蓝（bromophenol blue ）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌

25、或涡旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF （ xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到 100ml。10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide ）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4C贮存。凝胶上样液（gel loading solutions ）6应碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖（400型）0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF水300ul 10N氢氧化钠120ul 0.5m

26、ol/L EDTA ( pH8.0)1.8g15mg25mg 补足到10ml6稼蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖（400型） 水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)1.5g 补足到10ml6毅酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖（400型） 水2.5ml 1 %溴酚蓝2.5ml 1 %二甲苯青 FF1.5g 补足到10

27、ml6X甘油凝胶上样液（4C贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50%甘油水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)3ml3.9ml6 X蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)4g 补足到10ml10 十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮

28、存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2%溴酚蓝0.2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1% SDS50%甘油水20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10 % SDS5ml补足到10ml三.常用培养基1） LB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂 粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。SOB培 养基将下列组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L氯化钾2.5

29、ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每 100ml 的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。2）SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水 中，再用水补足到 100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。3）TB培养基将下列组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60C，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中， 使终体积为100ml。 高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌)。4) 2&T培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH (1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂 粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。5) YPD培养基将下列组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨20g