《乳粉中酪蛋白磷酸肽的测定 高效液相色谱法》标准文本

1、gb/t 2005吉林省卫生厅发布dbs22吉林省食品安全地方标准2012-xx-xx实施2012-xx-xx发布乳粉中酪蛋白磷酸肽的测定高效液相色谱法determination of casein phosphopeptides in milk high performance liquid chromatography method (送审稿)dbs22/037-2012ics：标准分类号：备案号：1就1dbs22/037-2012前 言本标准按照 gb/t 1.1-2009标准化工作导则 第一部分：标准的结构和编写和gb/t 20001.4-2001标准编写规则 第4部分:化学分析方法给

2、出的规则起草。本标准的附录a为资料性附录。本标准起草单位：吉林农业大学本标准主要起草人：李泽鸿、于新海，刘继阳，刘莹，张文慧，刘树英，史飞，张继元，汪树理，刘洪章，陶英楠，赵福广，李昌昊，雷军。 ii乳粉中酪蛋白磷酸肽的测定 高效液相色谱法1 范围本标准规定了乳粉中酪蛋白磷酸肽测定的高效液相色谱方法。本标准适用于乳粉中酪蛋白磷酸肽的含量测定。本标准方法检出限为10 mg/kg。2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。gb/t 6682分析实验室用水规格和试验方法3 原理乳粉用常温去

3、离子水溶解，以乙腈和0.1 醋酸溶液为流动相，在030 min内，乙腈由0 100 梯度洗脱，经zorbax sb c18柱色谱柱分离，高效液相色谱紫外检测器280 nm检测，保留时间定性，外标法测定试样中乳粉中酪蛋白磷酸肽的含量。4 试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水，满足gb/t 6682要求。4.1 乙腈：色谱纯。4.2 冰醋酸。4.3 滤膜：0.45 mm。4.4 酪蛋白磷酸肽标品：分析纯，含量95.00 %。4.5 酪蛋白磷酸肽标准溶液：精密称取酪蛋白磷酸肽标准品100.00 mg，用去离子水溶解并定容于25 ml容量瓶中，用0.45 mm滤膜过滤后，备用。5

4、 仪器5.1 天平（精度0.01 g和0.0001 g）。5.2 高效液相色谱仪（带紫外检测器，二元泵）。6 分析方法6.1 样品处理称取乳粉试样3 g5 g（精确至0.01 g）于50 ml容量瓶中，常温去离子水溶解，定容至刻度，摇匀。0.45 mm过滤，供高效液相色谱分析。6.2 标准样品溶液的配制准确吸取酪蛋白磷酸肽标准溶液0.25 ml、0.50 ml、1.00 ml、2.50 ml、5.00 ml于100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度。制成浓度依次为l0 mg/ml、20 mg/ml、40 mg/ml、100 mg/ml、200 mg/ml的标准样品溶液，供高效液相色谱分析使用。6.

5、3 色谱参考条件色谱柱：zorbax sb c18柱（ 4.6 mm250 mm 5 mm）或等效柱。紫外检测波长：280 nm。流动相：乙腈和0.1 醋酸溶液，在030 min内，乙腈由0 100 梯度洗脱。流速：1.0 ml/min。柱温：25 。进样量：20 ml。6.4 测定精密吸取试样和标准样品溶液，按规定色谱条件分别进样20 l，按照6.3项条件进行检测，以保留时间定性，外标法定量。谱图见附录。6.5 结果计算按外标法计算试样中酪蛋白磷酸肽的含量。见下式：式中：x 试样中酪蛋白磷酸肽的含量，mg/kg；a 从标准曲线上求出的试样液中酪蛋白磷酸肽的质量，mg；f 试样的稀释倍数；m 试样的取样量，g；计算结果保留两