激活素A和卵泡抑素对冻融人胎儿卵巢雌二醇分泌的影响汇总

1、激活素 A 和卵泡抑素对冻融人胎儿卵巢雌二醇分泌 的影响【关键词】激活素A;卵泡抑素；胎儿；卵巢；雌二醇Abstract:Objective:To investigate the effect of Activin A-follistatin on steroidogenesis of frozen-thawed human fetal ovary in vitro. Methods: The frozen-thawed fetal ovarian tissue was cultured individually in minimal essential medium (MEM) for 8

2、days. Under the experimental conditions, the medium was supplemented with either Activin-A (Act A group) or follistatin (FS group) or the combinations of Activin-A and follistatin (A+F group). The concentration of E2 in cultured medium was detected with immunoluminescence method. Results: The levels

3、 of E2 at 4th day, 6th day and 8th day were higher than that at 2nd day (P0.05), The secretion of E2 increased at first, then decreased with the highest level at 6th day. The level of E2 of Act A group was significantly greater than that of the control group, FS group and A+F group (P0.01). Conclusi

4、on: Frozen-thawed human fetal ovary can excrete estrodiol under the condition of tissue culture. Act A can increase the excretion of estrodiol in cultivated ovarian tissue, and the effection of Act A can be suppressed by FS.Key words:activin A; follistatin; fetal; ovarian tissue;estrodiol近年来发现的一组性腺起

5、源的细胞因子 - 激活素 (Activins) ，对卵泡发 育有着重要的局部调节作用，尤其是激活素 A(Activin A ，Act A) 。尽管有较 多的研究表明了激活素对不同动物卵泡发育的影响 1-3 ，但对人胎儿卵巢内卵 泡发育的影响尚未见报道。本研究以胎儿卵巢为研究对象，比较 Act A 和卵泡 抑素(FS)在体外组织培养条件下对冻融人胎儿卵巢E2分泌的影响，探讨其在人卵泡发生过程中可能的调节作用。1 材料和方法1.1 标本 卵巢组织取自因计划生育或医疗原因需行药物引产(利 凡诺米菲司酮)的 32 周胎儿(温州医学院教学医院分娩室提供)共 3 例，于 引产后 2 h 内无菌条件下取材，

6、置于预冷的 Leiboviz-15(L-15 ，美国 sigma 公 司产品)基础培养液中待用。本研究经我院伦理委员会批准。1.2 试剂和仪器 基础培养液为MEM培养液(购自GIBCO公司)，含5%小牛血清， 100 U/ml 的 FSH, 100 IU/ml 青霉素和 100 IU/ml 链霉素， 1/100 ITS(胰岛素-转铁蛋白-硒，insulin-transferrin-selenium), pH 7.0 7.2。Act A、FSH FS均为Sigma公司产品。E2测定采用美国贝克曼库而特公司 BXI800 仪器及试剂。1.2 实验方法1.2.1 冷冻及复苏 : 将胎儿卵巢组织去除髓

7、质及周围结缔组织后，切 成5 mnrK5 mnrK 1 mm大小，放入装有冷冻保护剂 1.5 mol/L 丙二醇（PROH的 冷冻管中，按照 Oktay4 提出的慢冻速融法处理。1.2.2 体外培养及分组：冻融卵巢皮质块切成2 mnrK 2 mnrK 1 mm大 小，随机放入加有0.8 ml培养液的24孔培养板内，37 C、5%CO培养箱内培 养，隔天半量换液，共培养 8 d。实验共分四组：MEMfi（ Minimum Essential Medium 基础培养液）即对照组、 Act A组（基础培养液+100 ng/ml ActA）、FS组（基础培养液+100 ng/ml FS ）和A+F组（

8、基础培养液+100 ng/ml Act A+100 ng/ml FS ）；每组 4 块组织。所有实验重复 3 次。1.2.3 E2 的测定： 收集培养 2 d、 4 d、 6 d、 8 d 的培养液，采用免 疫发光法，按美国贝克曼库而特公司 BXI800仪器及试剂说明测定E2的含量。 质控符合要求,批内变异系数10%，批间变异系数 15%。1.3 统计学处理方法 采用重复测量资料方差分析进行比较，采用 Dunnet 进行两两比较。2 结果所有培养组的卵巢组织，培养4 d、6 d、8 d分泌的E2值均高于2 d 值，差异有显著性（均Pv 0.05），总体呈先增加后减少改变，在培养后 6 d 可达

9、较高水平；Act A组E2分泌量明显高于对照组、FS组和A+F组，差异有显 著性（均 Pv0.01 ），详见表 1。3 讨论3.1 胎儿卵巢组织体外培养条件下能分泌 E2 本实验结果显示，胎 儿卵巢组织在体外培养条件下能产生 E2。目前，国内外对卵巢组织体外培养的 最佳时间尚无定论，除鼠卵巢组织外，其他哺乳动物的卵巢组织即使体外培养 20 d，组织内的初级卵泡也不能发育到次级卵泡阶段5。本研究中E2分泌量随培养时间延长先增加后减少，在培养后 6 d 可达较高水平，这是否提示人胎 儿卵巢组织的体外最佳培养时间为 6 d 尚有待进一步研究。3.2 Act A和FS对卵巢组织E2分泌的影响 Act

10、A是最早在性腺发现的糖 蛋白激素，属于转化生长因子（transforming growth factor ，TGF）B超家族 成员。 1986年首次从猪的卵泡液中分离、纯化，根据其具有特异性地促进垂体 细胞分泌、合成卵泡刺激素（Follicle stimulating Hormone，FSH的生物学活性而得名 6 ，主要以旁分泌和自分泌途径发挥生物活性。目前的研究认为， Act A 是一种调节组织细胞功能的基本介质，具有广泛的生物学活性，参与调节颗粒细胞的增殖和分化、类固醇激素的产生 7 ，支持卵泡生长并抑制卵泡闭 锁 8 。近年来， 在人卵泡颗粒细胞上也发现了 Act A 的受体 9 。本研

11、究结 果显示， Act A 对卵巢组织类固醇激素的分泌有促进作用， Act A 处理组的 E2 分泌量较对照组明显增加。其促进 E2分泌的机制可能为，Act A诱导卵泡颗粒 细胞形态变化，并通过增加颗粒细胞上 FSH的受体水平及结合位点，使 FSH的 生理作用增强10，后者能刺激芳香化酶活性，增加 E2的生成。FS是一种主要由多种垂体细胞和卵巢颗粒细胞分泌的单聚体糖蛋白，1987年首次从牛卵泡液中提取出来，能抑制 FSH分泌。在本实验中，FS组与对 照组相比，E2分泌量无明显差异，说明FS单独使用未对卵巢E2的分泌产生影 响。FS在结构上与Act A无关联，但可通过与 Act A的不可逆结合，

12、间接 抑制颗粒细胞芳香化酶的活性、抑制垂体FSH分泌并下调未分化颗粒细胞FSH受体的表达，拮抗Act A对卵泡的作用11。在对羊FS表达的研究中发现，FS 蛋白存在于羊原始卵泡的卵母细胞和初级、次级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞 中，但mRN叙在次级卵泡的颗粒细胞中检测到，因为Fs结合并中和了Act12，这说明在早期卵泡发育中，FS可能调控了 Act A的生物活性。本实 验结果显示，A+F组E2分泌量明显低于Act A组，提示FS可能拮抗了 Act A 对卵巢E2分泌的促进作用。朱辉等13在对离体大鼠卵泡体外培养实验中，也 观察到相同的效应。【参考文献】1 Vanderhyden BC, Macdo

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