保健功效及检测方法

1、保健功效及检测方法一、多糖的检测方法（1）粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法（2）葡聚糖的分光光度测定法（3）硫酸软骨素的分光光度测定法二、皂苷类化合物的检测方法（1）总皂苷的分光光度测定法（2）绞股蓝皂苷的分光度测定法三、黄酮及苷类化合物的检测方法（1）总黄酮的风光光度测定法（2）原花青素的分光光度测定法（3）原花青素的铁盐催化比色测定法四、酶、激素及内源性物质的检测方法（1）超氧化物歧化酶的氮蓝四唑测定法（2）超氧化物歧化酶的连苯三酚自氧化测定法（3）氯化高铁血红素的分光光度测定法五、其他类化合物的检测方法(1)(2)总蔥醌的分光光度测定法 几丁胺糖的脱乙酰度滴定法 总三萜的分光光度测定法第

2、一章概论（第3页）表1-1常见的保健食品的功效成分（标 志性成分）、保健功能及主要来源功效成分 （标志性成分）保健功能主要来源黄酮类 银杏黄酮、 山楂黄酮辅助降血脂、 提高缺氧耐受 力、抗氧化、增 强免疫力、保护 心血管系统、保 护脑神经系统银杏叶、山楂、 蜂胶、葛根、沙 棘、红花、荷叶、 甘草、桑叶、陈 皮、花粉、桑葚、 黄芪、淫羊藿、 鱼腥草多糖类 灵芝多糖、 香菇多糖缓解体力疲 劳、增强免疫 力、辅助降血 糖、辅助降血脂灵芝、香菇、 枸杞、银耳、灰 树花、人参、西 洋参、昆布、木 耳、山药、黄芪、 茯苓、猪苓、黄 精、苦瓜皂苷类 红景天苷、 人参皂苷缓解体力疲 劳、增强免疫 力、抗氧化、

3、抗人参、西洋参、 红景天、绞股蓝、 三七、山药、黄辐射、提高缺氧 耐受力、辅助降 血糖、保护心血 管系统芪、酸枣仁、桔 梗、远志、知母、 甘草、大豆、蒺 藜、太子参蔥醍类通便、美容、 减肥、增强免疫 力芦荟、大黄、 决明子、何首乌花青素抗氧化、增强免 疫力、抗辐射、 保护心血管系 统葡萄子、葡萄 皮、越橘、黑加 仑、玫瑰茄、甘 蓝、桑葚、紫甘 薯、茶叶三萜类 灵芝三萜、 角鲨烯抗氧化、增强 免疫力、抗辐 射、缓解体力疲 劳、辅助降血 脂、辅助保护化 学性肝损伤、改 善睡眠、改善记灵芝、赤芝、 紫芝（抱子粉）、 甘草、黄芪、人 参、泽泻、积雪 草、山楂、女贞 子、苦茶、五 味子、深海鱼油忆（金枪

4、鱼、沙丁 鱼、鲨鱼、鮭鱼）冗聚糖（几 丁聚糖）增强免疫力、 辅助降血脂、辅 助降血糖、辅助 保护骨粘膜虾、蟹壳的提 取物硫酸软骨素辅助降血脂、 增强免疫力、保 护骨关节、参与 制造骨骼动物的软骨（第73页）第三章 保健食品中功效成分的检测方法 第一节 多糖的检测方法一、粗多糖的苯酚一硫酸分光光度测定法1、方法提要多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖 及杂质的干扰，再与苯酚一硫酸作用成橙红色 化合物，其呈色度与溶液中的糖的浓度成正 比，在485nm波长下比色定量。4、测定步骤（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品1.02.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL 左右，与沸水浴中加热1小时（

5、如保健食品添 加的已是多糖提取物，则加热15min），冷却 至室温后补加水至刻度线（Vi）,混匀后过滤， 弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。在这里必须强调的是不少保健品添加了淀 粉、糊精，一定要做相应的处理，否则结果偏高。 添加淀粉的样品需加 a-淀粉酶及糖化酶（如葡 萄糖苷酶）处理。添加糊精的样品需加糖化酶（如 葡萄糖苷酶）处理。处理的原则是将这类非活性多糖的碳水化 合物全部酶解成单糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所 需的活性多糖以达到分离的目的。1）添加淀粉或淀粉+糊精的样品：可取50mL 样品提取液置于100mL具塞锥形瓶中，冷却 至60 C以下，力口 1mL10%淀粉酶液（Singma 公

6、司的液状淀粉酶可直接加 0.10.2mL ）和 0.5mL0.2M 磷酸盐缓冲液，加塞，至55 C60 C酶解1小时，再加适量的糖化酶（如葡 萄糖苷酶）（约为样液体积的1% ）于60 C以 下再水解60min后取出（用电业检验是否水 解完全，如不完全可延长水解时间至酶解液加 碘液不变蓝色为止），于电炉上小心加热至沸 （灭酶），冷却，定容，过滤，取滤液沉淀粗 多糖。2）添加糊精的样品：如上法处理（免加淀粉酶）（2）沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样 品）5.0mL （V2），置于50mL离心管中（或 2.0mL于15mL具塞离心管中），加入无水乙 醇20mL （或8mL ）,混匀，于4 C冰箱

7、静置4 小时以上，以4000r/min 离心5min，弃去上 清液，残渣用80% （V/V）乙醇溶液数毫升洗 涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。残渣 用水溶解并定容至1025mL （V3）（根据浓度 而定）。（3）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使 用液 0mL、0.10mL、0.20mL、0.40mLL、 0.60 mL、0.80mL、1.00mL （相当于葡萄糖 0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、 0.08mg、0.10mg ）置于25mL比色管中，补 加水至2.0mL,加入5%苯酚溶液1.0mL,在旋 涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10mL,在旋 涡混合

8、器上小心混匀，至沸水浴中 2min，冷 却至室温，用分光光度计在 485nm波长处以 试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。 以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标， 绘制标准曲线。（4）样品测定：准确吸取上液适量（V4）（含 糖0.020.08mg ）置于25mL比色管中，补 加水至2.0mL,然后按（3）法测定吸光度值。 从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算样品中粗 多糖含量。6、注释（1）本方法线性范围在 0.O1O.1mg/mL，线性 方程为 y=0.3095x+0.0004 , r=0.9989,若工作需 要标准曲线可延长至0.20mg/mL 。（2） 本法测定样品中多糖时，提取时间

9、以1小 时为宜，以免因提取时间过长引起糖结构变化甚 至使碳键断裂而导致所测多糖含量偏低。（3）比色法测定多糖并非特异性反应，本法灵 敏度高，出现测定结果平行性偏差较大，主要是 操作不够严谨所致，反复几次的沉淀、洗涤、弃 去上清液、样液的转移等都是造成测定结果偏差 的原因。实际操作时每个样品要多做几个平行样，并尽量取用几个近似值的均值报告结果。由不同材料组成的保健品所形成乙醇沉淀物的结 构也不同，用80%的乙醇洗涤沉淀物时（如在 15mL离心管中操作）可先加少量（0.5mL ）在 旋涡混合器或超声波振荡器中以增大撞击及分 散沉淀物的强度，尽量将沉淀物打散，然后再加 数毫升80%乙醇洗涤，对于一些

10、粘黏包裹状的 沉淀物，也可先加少量水溶解，然后再加80%的浓度洗涤，力求将附在沉淀物的杂质除去。（4）关于乙醇的浓度：由于保健食品组方的复 杂性，不同分子量得多糖所用的乙醇浓度沉淀效 果是不同的，通常使用 80%乙醇浓度不一定完 全使用于所有的保健品中粗多糖测定，最好能在 75%、80%、85%、90%、95%的乙醇浓度之间 做预实验以优选最佳的乙醇浓度。（5）关于酶解1）淀粉酶的水解具有专一性，她只水解淀粉而 不会水解其他多糖，在淀粉酶的作用下，使淀粉 水解成低分子糊精和麦芽糖，再在糖化酶（如葡 萄糖苷酶）的作用下变成葡萄糖。酶的用量应根 据酶的活力而定。2）糖化酶是几种酶的简称（学名 a-

11、1,4-葡萄糖 水解酶），包括葡萄糖苷酶、淀粉葡萄糖苷酶（简 称为葡萄糖苷酶）、普鲁兰酶。药用辅料的淀粉 一般都是直链淀粉，用a淀粉酶+葡萄糖苷酶（作 用于直链淀粉，1,4糖苷键）处理就可，如要作 用于支链淀粉，需同时加入普鲁兰酶（作用于1,6-糖苷键）才能完全变为葡萄糖。3）酶的活性对酶解的效果影响较大（6）多糖一还原糖换算系数0.9之解释（7）粗多糖测定最终报告结果要标示以葡萄糖 计或葡聚糖计，因两者测定值相差很大。（第82页）四、葡聚糖的分光光度测定法 本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构、 相对分子质量1*104以上的水溶性粗多糖的测本方法的最低检出浓度为5.0mg/L。1、方法提

12、要食品中相对分子质量大于 1*104的高分子物 质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和 低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他 高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯 酚一硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含 量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正 比，以此计算食品中粗多糖的含量。4、测定步骤（1）样品处理1）样品提取：称取混合均匀的固体样品 2.0g， 置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，与沸 水浴中加热2小时，冷却至室温后补加水至刻度 线,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供 沉淀多糖。2）沉淀粗多糖：准确吸取1 ）项终滤液5.0mL 或液体样品5.0mL，置于50m

13、L离心管中，加 入无水乙醇20mL,混匀5min后，以3000r/min 离心5min，弃去上清液，残渣用80% （体积分 数）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作34次。残渣用水溶解并定容至 5.0mL，混匀后供沉淀葡聚糖。3）沉淀葡聚糖：准确吸取 2）项终溶液2mL， 置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶 液2.0mL、铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸 2min，冷却，以3000r/min 离心5min，弃去上 清。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清 液，反复操作3次，残渣用10% （体积分数） 硫酸溶液2.0mL溶解并移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度线，混

14、匀。（2）标准曲线的绘制：准确吸取葡聚糖标准使 用液 0mL、O.IOmL、0.20mL、0.40mLL、 0.60 mL、0.80mL、1.00mL （相当于葡聚糖 0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、 0.08mg、0.10mg ）置于25mL比色管中，准 确补加水至 2.0mL,加入50g/L苯酚溶液 1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水 浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在 485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色 皿测定吸光度值。以葡聚糖质量为横坐标，吸 光度值为纵坐标，绘制标准曲线。（3）样品

15、测定：准确吸取样品测定液2.0mL， 置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液 1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水 浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在 485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色 皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡聚糖含 量，计算样品中粗多糖含量。同时做样品空白 试验。6、准确度与精密度在不同食品中进行不同浓度的加标回收试验，回收率为87.8%110.87%，不同实验室对 同一样品进行10此测定结果的相对标准偏差为 5.8%。7、注释本方法测定的水溶性多糖含有10个以上单糖残 基。经过五个检测单位的验证，本方法

16、所测定的结果 一葡聚糖计。（3）干扰因素试验证明，在样品中加入与粗多 糖灯亮的乳糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖 及2倍量得淀粉、糊精，不影响样品中粗多糖 的测定结果。但在测定过程中应避免糖和其他 碳水化合物的污染，因为苯酚一硫酸与糖和碳 水化合物起反应。（6）某些保健食品中功效成分为醇溶性多糖， 可参照本方法进行测定，但样品预处理时将乙 醇改为丙酮即可。（7）液体样品中粗多糖含量低时，可取样50.0mL加热浓缩至5.0mL后，再依法操作测(8) 洗涤粗多糖沉淀时，一定要将离心管壁上 玷污的其他糖分和碳水化合物用 80%乙醇洗 净，否则结果偏咼。&关于保健食品粗多糖测定方法分光光度法的 说明多糖

17、因单体组成、结构、聚合度、物化性质 等各异，故测定方法不同，此法适用于测定高分 子量的糖类物质(10000Da )多糖的定义是聚合度大于9的糖(第110页) 十一、硫酸软骨素的分光光度测定法 本方法硫酸软骨素的检出限为 0,01mg/L。1、方法提要结晶紫是一种阳离子染料，在酸性条件下带 正电荷，易与带酸性基团的生物大分子发生静电 作用而形成离子配合物，已用于脱氧核糖核酸、 干扰素等的分光光度法分析。结晶紫结构中的氨 基带正电荷，硫酸软骨素的磺酸基和羧基带负电 荷，两者通过静电引力和输水作用力形成络合 物，产生变色效应，吸光度降低。吸光度的降低 量与硫酸软骨素含量线性相关。4、测定步骤（1）样

18、品处理：精密称取内容物 25mg，置于 100mL量瓶中，加水适量，超声处理 10min , 加水定容至100mL,过滤，取续滤液4mL,置于 100mL量瓶中，加水至刻度，得样品溶液。（2）分光光度法测定：取供试品溶液 1mL，置 于10mL具塞刻度试管中，加入pH5.0的醋酸 醋酸钠缓冲液1.0mL和结晶紫并粗三溶液 0.6mL，加水至10.0mL，摇匀，30 C水浴保温 20min,放至室温。以水为参比，于 588nm波长 下测定吸光度。6注释硫酸软骨素是提取于动物软骨的黏多糖类物质， 在心血管疾病、关节病的防治等方面具有重要作 用。硫酸软骨素除了作为药用品外， 大量的是作 为改善关节病

19、的补充品，作为健康食品应用，在 美国已经风行多年，经过多年的应用，已经证明 硫酸软骨素对改善老年退行性关节炎、风湿性关 节炎有一定的效果。（第113页）第二节皂苷类化合物的测定方法 一、总皂苷的分光光度测定法1、方法提要样品中总皂苷经提取、PT大孔吸附树脂柱 预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生 成有色化合物，以人参皂苷 Re为对照品，于 560nm处比色测定。4、测定步骤（1）样品处理1）固体样品：称取1.0g左右样品置于100mL 烧杯中，加入2040mL85%乙醇，超声波振荡 30min，再定容至50mL,摇匀，放置，吸取上清 液1.0mL,挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。2）液体

20、样品：含乙醇的酒类样品：准确吸取 1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣， 用此液进行柱层析。非乙醇类液体样品：准确吸 取1.0mL样品（如浓度高或颜色深，需稀释一 定体积后再取1.0mL ），直接进行柱分离。（2）柱层析：以PT大孔吸附树脂柱进行层析 分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液 1.0mL 上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂 质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂 苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以 此作显色用。（3）显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使 残渣溶解，再加入0.8mL高氯酸，混匀后移入 1

21、0mL比色管中，塞紧盖子，于 60 C以下水浴 加温15min取出，冷却 后准确加入 冰乙酸 5.0mL，摇匀后以1.0cm 比色皿与560nm 处与 人参皂苷Re标准管同时比色。（4）标准曲线绘制：人参总皂苷浓度在40200卩g/mL之间与吸光度 值呈线性关系，相关系数（r） 0.999.6、注释回收率：90%105%。（第122页）第三节黄酮类及苷类化合物的检测方法一、总黄酮的分光光度测定法本方法总黄酮检出限为3.5卩g/mL。1、方法提要黄酮类化合物是具有苯骈吡喃环结构的一类 天然化合物的总称，一般都具有4位羰基，且呈 黄色。黄酮类化合物多分布于植物中，大多数以 苷的形式存在。黄酮类化合

22、物中的3-羟基、4-羟基或5-羟基或邻二位酚羟基与铝盐进行络合 反应，在碱性条件下生成红色的络合物。4、测定步骤（1）样品处理1）固体样品：称取12g干燥的固体样品，用 滤纸包紧，置于平底烧瓶中加入50100mL70% 乙醇溶液，浸润后，在80C水浴下回流2h，至 黄酮类化合物基本提取完全。粗提取液冷却后，减压抽滤，并用少量 70%乙醇溶液洗涤残渣， 合并滤液。在50 C下减压蒸馏，除去其中的乙 醇，直至烧瓶内溶液呈无醇味。倒数烧瓶内溶液， 并用30mL热水分3次洗涤烧瓶，抽滤后，将滤 液导入分液漏斗中，以75mL氯仿分3次萃取脱 脂，待完全分层后，收集下层水溶液并定容至 50mL。称取12g

23、经预处理的聚酰胺树脂粉末，湿法 装柱，用水饱和。吸取上述脱脂后的水溶液 12mL，沿层析柱慢慢滴入柱内，放置一定时间， 待测液被充分吸附后，用70%乙醇或甲醇洗脱， 流速为1.0mL/min,至流出液基本无色，一般收 集10mL即可。上述洗出液用洗脱剂（70%乙醇 或甲醇）定容后即可用于测定。2） 液体样品：准确吸取样品 3.0mL，定容至 50mL后，直接以75mL氯仿分3次萃取脱脂， 其余步骤同上。(2) 标准曲线的绘制：准确吸取芦丁标准溶液0mL、0.50mL、I.OOmL、2.00mL、3.00mL、 4.00mL (相当于芦丁 0 yg、75 yg、150 yg、 300 yg 45

24、0 yg、600 yg),分别移入 10mL 刻 度比色管中，加入30%乙醇液至5mL,各加5% 亚硝酸钠溶液0.3mL，振摇后放置5min，加入 10%硝酸铝溶液0.3mL,摇匀后放置60min，加 1.0mol/L氢氧化钠溶液2mL,用30%乙醇定容 至刻度，以零管为空白，摇匀后用1cm的比色皿，在510nm处测定吸光度，绘制芦丁含量(y ) 与吸光度的标准曲线。(3) 样品测定：根据样品中总黄酮含量高低， 取适宜体积待测液，按标准曲线制备操作步骤与 510nm处进行吸光度的测定(样品如有沉淀， 应过滤后测定)。芦丁浓度在0.00750.060mg/mL范围内呈直 线关系。6、注释(1)

25、方法精密度：对同一样品在相同条件下， 重复测定6次，其相对标准差为4.4%。(2) 方法回收率：对总黄酮含量为 1.52%的减 肥茶加入相似浓度的芦丁标准品进行回收试验， 其平均回收率为103.2%。（3）对于以葡萄、山楂等有色水果味原料的样 品，可用未加铝盐试剂的样液为空白或采用标准 加入法进行测定，以避免样液颜色对测定干扰而 引起结果偏咼。（第 131 页）六、原花青素的分光光度测定法 本法适用于各种植物组织、器官及其制剂（如葡 萄子与松树皮提取物）中原花青素含量的测定。1、方法提要原花青素（也称缩合单宁）是黄烷一3醇的 寡聚体与多聚体，属多份类化合物。与其他酚类 化合物不同，黄烷醇（缩合

26、单宁、单体、双体等） 在酸性介质中可与香草醛反应，生成在500nm处有最大吸收的有色物质，可通过比色测其含 量。如无提纯的原花青素，可用儿茶素代替4、测定步骤（1）样品中原花青素液的制备：植物材料经4倍体积丙酮+水（7+3，体积比）或者经60%甲 醇提取，40 C以下减压蒸馏去除有机溶剂，水相 再经乙醚洗涤后沉淀。冰冻干燥的固体原青花素制剂，直接溶于水中(先加少量甲醇助溶)，制成原青花素液。原青 花素液与5C下暗环境中保存备用。(2)样品测定：用锡箔将试管(14mm*120mm ) 包裹严，仅留试管口用于加样。向管内加入试样 0.5mL，再加3.0mL4%香草醛甲醇液混合，然 后加入1,5mL

27、浓盐酸，彻底混匀，室温下显色 15min，也可在暗环境下进行以上操作。最后在 500nm 处比色。(0.1mg原花青素在 500nm处的吸收值为0,55)6、注释(1 )本方法的检测范围为(5500 ) *10-3mg/0.5mL 样液。精密度与准确度大于 1*10-3mg。(2) 反应试管应用清洁剂浸泡24小时，彻底洗 涤干净。(3) 进行比色时，用水作空白对照。(4) 500nm 处的OD值应控制在3以下。(5) 试样中花青素含量较高时，应从香草醛存 在下所测A500nm值中减去无香草醛时所测值。（6）显色液应避光放置。（第133页）七、花青素的铁盐催化比色测定法1、方法提要原花青素氧化后

28、能生成红色的花青素。通常 用铁盐催化比色法测定总量，利用硫酸高铁铵的 催化作用，以盐（OD550）,与原花青素化学对照 品比较，便可定量计算出样品中原花青素的含 量。4、测定步骤（1 ）标准曲线的绘制：分别移取上述不同浓度系 列使用液I.OOmL置于10mL刻度试管中，加入 9mL上述反应混合液，置于沸水与中加热，待 水浴温度恢复至（99+1 ）C时开始计时，并塞 紧塞子（勿摇匀），准确加热40min后，立即取 出，用冰水快速冷却至室温，以正丁醇定容至刻 度线，塞紧后充分摇匀，在 550nm处以空白管 调零扣除背景，测定吸光度值 OD550，并以最小 二乘法绘制原青花素浓度（ag 吸光值OD5

29、50 曲线。（2）待测样品液的制备：准确称取胶囊内容物 0.51.0g，加污水乙醇（遇醇溶性较差的样品， 可加入少量的蒸馏水促进溶解），溶解（对于软 胶囊取整粒称重后再用小刀割破，用超声波以乙 醇多次提取），定容至100mL,摇匀，即得到样品 储备液。再移取0.51mL储备液（根据提取物 浓度高低确定具体的量，使待测液原花青素浓度 在0.050.20mg/mL 范围内）定容至50mL,摇 匀得到待测样品液。（3）样品测定：移取1.00mL待测液依照上述 标准曲线绘制同样操作，测定 OD550，查标准曲 线，并计算原花青素的含量。6注释（1）线性范围：本法原花青素浓度在 26.00416.0 y

30、g范围内，最低检出限为4g。（2）准确性：添加浓度为 52.00208.0 yg的标 准（OD550在0.1570.520范围内），3次测定 平均回收率在90.64%109.5%。（3） 精密度（重现性）：同一样品液8次测定， 相对标准差为2.13%2.98%。干扰物质：常见的维生素，芦丁、类胡萝卜 素、食品抗氧化剂、各类油脂基体未见明显干 扰，由于多糖、蛋白质不溶于无水乙醇，故不 会干扰测定。（第 151 页）第四节 酶、激素及内源性物质的检测方法 七、氯化高铁血红素的分光光度测定法 本方法氯化高铁血红素的最低检出浓度为0.15 ygmL。1、方法提要氯化高铁血红素是以新鲜猪血经冰醋酸法 提

31、取加工而成的动物性补铁剂，能被人体黏膜上 皮细胞分解为原卟啉及二价铁，从而进入血液被 机体吸收和利用。氯化高铁血红素制品以氢氧化 钠溶液溶解和定容后，以1cm比色皿于波长385nm处进行检测，与标准品比较进行定量。 4、测定步骤（1）样品处理1）固体样品（胶囊或片剂）：准确称取一定量样 品，一边研磨，一边加入 O.1mol/L氢氧化钠， 使氯化高铁血红素充分溶解（注意不能加热溶 解，否则引起结果偏咼），定容后备检测。2）液体样品：摇匀后准确吸取一定量样品，用 0.1mol/L氢氧化钠稀释后待测定。（2）标准曲线绘制：准确称取经 105 C干燥至恒重的氯化高铁血红素标准品10.00mg，用O.1

32、mol/L 氢氧化钠充分溶解并定容至 100mL, 容量瓶中。吸取此储备液 10mL，加于100mL容量瓶中，加入0.1mol/L氢氧化钠定容至刻度， 摇匀，配成10 agmL的标准使用液。分别准确吸取标准使用液 0mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL至10mL比色刻度试管中，力口0.1mol/L氢氧化钠至刻度，以零管作空白调零， 于385nm处测定吸光度，并绘制氯化高铁血红 素含量一吸光度标准曲线。氯化高铁血红素浓度在1.27.0 ygmL范围内 吸光度与浓度呈直线关系(3) 样品测定：取上述样品处理液依照标准曲 线操作步骤测定385nm处的吸光度值，依据标 准曲

33、线查得氯化高铁血红素含量。(第201页)第九节、其他化合物的检测方法四、总蔥醌的分光光度测定法1、方法提要蔥醌类化合物经酸水解用氯仿提取后，再用稀碱 液萃取，与1,8二羟基蔥醌对照品比较，在分光 光度计530nm处比色定量。4、测定步骤（1 ）样品处理：准确称取均 匀的样品粉 末0.52g或适量，液体样品可取10mL左右（视 含量而定），置于200mL带冷凝管的锥形瓶中， 加5mol/L硫酸40mL，加热回流水解2小时， 稍冷后加氯仿30mL，水浴加热回流1小时，分 离出氯仿液，再加氯仿 30mL，加热回流水解 30min，分离出氯仿液，再加氯仿20mL，如此 反复，提取至氯仿无色位置，收集氯

34、仿提取液过 滤，将滤液移至容量瓶中，用氯仿定容至刻度（Vi）,摇匀，精密吸取一定量（10mL左右）（V2） 置分液漏斗中，用混合碱液（每次 5mL ）萃取 至无色，将萃取液移至50mL量瓶中，用混合碱 液调至刻度。6、注释（1）总蔥醌包括游离蔥醌和结合蔥醌，游离蔥 醌测定，样品直接用氯仿提取至无色，再用混合 碱液多次萃取氯仿提取液制得供试品溶液，而结 合蔥醌测定系先用5mol/L的硫酸水解，再用氯 仿提取，再用混合碱液多次萃取氯仿提取液质的 供试品溶液。（2）本方法线性范围为0.1160.580mg/mL（3）本方法的平均回收率为97.0% （n=3 ）。(4) 精密度 RSD=1.2% (n

35、=5 )。(5) 比色时注意比色液中是否混有氯仿微粒的 干扰，而影响测定结果。(第224页)十四、几丁胺醣的脱乙酰度滴定法1、方法提要几丁胺醣又称壳聚糖、脱乙酰甲壳素、甲 壳胺，由甲壳素在 80C120 C下经强碱长时 间脱去乙酰基而得到，化学名称为(1,4) -2- 氨基-2-脱氧-3 -D葡聚糖。脱乙酰度为鉴定几 丁胺醣纯度的重要指标。利用几丁胺醣呈弱碱 性的特点，用过量的盐酸中和溶解，再以甲基 橙为指示剂，以氢氧化钠滴定中和剩余的盐 酸，可间接测定几丁胺醣消耗盐酸的量，从而 计算出其脱乙酰度。4、测定步骤准确称取0.25g几丁胺醣样品，置于100mL 烧杯中，加入0.1mol/L盐酸40mL，在室温下 用平头玻棒捣碎试样，并搅拌使其充分溶解，放 置2小时，加一滴0.1%甲基橙作指示剂，用 0.1mol/L氢氧化钠滴定至红色刚好消失，保持 1min，计算消耗的氢氧化钠标准溶液的体积。注：平行测定结果不大于 0.2%，计算结果精确 至小数点后一位。（第231页）十八、总三萜的分光光度测定法 本方法适用于灵芝