不同稀释液对血清中HBsAg定量测定的影响

1、文档收集于互联网，已重新整理排版.word版本可编借，有帮助欢迎下载支持. 不同稀释液对血清中HBsAg定量测定的影响 作者：胡伟，毕永春，宋景秋，戴蕾 【摘要】目的：探讨不同稀释液对血清中高浓度HBsAg测定结果 的影响。方法：将11例HBsAg高值的乙肝患者血清分别用HBsAg专用 稀释液、生理盐水、混合低值血清及蒸憎水稀释，然后用ARCHITECT 12000SR化学发光分析仪测定其HBsAg值。结果：用生理盐水和蒸饰 水稀释的血清标木测得的HBsAg值与用专用稀释液稀释后测得的 HBsAg值比较存在统计学差异，而混合低值血清与专用稀释液所测值 相比较差异无统计学意义。结论：除专用稀释液

2、外，混合低值血清可 以用于ARCHITECT 12000SR化学发光分析仪测定高浓度HBsAg的替代 稀释液，而生理盐水和蒸饰水不能用作稀释液测定高值HBsAgo 【关键词】乙型肝炎表而抗原；稀释液；化学发光免疫法 Abstract Objective： To explore the influence of the different diluents to hepatitis B surface antigen(HBsAg) in human serum. Methods: 11 hepatitis B patients寵 serum with high concentration of

3、HBsAg were selected, then diluted with specialized diluents, low serum, normal saline and distilled water respectively, the content of HBsAg were detected by Arch it ect i2000SR immunoassay analyzer Results: Serum specimen of HBsAg diluted with normal saline or distilled water had difference compare

4、d to specialized diluents group(P005), while there was no significance in determination of HBsAg 1文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑. 文档收集于互联网，已重新整理排版.word版本可编借，有帮助欢迎下载支持. diluted with low serum comparing with specialized diluents group(P0. 05). Conclusion: The low serum can be a substitute for specialized dil

5、uents to Architect 12000SR immunoassayanalyzer while the normal saline and distilled water can not. .Key words hepatitis B surface antigen; diluents; chemiluminescence immunoassay 我国是乙型肝炎病毒(hepatitis B Virus, HBV)感染的高发 区，HBV感染的诊断主要依赖于患者血清中病毒标志物和病毒核酸 (HBV DNA)的检出。乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,

6、 HBsAg)是HBV表而的外膜蛋白，由病毒S基因编码，在病毒感染肝细 胞过程中起重要作用。最近一些研究证明HBsAg和HBV DNA水平之间 有良好的相关性1-2,定量检测血清中HBsAg可以反映宿主体内HBV DNA的水平，对评价抗病毒药物治疗的疗效和判断预后有重要意义 3 ,同时对于一些HBV DNA呈阴性的慢性乙肝患者，血清中HBsAg 的含量就为临床医生的诊断及治疗提供了良好的依据。目前，我院采 用ARCHITECT 12000SR化学发光分析仪对血清中的HBsAg进行定量检 测。临床上有些乙肝患者HBsAg定量测定结果超出该仪器所能检测的 线性范围，为了得到准确、可靠的实验结果，帮

7、助临床医生更好地了 解疾病进展，常需要对高浓度HBsAg血清进行稀释后再测定。 1材料和方法 1. 1血清标木 筛选收集乙肝患者血清HBsAg定量250 IUml-1的标木 血清，标木来源于南京市鼓楼医院门诊。标木要求无明显溶血、脂血。 1.2混合低值血清制备 收集木院住院病人中乙肝两对半定量结果全阴性的血清标 本，混匀后2 000 rmin-1离心取其上清液（经检测HBsAg为0. 02 IU nill）。 1. 3仪器与试剂 美国雅培公司生产的ARCHITECT 12000SR全自动化学发光仪 及配套试剂（含HBsAg专用稀释液）、生理盐水、蒸镯水、自制混合低 值血清等。 1.4实验方法

8、将不同患者的高浓度HBsAg血清（250 IU ml-1）分别用 专用稀释液、生理盐水、混合低值血清及蒸懈水按照1 : 100的比例（5 U 1.血清加入495卩1稀释液）稀释,充分混匀后取双份上机检测HBsAg 含量。操作步骤严格按说明书进行，测定在1 h内完成。 1. 5统计方法 用Microsoft Excel系统对数据进行分析，组间比较用配对t 检验，P0. 05为差异有统计学意义。2结果 高值HBsAg血清标木分别用HBsAg专用稀释液、生理盐水、 混合低值血清及蒸憎水按照1 ： 100比例稀释后经ARCHITECT 12000SR 化学发光仪测HBsAg浓度值，结果见表lo表1高浓

9、度HBsAg用不 同稀释液稀释后的测定结果及偏差注：上述测定值均为稀释后的测定 值，实际值二测定值X100生理盐水和蒸憎水作为稀释液后的测定值与 专用稀释液稀释后的测定值相比，P0. 05,有统计学差异，所以在 日常检测中，不能用生理盐水或蒸憎水作为化学发光免疫分析法测定 HBsAg的稀释液;而混合低值血清稀释后的测定值与专用稀释液相比 偏差较小，P0. 05,差异无统计学意义，故混合低值血清可以作为 替代稀释液用于化学发光免疫分析法测定HBsAgo 3讨论 雅培ARCHITECT 12000SR全自动免疫分析仪核心技术为化学 发光微粒子免疫分析(chemiluminesent micropa

10、ticle immunoassay), 以叮叮酯作为标记发光剂，主要用于测定蛋白质、病毒抗原等大分子 物质，试剂具有极高的灵敏度、特异性和稳定性。它对HBsAg的可测 范围是0250 IUml-1,而临床上有些血清的HBsAg往往超出了该 检测范围，所以需要稀释后再测定，但是由厂家提供的专用稀释液价 格相当昂贵且保存有效期很短，有时会有供货不及时或稀释液超过有 效期的情况发生。木研究通过用生理盐水、混合低值血清、蒸憎水作 为稀释液来稀释高浓度的HBsAg血清，旨在探讨三者对血清HBsAg测 定的影响，以期选择出合适的稀释液来代替专用稀释液。免疫反应体 系中的蛋白分子种类及含量、pH值、离子强度

11、对免疫反应木身有较大 影响。待测血清经稀释后如果反应体系发生明显变化，则会影响检验 结果的准确性4。 通过这3种稀释液分别对11份不同乙肝患者血清稀释后进行 测定，比较偏差计算结果发现用生理盐水及蒸憎水稀释后测得的结果 都偏高，均存在明显偏差，分别为-2. 05%157.81%、-16. 32% 313. 64%,而用混合低值血清稀释后的偏差为-35. 03%32. 60%,与专 用稀释液稀释后测定值比较，差异无统计学意义。可能因为低值混合 血清的蛋口质、pH值、离子强度和其他血清成分与样木血清基本相近, 因此其测定结果偏差最小。因只对较高浓度HBsAg的血清标本(一般 250 IU-ml-1

12、)进行稀释，所以用混合低值血清稀释测定的偏差并 不影响对HBsAg定量结果的阴阳性判定，仅对其高浓度的值有所影响, 而这个结果应该是可以接受的。生理盐水的离子强度、pH值与血清相 近，但缺乏蛋白质和血清成分，所以测定结果偏差较大。而蒸憎水与 血清相比在蛋白质、pH值方而均相差较大，不适宜作为免疫反应的血 清稀释液，这与丁忠旗等5-7研究结果一致。考虑到胎牛血清在离子 强度、pH值方而与人血清接近，另选取5份高浓度HBsAg的血清标本 稀释后进行比较，发现与专用稀释液比较偏差亦较大，可超过100%(结 果未在表1中列出)，可能是胎牛血清中所含蛋白种类和人血清相比有 一定差异，对整个反应体系有影响

13、所致。 木实验结果表明，雅培ARCHITECT 12000SR全自动免疫分析 仪在测定HBsAg浓度时，如遇到超岀仪器线性范围(250 IU inl-1) 的标本需进行稀释，除专用稀释液外，低值血清可以作为替代稀释液 使用，以测定高浓度HBsAg的实际值来观察患者病情及转归。 【参考文献】 1孙长义，王山梅.乙肝病毒标志物与PCR拟HBV定量水平的 关系J.中国公共卫生,2002, 18(12):1480拟1481. 2侯远沛，宋丽.乙型肝炎标志物定量检测结果与 HBV拟DNA含量相关性分析J.实用医技杂 志，2004, 11(10) :2112拟2113. 3 陈祥胜，廖雯君.乙肝HBsAg定量检测的临床诊断意义 J湖北中医学院学报,2009, 11 (2) : 21拟23. 4 高云朝，杨亚东，陆汉魁.稀释介质对化学发光免疫分析 检测血清HCG的影响J.标记免疫分析与临床,2007, 14(2) :