血尿液淀粉酶AMS两点法测定

1、血、尿液淀粉酶（ AMS两点法测定1. 实 验 原 理Vitros AMS 试 剂是一 种干燥 ，多涂 层的 ，在聚 合物支 撑基片上涂 有分析 成份的化学干片。将 一 滴 10ul 的 患 者 样 品 滴 于 干 片 上 ，样 品 就 被 分 布 层 均 匀 地 分 布 并 渗 透 到下面的试剂层。分布层含有反应所需的染色淀粉底物（与支链淀粉共价化 合 ），样 品 中 的 淀 粉 酶 催 化 该 染 色 淀 粉 水 解 成 更 小 的 有 色 糖 。随 后 这 些 有 色 糖 进入下面的试剂层。分别在孵育 2.3 分钟和 5 分钟时用反射仪测定试剂层中 有色糖的反射强度，两次读数间的差值与样

2、品中的淀粉酶活性成正比。 测定方式：两点法 波长 ： 540nm测试时间和温度：37 C约5分钟反应过程：淀粉酶染色支链淀粉 有色糖2. 标 本 ：2.1 病 人 准 备 ： 无 特 殊 。2.2 样品类型： 血清；肝素锂/钠抗凝血浆。定时 收集的，稀释后的尿样。2.3 标 本 采 集 与 处 理 ：2.3.1 血 清 和 血 浆 样 品血浆中淀粉 酶活性约比血清中高 20U/L 。不能使用钙螯合物作抗凝剂， 如草酸，枸橼酸和EDTA。样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。处理 样品 时要将其当成生物污染品 。2.3.2 尿液样品 定时 或随时 采集的尿液， 特别要注意的是： 含有 冰醋酸

3、， 浓 盐酸或者防腐剂中有 乙二羟化四甲铵和 氧化汞的样品 不能测 淀粉酶。 尿液样 品在测试前要冷藏在28C。处理样品时要将其当成生物污染品。3. 标本的存放：血清、血浆、尿液室温下最多7天；48 C冷藏最多1个月； 样品 不可冷冻保存。4. 标 本的 运输： 样品 要放在 带盖的 容器内 以防污 染和 蒸发。5. 标 本拒收的标 准：污染 、抗凝剂、防腐剂不符合要 求，标 本放置时 间过长。6. 试 验 材 料 ：6.1 测试AMS所需的物品包括：Vitros 化学定标物Kit3 ; Vitros 特制质控 液； Vitros 7%BSA 稀 释液 。强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标

4、明了测试项目名称，试剂标 签代码，有效期限和储藏温度。6.1.1 试 剂 组 成 ：干 片 成 分 ：反 应 成 份 是 染 色 支 链 淀 粉 。其 它 成 份 有 染 色 剂 ， 粘合剂，缓冲剂，表面活性剂，稳定剂和媒染剂。干片标记：试剂盒外包装 上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.2 试 剂准备 从 冰箱中 取出干 片盒 ，在将 干片盒 打开封 装并 装入仪 器 内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态1828 C。因此从冰箱中取出的 试剂盒至少要在室温下要放置 60 分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置 30 分钟。 去除内包装后立即将干片盒放入仪器的储藏器

5、中。 说明：在试剂盒 达到室温后的 24 小时之内必须将其装入仪器中。6.1.3 试 剂 稳 定 性 与 贮 存未开封的干片盒：存储在-18 C或低于该范围。在机内干片储藏器中的干片盒： 在仪器上放置时间不能超过 2 周，否则 要更换新试剂。 当仪器关闭时间不超过 2 个小时时，可将干片盒留在储藏器 中 。 出 现以下情 形要 做质控检测： 仪器关 闭时 间超过 2 小 时；再 次装载从仪 器储藏器中取出 的干片盒。 如果储藏正确， Vitros AMS 干片可保质到包装盒 上标明的有效期限。参见 VITROS 250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP 文件。6.1.4 变质指示： 超过有

6、效期的试剂干片不能使用。6.1.5 注意事项： 为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒； 不要让尖利物刺 入内 包装。6.2 校准品： 用 Vitros 化学定标物 Kit 3。 血清、血浆、尿液都用相同的定标 液 ，不 过 各 自 的 SAVs 值 不 同 。有 关 标 准 液 的 配 制 ，使 用 及 保 存 的 配 制 ，保 存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品：使 用 Vitros 特制的质控物品；若使用其它的一些质控物品，当 与别的AMS测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制 成的质控物品；含有高

7、浓度防腐剂， 稳定剂和其它化学添加剂的质控物品； 猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低， 还会因测试方法不同而变化；酶的活 性可能会由于酶源，稀释温度和复溶活化时间不同而发生变化;乙烯乙二醇作 稳定剂质控物品不能使用。有关质控液的配制， 保存和稳定的详情， 可参阅 VITROS250 干化学分析 仪校准品和质控品.SOP文件。7. 仪 器美国强生厂 家 VITROS250 全 自动干式生 化分析 仪。具 体测试程序 请参阅 操作手册的介绍。8. 操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪 器 5分后自动打印 结果。具体测试程序请参阅VITROS250操作手册.SOP o具体定标程序：参阅 操

8、作手册的相关章节内容。 何时进行定标： 在维护和保养时更换了仪器 的重要部件。 质控结果持续超出线性范围内时，详情参阅操作手册。 管理条例上指定的时间，在美国，CLIA要求至少每6个月定标一次。9. 检 验 结 果 的 判 断 与 分 析10. 质 量 控 制 ： 操 作 建 议 ： 将 质 控 物 质 当 成 生 物 污 染 品 来 处 理 ； 将 质 控 液 与 患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质 控浓度来检查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。 有关质控操作的常规性条例可参照国际质控检测（IQCT）的内容。在每一批 标本中都应把质控血清

9、作为未知标本进行分析， 以 2S 为质控警告限， 3S 为 失控限， 绘制质控图， 判断是否在控。 质控规则参见生化室室内 质控操作规 程 .SOP 文 件 。11. 计算方法：以用 Vitros 化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围 内， 仪器直接报告可靠的检测结果， 以 U/L 报告。12. 参考值范围国际单位（U/L）血 清 30-110血浆比血清 高约 20尿液（随机尿样） 32-6411 岁以下儿童比 成人低 。此参考范围是测试 98 位健康成人，然后取靶值附近 95%的结果计算所得。 参考值因性别、年 龄、饮 食和地域的不同而有所差别。根 据好的实验室经验， 每个实验室应建立

10、自己的参考值。13. 临 床 意 义 ： 淀 粉 酶 是 淀 粉 分 解 和 消 化 酶 ， 由 胰 腺 和 唾 液 腺 产 生 。 急 性 胰 腺炎， 胰腺溃疡或假（性） 囊肿， 胰腺创伤， 淀粉样变， 胆总管阻塞和胸部 手术后， 会使淀粉酶增加。 流行性腮腺炎和肾功能不全也可能导致淀粉酶活 性升高。14. 操 作 性 能14.1 线 性 范 围 ： 血 清 / 尿 液 ： 30-1200U/L 。14.2 精密度： 在 Vitros 250 生化仪上用质控液来测精密度。 结果反映了该 方法的精密度。 当仪器维护， 周围环境， 干片处理和保存， 质控液的复溶以 及样品处理等方面发生变化都会影

11、响结果的重复性。日间精密度xsCV室间精密度xsCV血清(U/L)(U/L)(%)n=20 天(U/L)(U/L)(%)样品1 n=79822.3样品1822.73.3样品2 n=784504.6样品24508.11.8日间精密度xsCV室间精密度xsCV尿液(U/L)(U/L)(%)n=22 天(U/L)(U/L)(%)样品1 n=88500.7样品1501.12.2样品2 n=841211.6样品21211.61.3*日间精密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对测试结 果进行统计计算。*室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进 行统计计算。14.3 方法学比

12、较：用Vitros700 仪器和对硝基苯酚法参考方法 分别测试相同血清样品，对比结果显示 Vitros 方法的准确度良好。用 Vitros250 仪器与Vitros700 仪器测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示 Vitros250 方法的准确度良好，血清：Y=0.99X+5.4（ r=1.0，N=85，检测范围 20-1039U/L）;尿液：Y=1.01X+7.6（ r=0.998，N=39，检测范围 25-1103U/L）。14.4 灵敏度：本试剂的检测下限为血清、尿液均为30U/L。14.5 特异性：经测试，以下物质对Vitros AMS干片法均无干扰（偏差300U/L 时，在经过复查等确认手段处 理后应及时向临床主管医生汇报。17. 方 法局限 性17.1 本 法 线 性 上 限 血 清 、 尿 液 为 1200U/L 。 血 清 和 血 浆 ： 如 果 是 脂 血 标 本 或 淀粉酶的活性超出系统的测试线性范围，可按下列步骤进行稀释：淀粉酶活 性低的脂 血标本用 Vitros 特制稀释液或生理盐水配制 的 2%牛血清白 蛋白 （ PH7.4 ）进 行稀释。说 明：用 Vitros 特制稀释液时先按 1：1 的比例稀释样 品，结果乘以 2。重新 测试。17.2 干扰物质：不确定。有些药物和患者的自身状况也会影响AMS的测试值。18. 补 救